細(xì)胞因子與病理過程20021213_

1、細(xì)胞因子與病理過程細(xì)胞因子與病理過程 中國醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室中國醫(yī)科大學(xué)病理學(xué)教研室王恩華王恩華細(xì)胞因子細(xì)胞因子cytokinesconcept：是由細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的低分子量的多：是由細(xì)胞產(chǎn)生和分泌的低分子量的多 肽類介質(zhì)肽類介質(zhì)effect：參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化、器官發(fā)育：參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、分化、器官發(fā)育; 炎癥、免疫、腫瘤、損傷、修復(fù)等許多病炎癥、免疫、腫瘤、損傷、修復(fù)等許多病理及生理過程理及生理過程來源：來源： 血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、WBC（中性、單核巨噬（中性、單核巨噬細(xì)胞、LC）、纖維母細(xì)胞、神經(jīng)組織、）、纖維母細(xì)胞、神經(jīng)組織、 平滑肌細(xì)胞、軟骨組織、腫瘤細(xì)胞等平滑肌細(xì)胞、

2、軟骨組織、腫瘤細(xì)胞等1.白細(xì)胞介素類白細(xì)胞介素類 interleukins ILs2.集落刺激因子類集落刺激因子類 colony stimulating factors CSFs3.腫瘤壞死因子類腫瘤壞死因子類 tumor necrosis factors TNFs4.淋巴因子類淋巴因子類 lymphokines5.化學(xué)趨化因子類化學(xué)趨化因子類 chemotactic factors6.生長因子類生長因子類 growth factors7.細(xì)胞粘附因子類細(xì)胞粘附因子類 cell adhension molecules總之：幾乎所有組成多細(xì)胞間復(fù)雜的生物信號語言中的總之：幾乎所有組成多細(xì)胞間復(fù)雜

3、的生物信號語言中的各個元件，均屬此范疇各個元件，均屬此范疇Classification細(xì)胞因子：細(xì)胞因子：autocrine(autocrine(自泌自泌)paracrine()paracrine(旁泌旁泌) ) 在局部起作用在局部起作用激素：激素：endocrine(endocrine(內(nèi)分泌內(nèi)分泌) )、經(jīng)血到遠(yuǎn)隔器官起作、經(jīng)血到遠(yuǎn)隔器官起作用用相同點(diǎn)：細(xì)胞產(chǎn)生、分泌，作用受體，放大作用相同點(diǎn)：細(xì)胞產(chǎn)生、分泌，作用受體，放大作用細(xì)胞因子與激素的運(yùn)行機(jī)制不同細(xì)胞因子與激素的運(yùn)行機(jī)制不同 舉例舉例 局部損傷、細(xì)胞產(chǎn)生因子、只對局部局部損傷、細(xì)胞產(chǎn)生因子、只對局部細(xì)胞產(chǎn)生影響，如象激素一樣入血，

4、對細(xì)胞產(chǎn)生影響，如象激素一樣入血，對全體細(xì)胞都產(chǎn)生影響，就麻煩了。細(xì)胞全體細(xì)胞都產(chǎn)生影響，就麻煩了。細(xì)胞因子種類很多，作用廣泛，與細(xì)胞外基因子種類很多，作用廣泛，與細(xì)胞外基質(zhì)也有著密切的聯(lián)系，下面僅就常見的質(zhì)也有著密切的聯(lián)系，下面僅就常見的細(xì)胞因子作以簡介細(xì)胞因子作以簡介 Wnt通路中的關(guān)鍵分子與肺癌侵襲轉(zhuǎn)移王恩華中國醫(yī)科大學(xué)研究背景 1l在中國肺癌的發(fā)生率在過去的在中國肺癌的發(fā)生率在過去的30年里年里 上升了上升了465%，死亡率居惡性腫瘤之首，死亡率居惡性腫瘤之首l每年死于肺癌的患者約每年死于肺癌的患者約45萬人，其中約有萬人，其中約有40萬萬人死于肺癌的轉(zhuǎn)移人死于肺癌的轉(zhuǎn)移l因此揭示肺癌

5、侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制和尋找治療因此揭示肺癌侵襲轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制和尋找治療關(guān)鍵靶點(diǎn)，具有重要意義關(guān)鍵靶點(diǎn)，具有重要意義研究背景 2lWnt通路中的關(guān)鍵分子GSK-3B、APC和B-catenin與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的關(guān)系已有較多報道，而位于其上游的DVL和Axin是如何調(diào)控腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移的則少有報道l與B-catenin同一家族的p120ctn是否與Wnt通路有關(guān)尚不清楚l已有報道p120ctn能與Kaiso結(jié)合，而Kaiso只有入核信號，沒有出核信號，那么p120ctn是否具有調(diào)節(jié)Kaiso核漿分布的作用，進(jìn)而影響腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移尚無報道 -catenin在正常支氣管上皮細(xì)胞表現(xiàn)為膜表達(dá)，而在 NSCLC

