小鼠白細胞介素-6IL-6酶聯(lián)免疫分析

1、小鼠白細胞介素 -6（IL-6 ）酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書本試劑盒僅供研究使用。檢測范圍：96T3pg/ml-120pg/ml使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中白細胞介素-6（ IL-6 ）含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠白細胞介素-6（ IL-6 ）水平。用純化的小鼠白細胞介素 -6（IL-6 ）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素 -6（ IL-6 ），再與HRP標記的白細胞介素-6（ IL-6 ）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原 -酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。 TMB 在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，

2、并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白細胞介素-6（ IL-6 ）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中小鼠白細胞介素-6（ IL-6 ）濃度。試劑盒組成130倍濃縮洗滌液20ml1瓶7終止液6ml 1瓶2酶標試劑6ml 1瓶8標準品（ 240pg/ml ）0.5ml 1瓶3酶標包被板12孔 8條9標準品稀釋液1.5ml 1瓶4樣品稀釋液6ml 1瓶10說明書1份5顯色劑 A液6ml 1瓶11封板膜2張6顯色劑 B液6ml 1/瓶12密封袋1個標本要求1標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行

3、試驗，可將標本放于 -20 保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融2不能檢測含 NaN3 的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。120pg/ml5號標準品150l的原倍標準品加入150 l標準品稀釋液60pg/ml4號標準品150l的 5號標準品加入150 l標準品稀釋液30pg/ml3號標準品150l的 4號標準品加入150 l標準品稀釋液15pg/ml2號標準品150l的 3號標準品加入150 l標準品稀釋液7.5pg/ml1號標準品150l的 2號標準品加入150 l標準品稀釋液2. 加樣：分別

4、設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置 37 溫育 30分鐘。4. 配液：將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù) 5次，拍干。6.加酶：每孔加入酶標試劑50l，空白孔除外。7. 溫育：操作同 3。8. 洗滌：操作同 5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50l，再加

5、入顯色劑 B50l，輕輕震蕩混勻， 37 避光顯色15分鐘.10.終止：每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應(yīng)在加終止液后 15分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié)：計算以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。注意事項1試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在 5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4請每次測定的同時做標準曲線，最好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。5封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6底物請避光保存。7嚴格按照說明書