肉蓯蓉多糖的免疫調(diào)節(jié)活性及吸收特性研究

1、肉蓯蓉多糖的免疫調(diào)節(jié)活性及吸收特性研究    英文題名 Study on the Immune Pharmacology and Absorption Character of Polysaccharides of Cistanche Deserticola  關(guān)鍵詞 肉蓯蓉多糖; 淋巴細胞增殖; 巨噬細胞活化; 口服吸收; Caco-2; 細胞模型; 英文關(guān)鍵詞 polysaccharides of cistanche deserticola （CDPS）; lymphocytes Proliferation; macrophage acti

2、vation; oral administration absorption; Caco-2 cell model; 中文摘要 目的通過考察肉蓯蓉多糖(polysaccharides of Cistanche deserticola CDPS)對小鼠脾淋巴細胞增殖及巨噬細胞活化的作用,研究肉蓯蓉多糖的免疫調(diào)節(jié)藥理學(xué)活性,并通過不同角度和層次對其吸收特性進行研究。 方法MTT法檢測小鼠脾淋巴細胞的增殖。環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide CTX)復(fù)制免疫功能低下的動物模型,分別測定正常及免疫低下動物脾臟、胸腺指數(shù)。胸腺細胞增殖法測定白細胞介素-2(IL-2)活性。 采用中性紅法測定小鼠腹

3、腔巨噬細胞吞噬活性;Griess試劑法測定NO釋放量;L929細胞法及小鼠胸腺細胞法測定TNF-及IL-1釋放。碳粒廓清法測定小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能。 在建立的Caco-2單層細胞模型上通過測定每孔電阻值(R_(true tissue),比較膜兩側(cè)堿性磷酸酶(ALP)活性,確定Caco-2細胞單層的可靠性。測定CDPS經(jīng)Caco-2單層細胞模型AB 3h轉(zhuǎn)運后受側(cè)濃度,計算其藥效P_(app)值,從體外模型判斷CDPS的吸收特性;經(jīng)體外和體內(nèi)口服給藥藥效比較及口服給藥途徑和腹腔注射給藥途徑藥效的比較從不同角度對肉蓯蓉. 英文摘要 Objective To study the immunomo

4、dulatory activity of polysaccharides of Cistanche deserticola (CDPS) was assayed by macrophages promoting lymphocyte proliferation and activating macrophage. The absorptive character of CDPS was inveatigated by the comparation of different model systems. Methods The lymphocyte proliferation with or

5、without mitogen was assessed by MTT method in vitro. The immunosuppression mice were induced by cyclophosphamide, and the spleen and thymus were weighted up 英漢及縮略語對照表 7-8 中文摘要 8-10 Abstract 10-12 前言 13-18     1 植物多糖的藥理學(xué)活性研究進展 13     2 植物多糖吸收特性相關(guān)研究 13-14   

6、0; 3 肉蓯蓉多糖的研究進展 14     4 本課題的切入點 14-15     參考文獻 15-18 第一部分 肉蓯蓉多糖的促淋巴細胞增殖作用 18-31     1 實驗材料與儀器 18-19         1.1 實驗材料 18         1.2 儀器 18-19     2 實驗方法 19-21   

7、;      2.1 體外實驗 19-20             2.1.1 受試藥液的配制: 19             2.1.2 肉蓯蓉多糖對脾細胞的58h細胞毒 19             2.1.3 肉蓯

8、蓉多糖對未活化脾淋巴細胞的增殖作用 19             2.1.4 肉蓯蓉多糖對LPS活化的B淋巴細胞和的增殖作用 19-20             2.1.5 肉蓯蓉多糖對ConA活化的T淋巴細胞的增殖作用 20             2.1.6 肉蓯蓉

9、多糖對脾淋巴細胞IL-2釋放的作用 20         2.2 體內(nèi)實驗 20-21             2.2.1 對正常小鼠免疫器官重量影響 20             2.2.2 對免疫功能低下小鼠免疫器官重量影響 20-21      

10、0;  2.3 統(tǒng)計分析 21     3 結(jié)果 21-28         3.1 體內(nèi)實驗 21-27             3.1.1 肉蓯蓉多糖對脾細胞的58h細胞毒 21-22             3.1.2 肉蓯蓉多糖對未活化脾淋巴細胞的增殖作用 22

11、-23             3.1.3 肉蓯蓉多糖對LPS活化的B淋巴細胞和的增殖作用 23-24             3.1.4 肉蓯蓉多糖對ConA活化的T淋巴細胞的增殖作用 24-25             3.1.5 肉蓯蓉多糖對脾淋巴細胞IL-2釋放

12、的作用 25-27         3.2 體內(nèi)實驗 27-28             3.2.1 對正常小鼠免疫器官重量影響 27             3.2.2 對免疫功能低下小鼠免疫器官重量影響 27-28     4 討論 28-29   