6、中主要表現(xiàn)為細(xì)胞漿或核內(nèi)的蓄積，這種蓄積與NSCLC 的低分化和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)1. Axin對NSCLC中-catenin蓄積所起的作用我們用SSCP和直接測序法檢測了100例NSCLC 中-catenin第三外顯子突變情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)-catenin 的第三外顯子無一例突變 Am J Clin Pathol. 2006, 125(4):534-541是什么原因造成了-catenin 在肺癌細(xì)胞中的蓄積？ 我們發(fā)現(xiàn)我們發(fā)現(xiàn)Axin在在NSCLC中的表達(dá)明顯中的表達(dá)明顯下調(diào)下調(diào)轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染AxinAxin可明顯抑制肺癌細(xì)胞的可明顯抑制肺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移和增殖能力侵襲轉(zhuǎn)移和增殖能力過表達(dá)過表達(dá)Axin可

7、使可使肺癌細(xì)胞中肺癌細(xì)胞中高表達(dá)高表達(dá)的的-catenin出現(xiàn)明顯下調(diào)出現(xiàn)明顯下調(diào)我們猜測：我們猜測：Axin的表達(dá)減少可能是導(dǎo)致的表達(dá)減少可能是導(dǎo)致-catenin在在NSCLC中蓄積的原因之一中蓄積的原因之一 Ann Surg Oncol 2007, 14: 3251-9 我們將新鮮的我們將新鮮的NSCLC組織經(jīng)組織經(jīng)1 gray X-ray照射后發(fā)現(xiàn)照射后發(fā)現(xiàn)Axin的蛋白和的蛋白和mRNA均出現(xiàn)了明顯的上調(diào)，同時均出現(xiàn)了明顯的上調(diào)，同時Caspase-3的表達(dá)也出現(xiàn)了明顯的的表達(dá)也出現(xiàn)了明顯的上調(diào)上調(diào)既然既然Axin有如此明顯的抑癌作用，如有如此明顯的抑癌作用，如何上調(diào)何上調(diào)Axin的

8、表達(dá)呢？的表達(dá)呢？因此， X-ray是否能上調(diào)Axin的表達(dá)及水平是判定NSCLC是否對X-ray治療敏感的有用指標(biāo)X-ray 照射或轉(zhuǎn)染照射或轉(zhuǎn)染Axin都能上調(diào)肺癌細(xì)胞的凋亡率，都能上調(diào)肺癌細(xì)胞的凋亡率，轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染Axin加上加上X-ray照射可使凋亡率明顯增加照射可使凋亡率明顯增加Axin誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制是什么？誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制是什么？轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染Axin或不與或不與p53結(jié)合的結(jié)合的-Axin，再用，再用p53抑制劑抑制劑PFT-或或JNK抑制劑抑制劑SP處理處理 Int J Radio Oncol 2009我們意外地發(fā)現(xiàn)：過表達(dá)我們意外地發(fā)現(xiàn)：過表達(dá)AxinAxin可以下調(diào)可以下調(diào)TC

9、F-4TCF-4的轉(zhuǎn)錄，但機(jī)制不清的轉(zhuǎn)錄，但機(jī)制不清已有文獻(xiàn)報道：已有文獻(xiàn)報道：-catenin具有促進(jìn)具有促進(jìn)TCF-4轉(zhuǎn)錄，而轉(zhuǎn)錄，而p53具有抑具有抑 制制TCF-4轉(zhuǎn)錄的能力轉(zhuǎn)錄的能力 而而Axin既具有下調(diào)既具有下調(diào)-catenin的能力，又有激活的能力，又有激活 p53的能力的能力因此，因此，Axin既有可能是通過既有可能是通過-catenin，也有可能是通過，也有可能是通過p53下調(diào)下調(diào)TCF-4的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄我們?yōu)榱颂接戇@個問題，構(gòu)建了我們?yōu)榱颂接戇@個問題，構(gòu)建了Axin不能與不能與-catenin結(jié)合，結(jié)合，Axin不能與不能與p53結(jié)合，以及結(jié)合，以及Axin既不能既不能與與

10、-catenin也不能與也不能與p53結(jié)合的突變體結(jié)合的突變體轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染Axin在下調(diào)在下調(diào)-catenin 表達(dá)的同時可明顯下調(diào)表達(dá)的同時可明顯下調(diào)TCF-4的表達(dá)，的表達(dá)，但轉(zhuǎn)染但轉(zhuǎn)染Axin -ca即保留了即保留了p53作用時卻不能下調(diào)作用時卻不能下調(diào)-catenin和和TCF-4，但由于，但由于BE1細(xì)胞系是細(xì)胞系是p53突變型細(xì)胞系，因此尚不能確定突變型細(xì)胞系，因此尚不能確定Axin是否具有通過是否具有通過p53下調(diào)下調(diào)TCF-4的作用的作用因此，我們向因此，我們向BE1細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了野生型細(xì)胞中轉(zhuǎn)染了野生型p53，結(jié)果顯示單純轉(zhuǎn)染野，結(jié)果顯示單純轉(zhuǎn)染野生型生型p53可以下調(diào)可以下調(diào)TC

