中藥制劑的含量測定ppt課件

1、暖了，花開了，碧水庭院，該買了！工作在繁華都市，居住，我更喜歡安靜點的地方喜歡那種離塵不離城的悠然空間，那種繁華之外的寧靜生活在春暖花開的日子，在民心河畔邂逅碧水庭院，多年的居住理想，從此，有了清晰的圖象第四章第四章 中藥制劑的含量測定中藥制劑的含量測定目 錄2 供試品溶液的制備供試品溶液的制備3 3 常用定量分析方法常用定量分析方法1 1 概述概述1 1 概述概述二、特點：單一成分二、特點：單一成分 君藥、貴重藥、有毒藥君藥、貴重藥、有毒藥一、目的：一、目的： 控制制劑的質(zhì)量，控制制劑的質(zhì)量，保證臨床用藥的保證臨床用藥的 平安、有效平安、有效2 供試品溶液的制備供試品溶液的制備最大限度地保留

2、被測定組分，最大限度地保留被測定組分，除去干擾物質(zhì)，除去干擾物質(zhì)，將被測組分濃縮至最小檢測限將被測組分濃縮至最小檢測限準(zhǔn)繩準(zhǔn)繩粉碎：目的：粉碎：目的：樣品均勻；樣品均勻；充分提取充分提取提取：關(guān)鍵是提取完全提?。宏P(guān)鍵是提取完全除雜：關(guān)鍵是不損失待測成分除雜：關(guān)鍵是不損失待測成分濃縮：達(dá)到檢測限濃縮：達(dá)到檢測限衍生化：定量反應(yīng)衍生化：定量反應(yīng)步驟步驟供試品溶液的制備供試品溶液的制備關(guān)鍵的兩步關(guān)鍵的兩步供試品溶液的制備供試品溶液的制備樣品的提取樣品的提取 冷浸、回流提取、索氏提取、升華、冷浸、回流提取、索氏提取、升華、 超聲提取、超臨界流體萃取超聲提取、超臨界流體萃取樣品的凈化樣品的凈化 液液-

3、-液萃取法、色譜法、沉淀法、液萃取法、色譜法、沉淀法、 升華法、消化法、升華法、消化法、 鹽析法、鹽析法、 水蒸汽蒸餾法水蒸汽蒸餾法索氏提取索氏提取回流提取回流提取特點：無需過濾特點：無需過濾 、提取效率高、提取效率高、所需溶劑少、提取雜質(zhì)少。但所需溶劑少、提取雜質(zhì)少。但費時、提取不完全費時、提取不完全 特點：對熱不穩(wěn)定或具有揮發(fā)性的成分不特點：對熱不穩(wěn)定或具有揮發(fā)性的成分不宜使用。提取完全，快速。宜使用。提取完全，快速。提取方法提取方法回流瓶，回流瓶，0.52h索氏提取器，索氏提取器，58h浸泡過夜浸泡過夜揮發(fā)性成分揮發(fā)性成分20min特點：快速、低溫、省時，提取完全特點：快速、低溫、省時，

4、提取完全特點：操作簡單，適于熱不穩(wěn)定的樣品，特點：操作簡單，適于熱不穩(wěn)定的樣品，且提取雜質(zhì)少。少有于定量分析。且提取雜質(zhì)少。少有于定量分析。提取方法提取方法冷浸冷浸水蒸氣蒸餾水蒸氣蒸餾超聲提取超聲提取例：例：P9091本科教材）本科教材） 精密稱取精密稱取，準(zhǔn)確加入甲醇，準(zhǔn)確加入甲醇50ml50ml，稱重，超聲提取，稱重，超聲提取30min30min，放冷，放冷并再次稱重，用甲醇補足其重量并再次稱重，用甲醇補足其重量特點：計量關(guān)系準(zhǔn)確特點：計量關(guān)系準(zhǔn)確注明超聲波的頻率、功率，以保證重注明超聲波的頻率、功率，以保證重現(xiàn)性現(xiàn)性最常用的提取方法最常用的提取方法HPLC）供試品溶液的制備供試品溶液的制