13、60; 參考文獻 29-31 第二部分 肉蓯蓉多糖對巨噬細胞功能的影響 31-51     1 實驗材料與儀器 31-32         1.1 實驗材料 31         1.2 儀器 31-32     2 實驗方法 32-36         2.1 體外實驗 32-35    

14、0;        2.1.1 受試藥液的配制: 32             2.1.2 肉蓯蓉多糖對RAW264.7細胞24h細胞毒 32             2.1.3 肉蓯蓉多糖對RAW264.7細胞NO釋放的影響 32-33       

15、;      2.1.4 CDPS對地塞米松(DEX)免疫抑制的RAW264.7細胞NO釋放的影響 33             2.1.5 肉蓯蓉多糖對RAW264.7細胞TNF-釋放的影響 33-34             2.1.6 肉蓯蓉多糖對RAW264.7細胞IL-1釋放的影響 34   

16、60;         2.1.7 肉蓯蓉多糖對BALB/c小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅的影響 34-35             2.1.8 肉蓯蓉多糖對BALB/c小鼠腹腔巨噬細胞NO釋放的影響 35         2.2 體內(nèi)實驗 35-36        

17、60;    2.2.1 肉蓯蓉多糖對化療藥環(huán)磷酰胺(CTX)致免疫功能下降的影響(碳粒廓清法) 35-36         2.3 統(tǒng)計分析 36     3.結(jié)果 36-47         3.1 體外實驗 36-46             3.1.1 肉蓯蓉多糖對RAW264.7

18、細胞24h細胞毒 36-37             3.1.2 CDPS對RAW264.7細胞NO釋放的影響 37-39             3.1.3 肉蓯蓉多糖對地塞米松(DEX)免疫抑制的RAW264.7細胞NO釋放的影響 39-41            

19、 3.1.4 肉蓯蓉多糖對RAW264.7細胞TNF-釋放的影響 41-42             3.1.5 肉蓯蓉多糖對RAW264.7細胞IL-1釋放的影響 42-43             3.1.6 肉蓯蓉多糖對BALB/c小鼠腹腔巨噬細胞吞噬中性紅的影響 43-44         

20、    3.1.7 肉蓯蓉多糖對BALB/c小鼠腹腔巨噬細胞NO釋放的影響 44-46         3.2 體內(nèi)實驗 46-47             3.2.1 肉蓯蓉多糖對化療藥(CTX)致免疫功能下降的影響 46-47     4 討論 47-48         4.1 巨噬

21、細胞與免疫 47         4.2 巨噬細胞分泌細胞因子與免疫 47-48         4.3 單核-巨噬細胞吞噬功能與免疫 48     參考文獻 48-51 第三部分 肉蓯蓉多糖吸收特性的研究 51-73     1 實驗材料與儀器 51-52         1.1 實驗材料 51-52   

22、      1.2 實驗儀器 52     2 實驗方法 52-57         2.1 采用Caco-2細胞模型評價肉蓯蓉多糖口服吸收特征 52-54             2.1.1 Caco-2細胞模型的建立 52          &#

23、160;  2.1.2 Caco-2細胞模型的驗證 52-53             2.1.3 肉蓯蓉多糖對Caco-2細胞24h細胞毒 53             2.1.4 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細胞模型轉(zhuǎn)運實驗 53-54         2.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指

24、標(biāo)對比研究 54-56             2.2.1 肉蓯蓉多糖對巨噬細胞吞噬功能的影響 54-55             2.2.2 肉蓯蓉多糖對小鼠淋巴細胞增殖的影響 55-56         2.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對比研究 56    

25、;         2.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(免疫抑制)小鼠巨噬細胞吞噬功能影響的比較(碳粒廓清) 56             2.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對小鼠免疫器官重量影響的比較 56         2.4 統(tǒng)計分析 56-57     3 實驗結(jié)果 57-68  

26、60;      3.1 采用Caco-2細胞模型評價肉蓯蓉多糖口服吸收特征 57-61             3.1.1 Caco-2細胞模型的驗證 57-58             3.1.2 肉蓯蓉多糖對Caco-2細胞24h細胞毒作用 58-59       

27、;      3.1.3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細胞模型AB3h轉(zhuǎn)運 59-61         3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指標(biāo)對比研究 61-66             3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對巨噬細胞吞噬功能的影響 61-64         

28、60;   3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對小鼠淋巴細胞增殖的影響 64-66         3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對比研究 66-68             3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(免疫抑制)小鼠巨噬細胞吞噬功能影響的比較 66-67          

29、   3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68     4、討論 68-71         4.1 通過Caco-2細胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70             4.1.1 肉蓯蓉多糖口服吸收研究體外模型的選擇 68-69       &#

30、160;     4.1.2 Caco-2細胞模型的驗證 69-70             4.1.3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細胞模型的轉(zhuǎn)運 70         4.2 通過體外與體內(nèi)(口服)藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 70-71         4.3 通過體內(nèi)不同給藥途徑藥效比較研究肉蓯蓉多

