生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)1-生化實(shí)驗(yàn)2ppt課件

1、實(shí)驗(yàn)二實(shí)驗(yàn)二 蛋白質(zhì)的比色定量分析蛋白質(zhì)的比色定量分析 考馬斯亮藍(lán)法考馬斯亮藍(lán)法實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)?zāi)康氖煜し止夤舛扔?jì)的基本原理和使用方法熟悉分光光度計(jì)的基本原理和使用方法掌握利用考馬斯亮藍(lán)定量分析蛋白質(zhì)的方法掌握利用考馬斯亮藍(lán)定量分析蛋白質(zhì)的方法思考題思考題1.考馬斯亮藍(lán)考馬斯亮藍(lán) G-250 法測(cè)定蛋自質(zhì)含量的原理是什么？法測(cè)定蛋自質(zhì)含量的原理是什么？ 還有哪些蛋自質(zhì)定量法？還有哪些蛋自質(zhì)定量法？ 2.考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋自質(zhì)含量時(shí)，應(yīng)該注意些什么？考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋自質(zhì)含量時(shí)，應(yīng)該注意些什么？實(shí)驗(yàn)器材實(shí)驗(yàn)器材 762分光光度計(jì) 主要試劑主要試劑 一、制定標(biāo)準(zhǔn)曲線一、制定標(biāo)準(zhǔn)曲線常量法標(biāo)準(zhǔn)曲線常量法

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線實(shí)驗(yàn)操作實(shí)驗(yàn)操作試管編號(hào)試管編號(hào)0123451mg/ml標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液(ml)0.00.010.020.030.040.05生理鹽水生理鹽水(ml)0.10.090.080.070.060.05考馬斯亮藍(lán)試劑考馬斯亮藍(lán)試劑(ml)各各5ml搖勻，搖勻，1h內(nèi)以內(nèi)以0號(hào)管為空白對(duì)照，在號(hào)管為空白對(duì)照，在595nm處比色處比色OD595nm取取6支支10ml干凈試管干凈試管 按下表取樣，混勻，放置按下表取樣，混勻，放置2min。在。在595nm 下比色，紀(jì)錄數(shù)據(jù)。以下比色，紀(jì)錄數(shù)據(jù)。以O(shè)D值為縱坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量值為縱坐標(biāo)、標(biāo)準(zhǔn)蛋白含量mg/ml為橫坐標(biāo)作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。由此標(biāo)

3、準(zhǔn)曲線，根為橫坐標(biāo)作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線。由此標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)測(cè)出的未知樣品的據(jù)測(cè)出的未知樣品的OD值，即可查出未知樣品的蛋白含量。值，即可查出未知樣品的蛋白含量。制備待測(cè)樣品：已準(zhǔn)備好。制備待測(cè)樣品：已準(zhǔn)備好。二、未知樣品蛋白質(zhì)濃度測(cè)定二、未知樣品蛋白質(zhì)濃度測(cè)定測(cè)定：取測(cè)定：取1 支支10mL 試管，按下表取樣。試管，按下表取樣。管管 號(hào)號(hào)1待測(cè)樣品提取液（待測(cè)樣品提取液（ml）0.1考馬斯亮藍(lán)考馬斯亮藍(lán)G-250試劑（試劑（ml）5OD595nm蛋白質(zhì)濃度（蛋白質(zhì)濃度（mg/ml ） 測(cè)定中，蛋白測(cè)定中，蛋白-染料復(fù)合物會(huì)有少部分吸附于比色杯壁染料復(fù)合物會(huì)有少部分吸附于比色杯壁上，實(shí)驗(yàn)證明此復(fù)合物的吸附量可以忽略。測(cè)定結(jié)束后，上，實(shí)驗(yàn)證明此復(fù)合物的吸附量可以忽略。測(cè)定結(jié)束后，可用乙醇將比色杯壁上的藍(lán)色洗干凈。可用乙醇將比色杯壁上的藍(lán)色洗干凈。本卷須知本卷須知計(jì)算結(jié)果計(jì)算結(jié)果 OD595nm值對(duì)應(yīng)