5、備常用溶劑：正丁醇、氯仿、常用溶劑：正丁醇、氯仿、 EtOAc、乙醚、乙醚多次萃取多次萃取3-53-5次）次）調(diào)整水相酸度，提取有機(jī)酸、有機(jī)堿調(diào)整水相酸度，提取有機(jī)酸、有機(jī)堿利用鹽析作用，減少乳化利用鹽析作用，減少乳化凈化方法凈化方法液液-液萃取法液萃取法例：例：P69離子對萃取法：生物堿離子對萃取法：生物堿 P125溴百里酚藍(lán)溴百里酚藍(lán)凈化方法凈化方法液液-液萃取法液萃取法溴甲酚綠溴甲酚綠中藥制劑分析常用的方法中藥制劑分析常用的方法凈化方法凈化方法色譜法色譜法柱的大?。洪L柱的大小：長10cm，內(nèi)徑，內(nèi)徑10mm步驟：裝柱、上樣、洗脫、搜集步驟：裝柱、上樣、洗脫、搜集裝柱方法：濕法裝柱、干法裝

6、柱裝柱方法：濕法裝柱、干法裝柱裝柱要求：填裝均勻、嚴(yán)密，裝柱要求：填裝均勻、嚴(yán)密， 表面平整表面平整柱填料：柱填料：硅膠、氧化鋁、活性炭、硅膠、氧化鋁、活性炭、鍵合相硅膠、大孔樹脂、鍵合相硅膠、大孔樹脂、離子交換樹脂、聚酰胺離子交換樹脂、聚酰胺例：例：P124 生物堿生物堿甲醇提甲醇提氧化鋁氧化鋁乙醇洗脫乙醇洗脫氧化鋁氧化鋁硅膠硅膠酸性吸附劑，強烈保留堿性化合物酸性吸附劑，強烈保留堿性化合物適用于中性或酸性成分適用于中性或酸性成分洗脫順序：極性小洗脫順序：極性小大正相洗脫）大正相洗脫）堿性吸附劑，堿性吸附劑，適用于堿性成分適用于堿性成分洗脫順序：同硅膠洗脫順序：同硅膠例：例： 三七皂苷三七皂苷

7、甲醇提取甲醇提取蒸干蒸干水溶解水溶解上樣上樣水洗水洗70%乙醇洗乙醇洗搜集搜集大孔樹脂大孔樹脂分為極性、非極性分為極性、非極性非極性型非極性型D101等常用等常用 使用前需要用有機(jī)溶劑除去雜質(zhì)使用前需要用有機(jī)溶劑除去雜質(zhì) 洗脫順序：極性大洗脫順序：極性大小反相洗脫）小反相洗脫）例例 益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿的鑒別益母草流浸膏中鹽酸水蘇堿的鑒別 取本品取本品10 ml，水浴蒸干，殘渣加水，水浴蒸干，殘渣加水10ml使溶解，加稀鹽酸調(diào)節(jié)使溶解，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH值至值至12，加在強酸性陽離子交換樹脂柱加在強酸性陽離子交換樹脂柱732Na-型，內(nèi)徑型，內(nèi)徑0.9cm，柱長，柱長12cm上，以水洗至流出

8、液近無色，棄去水液，上，以水洗至流出液近無色，棄去水液，再以再以2mol/L氨溶液氨溶液40ml洗脫，收集洗洗脫，收集洗脫液脫液作為供試品溶液。作為供試品溶液。 離子型化合物離子型化合物離子交換樹脂離子交換樹脂NOO洗脫順序：極性大洗脫順序：極性大小反相洗脫）小反相洗脫）NHOn聚酰胺聚酰胺活性炭活性炭非極性吸附劑，除色素非極性吸附劑，除色素 P72常用于黃酮類常用于黃酮類固相萃取法固相萃取法凈化方法凈化方法C18小柱小柱 分開脂溶性和水溶性成分分開脂溶性和水溶性成分例：例：P204操作：操作：柱的活化柱的活化上樣上樣清洗清洗洗脫洗脫 洗脫順序：極性大洗脫順序：極性大小反相洗脫）小反相洗脫）P