31、糖口服吸收特性 71         4.4 小節(jié) 71     參考文獻 71-73 結(jié)論 73-74 致謝 74-75 附 細胞照片 75-78         3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指標(biāo)對比研究 61-66             3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對巨噬細胞吞噬功能的影響

32、 61-64             3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對小鼠淋巴細胞增殖的影響 64-66         3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對比研究 66-68             3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(免疫抑制)小鼠巨噬細胞吞噬功能影響的比較 66

33、-67             3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68     4、討論 68-71         4.1 通過Caco-2細胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70             4.1.1 肉蓯蓉多糖

34、口服吸收研究體外模型的選擇 68-69             4.1.2 Caco-2細胞模型的驗證 69-70             4.1.3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細胞模型的轉(zhuǎn)運 70         4.2 通過體外與體內(nèi)(口服)藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 70-71  

35、60;      4.3 通過體內(nèi)不同給藥途徑藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 71         4.4 小節(jié) 71     參考文獻 71-73 結(jié)論 73-74 致謝 74-75 附 細胞照片 75-78         3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指標(biāo)對比研究 61-66       

36、60;     3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對巨噬細胞吞噬功能的影響 61-64             3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對小鼠淋巴細胞增殖的影響 64-66         3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對比研究 66-68         

37、60;   3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(免疫抑制)小鼠巨噬細胞吞噬功能影響的比較 66-67             3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68     4、討論 68-71         4.1 通過Caco-2細胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70    &#

38、160;        4.1.1 肉蓯蓉多糖口服吸收研究體外模型的選擇 68-69             4.1.2 Caco-2細胞模型的驗證 69-70             4.1.3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細胞模型的轉(zhuǎn)運 70      

39、60;  4.2 通過體外與體內(nèi)(口服)藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 70-71         4.3 通過體內(nèi)不同給藥途徑藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 71         4.4 小節(jié) 71     參考文獻 71-73 結(jié)論 73-74 致謝 74-75 附 細胞照片 75-78         3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口

40、服)相關(guān)藥效指標(biāo)對比研究 61-66             3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對巨噬細胞吞噬功能的影響 61-64             3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對小鼠淋巴細胞增殖的影響 64-66         3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對比研究

41、 66-68             3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(免疫抑制)小鼠巨噬細胞吞噬功能影響的比較 66-67             3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68     4、討論 68-71         4.

42、1 通過Caco-2細胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70             4.1.1 肉蓯蓉多糖口服吸收研究體外模型的選擇 68-69             4.1.2 Caco-2細胞模型的驗證 69-70             4.1.

43、3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細胞模型的轉(zhuǎn)運 70         4.2 通過體外與體內(nèi)(口服)藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 70-71         4.3 通過體內(nèi)不同給藥途徑藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 71         4.4 小節(jié) 71     參考文獻 71-73 結(jié)論 73-74 致謝 74-75 附 細胞照片 75-78 &

44、#160;       3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指標(biāo)對比研究 61-66             3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對巨噬細胞吞噬功能的影響 61-64             3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對小鼠淋巴細胞增殖的影響 64-66   

45、60;     3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對比研究 66-68             3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(免疫抑制)小鼠巨噬細胞吞噬功能影響的比較 66-67             3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68    

46、; 4、討論 68-71         4.1 通過Caco-2細胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70             4.1.1 肉蓯蓉多糖口服吸收研究體外模型的選擇 68-69             4.1.2 Caco-2細胞模型的驗證 69-70   &

47、#160;         4.1.3 肉蓯蓉多糖經(jīng)Caco-2細胞模型的轉(zhuǎn)運 70         4.2 通過體外與體內(nèi)(口服)藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 70-71         4.3 通過體內(nèi)不同給藥途徑藥效比較研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 71         4.4 小節(jié) 71 

48、0;   參考文獻 71-73 結(jié)論 73-74 致謝 74-75 附 細胞照片 75-78         3.2 肉蓯蓉多糖體外與體內(nèi)(口服)相關(guān)藥效指標(biāo)對比研究 61-66             3.2.1 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對巨噬細胞吞噬功能的影響 61-64           &

49、#160; 3.2.2 肉蓯蓉多糖體外和口服給藥對小鼠淋巴細胞增殖的影響 64-66         3.3 肉蓯蓉多糖體內(nèi)不同給藥途徑(口服、腹腔)藥效對比研究 66-68             3.3.1 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對(免疫抑制)小鼠巨噬細胞吞噬功能影響的比較 66-67           

50、0; 3.3.2 肉蓯蓉多糖不同給藥途徑對小鼠免疫器官重量影響的比較 67-68     4、討論 68-71         4.1 通過Caco-2細胞模型(體外)研究肉蓯蓉多糖口服吸收特性 68-70             4.1.1 肉蓯蓉多糖口服吸收研究體外模型的選擇 68-69