9、194蒸餾法蒸餾法沉淀法沉淀法例例 六味地黃顆粒中丹皮酚含量測定六味地黃顆粒中丹皮酚含量測定 取本品約取本品約2g，研細(xì)，精密稱定，用，研細(xì)，精密稱定，用水蒸汽蒸餾，收集餾出液約水蒸汽蒸餾，收集餾出液約450ml，置置500 ml量瓶中，加水稀釋至刻量瓶中，加水稀釋至刻度。度。274nm波長處測定吸收度波長處測定吸收度。凈化方法凈化方法用于揮發(fā)性成分用于揮發(fā)性成分加入沉淀劑加入沉淀劑消化法消化法濕法消化：強酸腐蝕濕法消化：強酸腐蝕干法消化：高溫?zé)胱聘煞ㄏ焊邷責(zé)胱茰y定中藥制劑中的無機(jī)元素測定中藥制劑中的無機(jī)元素凈化方法凈化方法留意：各劑型樣品的預(yù)處理留意：各劑型樣品的預(yù)處理準(zhǔn)繩：應(yīng)根據(jù)被測成

10、分的理化性質(zhì)和存在狀態(tài)準(zhǔn)繩：應(yīng)根據(jù)被測成分的理化性質(zhì)和存在狀態(tài)以及各類成分之間相互干擾的程度及制備工藝以及各類成分之間相互干擾的程度及制備工藝與劑型的不同、賦形劑的特點等進(jìn)行綜合考慮與劑型的不同、賦形劑的特點等進(jìn)行綜合考慮固體制劑：丸劑、片劑、顆粒劑、栓劑、膠囊固體制劑：丸劑、片劑、顆粒劑、栓劑、膠囊 半固體制劑：流浸膏、浸膏、糖漿、煎膏半固體制劑：流浸膏、浸膏、糖漿、煎膏液體制劑：合劑、口服液、酊劑、注射劑液體制劑：合劑、口服液、酊劑、注射劑片劑：淀粉、糊精、滑石粉、糖精片劑：淀粉、糊精、滑石粉、糖精散劑：注意取樣的代表性散劑：注意取樣的代表性蜜丸、糖漿劑、煎膏劑：消除粘性蜜丸、糖漿劑、煎膏

11、劑：消除粘性顆粒劑：糖、糊精顆粒劑：糖、糊精固體制劑：排除賦形劑的影響固體制劑：排除賦形劑的影響留意：各劑型樣品的預(yù)處理留意：各劑型樣品的預(yù)處理固體稀釋劑：硅藻土固體稀釋劑：硅藻土 P144栓劑：基質(zhì)油脂性基質(zhì)和親水性基質(zhì)）栓劑：基質(zhì)油脂性基質(zhì)和親水性基質(zhì)）滴丸：基質(zhì)水溶性基質(zhì)和水不溶性基質(zhì)）滴丸：基質(zhì)水溶性基質(zhì)和水不溶性基質(zhì)） 復(fù)方丹參滴丸中三七的測定復(fù)方丹參滴丸中三七的測定 取本品取本品4040丸，加甲醇丸，加甲醇10ml10ml，振搖，振搖1010分鐘，分鐘，于于44放置放置2424小時，使聚乙二醇析出完全，小時，使聚乙二醇析出完全，濾過，取濾液作為供試品溶液濾過，取濾液作為供試品溶液

12、留意：各劑型樣品的預(yù)處理留意：各劑型樣品的預(yù)處理注射劑：直接取樣注射劑：直接取樣合劑、口服液：直接取樣或經(jīng)過分離凈化合劑、口服液：直接取樣或經(jīng)過分離凈化液體制劑：搖勻后再取樣液體制劑：搖勻后再取樣西洋參精口服液中人參總皂甙的含量測定西洋參精口服液中人參總皂甙的含量測定精密移取待測樣品精密移取待測樣品10ml，加入到處理好的大孔，加入到處理好的大孔樹脂柱上，加蒸餾水樹脂柱上，加蒸餾水80ml洗柱，洗液棄去，再洗柱，洗液棄去，再用用70%乙醇乙醇100ml洗柱，收集洗脫液，洗柱，收集洗脫液， 酒劑、酊劑：加熱蒸去乙醇，然后再用酒劑、酊劑：加熱蒸去乙醇，然后再用有機(jī)溶劑萃取或柱層析有機(jī)溶劑萃取或柱層

13、析留意：各劑型樣品的預(yù)處理留意：各劑型樣品的預(yù)處理HPLC 475GC35UV-vis41TLCS49化學(xué)法化學(xué)法51其它其它413 3 常用定量分析方法常用定量分析方法化學(xué)分析法化學(xué)分析法揮發(fā)法：如水分測定、灰分測定揮發(fā)法：如水分測定、灰分測定萃取法：昆明山海棠片萃取法：昆明山海棠片 藥典藥典P492P492 乙醇回流乙醇回流蒸干蒸干鹽酸溶解鹽酸溶解氨氨 乙醚萃取乙醚萃取沉淀法：西瓜霜的含量測定沉淀法：西瓜霜的含量測定適用于：含量較高的成分適用于：含量較高的成分重量分析重量分析化學(xué)分析法化學(xué)分析法 酸堿滴定：生物堿、有機(jī)酸酸堿滴定：生物堿、有機(jī)酸 沉淀滴定：含沉淀滴定：含Cl-的制劑的制劑

14、絡(luò)合滴定：朱砂絡(luò)合滴定：朱砂硫氰酸銨硫氰酸銨 石膏、白礬石膏、白礬EDTA 氧化還原：雄黃氧化還原：雄黃I2 磁石、赭石磁石、赭石重鉻酸鉀重鉻酸鉀滴定分析滴定分析紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法（一基本原理：（一基本原理：A = E c l儀器：紫外儀器：紫外-可見分光光度計可見分光光度計光光源源單單色色器器比比色色皿皿檢檢 測測 器器（二用途：總成分的測定（二用途：總成分的測定（三定量方法：（三定量方法： 吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法 對照品比較法對照品比較法紫外可見分光光度法紫外可見分光光度法取本品粉末取本品粉末，精密稱定，精密稱定，加鹽酸加鹽酸-甲甲醇醇1:100） ，

15、回流，回流置氧化鋁置氧化鋁柱柱用乙醇洗脫，收集洗脫液，用乙醇洗脫，收集洗脫液，。在在345nm的波長測定吸光度，按鹽的波長測定吸光度，按鹽酸小檗堿酸小檗堿C20H18Cl16NO4的吸收系的吸收系數(shù)（數(shù)（ ）為）為728計算計算%11cmE 留意：對儀器進(jìn)行波長校正留意：對儀器進(jìn)行波長校正lcEAcm %11計算公式：計算公式：吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法吸收系數(shù)法A= 0.358 w = 0.9926g H2O% = 8.0%1728358. 0 00.50100 00.502.00 00.5000. 5 310%)0 . 81(9926. 0 標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法1 2 3 4 5cA回

16、歸求方程回歸求方程 A = k c + m留意：留意： 供試品濃度應(yīng)在線性范圍內(nèi)供試品濃度應(yīng)在線性范圍內(nèi)cx Ax相關(guān)系數(shù)相關(guān)系數(shù)r 0.999排石顆粒中總黃酮的含量測定排石顆粒中總黃酮的含量測定對照品溶液的制備對照品溶液的制備 每每1ml含無水蘆丁含無水蘆丁0.2mg測定測定 取本品取本品照標(biāo)準(zhǔn)曲線照標(biāo)準(zhǔn)曲線依法測定依法測定標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精量對照品溶液精量對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml，分別置，分別置10ml量瓶中，量瓶中，加加5%亞硝酸鈉亞硝酸鈉硝酸鋁硝酸鋁氫氧化鈉氫氧化鈉再加再加50%甲醇至刻度，搖勻。在甲醇至刻度，搖勻。在510nm下測定下測定A，以，

17、以A為縱坐標(biāo)，為縱坐標(biāo)，c為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線法標(biāo)準(zhǔn)曲線法1、某同學(xué)欲用吸收系數(shù)法測定三、某同學(xué)欲用吸收系數(shù)法測定三黃片中總生物堿，請設(shè)計一個合黃片中總生物堿，請設(shè)計一個合理的供試品溶液制備的實驗方案理的供試品溶液制備的實驗方案2、某同學(xué)欲用分光光度法測定冠、某同學(xué)欲用分光光度法測定冠心丹參片中總皂苷，為除去雜質(zhì)心丹參片中總皂苷，為除去雜質(zhì)干擾，請設(shè)計一個有效的供試品干擾，請設(shè)計一個有效的供試品溶液制備的方法溶液制備的方法（一基本原理（一基本原理A = k w儀器：薄層掃描儀儀器：薄層掃描儀薄層掃描法薄層掃描法TLCS）（二實驗條件（二實驗條件例：熊果酸例：熊果

18、酸薄層掃描法薄層掃描法 吸收掃描法吸收掃描法 光源：氘燈、光源：氘燈、 鎢燈鎢燈 掃描方式：鋸齒式掃描方式：鋸齒式 測光方式：透射、反射測光方式：透射、反射 設(shè)定散射系數(shù)設(shè)定散射系數(shù)SX 雙波長掃描法雙波長掃描法RSA例：小檗堿例：小檗堿KcF 特點：靈敏度高特點：靈敏度高熒光掃描法熒光掃描法薄層掃描法薄層掃描法光源：汞燈光源：汞燈直線式掃描直線式掃描無需曲線校直無需曲線校直（三定量方法（三定量方法Aww1 wx w2A1A2 Ax? 點樣量在線性范圍內(nèi)點樣量在線性范圍內(nèi)? 交叉點樣：每一樣品交叉點樣：每一樣品22個點樣點個點樣點? 市售預(yù)制板市售預(yù)制板外標(biāo)二點法外標(biāo)二點法111212wwAA

19、wwAAxx 例：例：P80薄層掃描法薄層掃描法氣相色譜法氣相色譜法GC）Afw （一基本原理（一基本原理（二實驗條件（二實驗條件 固定相：硅氧烷類固定液固定相：硅氧烷類固定液 色譜柱：彈性交聯(lián)石英毛細(xì)管柱色譜柱：彈性交聯(lián)石英毛細(xì)管柱 檢測器：檢測器：FID 進(jìn)樣量：進(jìn)樣量：12l，分流進(jìn)樣，分流比，分流進(jìn)樣，分流比1001101 特點：適用于揮發(fā)性及易氣化的成分特點：適用于揮發(fā)性及易氣化的成分 不同成分靈敏度不同不同成分靈敏度不同 進(jìn)樣量重復(fù)性差進(jìn)樣量重復(fù)性差 AfW 氣相色譜法氣相色譜法（三定量方法：內(nèi)標(biāo)法（三定量方法：內(nèi)標(biāo)法選擇某純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，準(zhǔn)確稱量，加入選擇某純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物，準(zhǔn)

20、確稱量，加入待測液中，比較待測組分與內(nèi)標(biāo)物的峰面積待測液中，比較待測組分與內(nèi)標(biāo)物的峰面積Afw 相對校正因子：相對校正因子：sxfff ssxxsxAfAfww ssxxsxAfAfcc sxsxAAfcc SxSsxxcAAfc 氣相色譜法氣相色譜法例例1 馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏中龍腦含量測定馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏中龍腦含量測定P84） 【校正因子測定】【校正因子測定】 內(nèi)標(biāo)：水楊酸甲酯內(nèi)標(biāo)：水楊酸甲酯3.0mg/ml 對照品：龍腦對照品：龍腦2.0mg/ml 吸取吸取1l，注入氣相色譜儀，計算校正因子，注入氣相色譜儀，計算校正因子【測定法】取本品約【測定法】取本品約1g，精密加入，精密加入 內(nèi)標(biāo)溶內(nèi)標(biāo)溶液液10ml，超聲，超聲濾過，吸取續(xù)濾過，吸取續(xù) 濾液濾液1l，注入氣相色譜儀，注入氣相色譜儀。氣相色譜法氣相色譜法iSR98. 0 【對照品溶液】【對照品溶液】 iS：3.0mg/ml As = 882 R：2.0mg/ml AR =600ssRRSSRRAcAcAWAW/ sxfff 氣相色譜法氣相色譜法