11、F-4，但共轉(zhuǎn)染，但共轉(zhuǎn)染Axin -ca和和p53后后TCF-4并沒并沒有出現(xiàn)進(jìn)一步下調(diào)，表明有出現(xiàn)進(jìn)一步下調(diào)，表明Axin并不能加強(qiáng)并不能加強(qiáng)p53下調(diào)下調(diào)TCF-4的作用的作用 Mol Cancer. 2010 Feb 2;9:25. 二、DVLs對Wnt通路的調(diào)節(jié)作用 非小細(xì)胞肺癌組織中存在DVL-1和3的過表達(dá)，其表達(dá)與高TNM分期、低分化有關(guān) Dvls在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)總是高于原發(fā)灶在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的表達(dá)總是高于原發(fā)灶Dvl-1 和和Dvl-3的過表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的不良預(yù)后相關(guān)的過表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的不良預(yù)后相關(guān)Lung Cancer (2008) 62, 181192我們發(fā)

12、現(xiàn)：過表達(dá)Dvl-1可以明顯的上調(diào)-catenin的蛋白水平，同時激活TCF-4依賴的轉(zhuǎn)錄活性，表明Dvl-1主要參與經(jīng)典的Wnt通路而過表達(dá)Dvl-3卻不能明顯上調(diào)-catenin水平和TCF-4依賴的轉(zhuǎn)錄活性但無論過表達(dá)Dvl-1還是Dvl-3均能明顯增強(qiáng)肺癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力我們發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)染我們發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)染Dvl-3能明顯上調(diào)肺癌細(xì)胞中磷酸化的能明顯上調(diào)肺癌細(xì)胞中磷酸化的 JNK和和p38水平水平 那么那么Dvl-3是怎樣促進(jìn)肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的呢？是怎樣促進(jìn)肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的呢？ 并且明顯下調(diào)并且明顯下調(diào)RhoA的活性的活性上調(diào)上調(diào)Cdc42和和Rac1活性活性我們發(fā)現(xiàn)：過表達(dá)我們發(fā)現(xiàn)：過表

13、達(dá)DVL-3上調(diào)上調(diào)p120mRNA水水平但是轉(zhuǎn)染但是轉(zhuǎn)染Dvl-1卻不能卻不能ChIP分析證實(shí)了轉(zhuǎn)錄因子分析證實(shí)了轉(zhuǎn)錄因子Pax6可以可以直接與直接與p120ctn的啟動子區(qū)結(jié)合的啟動子區(qū)結(jié)合上述結(jié)果說明：上述結(jié)果說明：Dvl-3調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)Pax6，而，而Pax6又與又與p120ct的啟動的啟動 子區(qū)作用，進(jìn)而啟動了子區(qū)作用，進(jìn)而啟動了p120ctn的轉(zhuǎn)錄的轉(zhuǎn)錄 但但Dvl-3是如何上調(diào)是如何上調(diào)Pax6的尚不清楚的尚不清楚上述結(jié)果提示我們上述結(jié)果提示我們p120ctn通過通過Dvl-3與與Wnt通路聯(lián)系通路聯(lián)系p120ctn與與Wnt 通路之間還存在哪些聯(lián)系呢？通路之間還存在哪些聯(lián)系呢？3.

14、 p120ctn 在肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用，及其在肺癌侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用，及其 與與Wnt通路的聯(lián)系通路的聯(lián)系p120ctn在肺癌中的異常表達(dá)及意義在肺癌中的異常表達(dá)及意義 肺癌中肺癌中p120ctn-1A、3A和和E-cadherin的表的表達(dá)下調(diào)與達(dá)下調(diào)與small GTP酶過表達(dá)相關(guān)酶過表達(dá)相關(guān)Lung Cancer 63 (2009) 375382 敲除敲除p120ctn后，后，Pulldown結(jié)果證實(shí)結(jié)果證實(shí)cdc42、Rac1活性增強(qiáng)，但活性增強(qiáng)，但RhoA活性下降活性下降E-cadherin的蛋白表達(dá)下降的蛋白表達(dá)下降敲除p120ctn后S期細(xì)胞比例增加、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng) 過表

15、達(dá)過表達(dá)p120-1A下調(diào)下調(diào)Rac1活性活性而過表達(dá)而過表達(dá)p120-3A下調(diào)下調(diào)Cdc42活性活性p120ctn-1A 和和 3A都可抑制都可抑制肺癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)肺癌細(xì)胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移移 但是但是p120ctn-1A 抑制肺癌抑制肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力強(qiáng)于細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移的能力強(qiáng)于3A而而p120ctn-3A 抑制增殖的抑制增殖的能力明顯強(qiáng)于能力明顯強(qiáng)于1AExp Cell Res 2009, 315: 890-898 我們發(fā)現(xiàn)：我們發(fā)現(xiàn)：轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染 p120-1A可以明顯可以明顯的上調(diào)的上調(diào) -catenin的蛋白的蛋白和和mRNA的表達(dá)的表達(dá)我們得出以下結(jié)論我們得出以下結(jié)論: p12

16、0ctn-1A通過通過-catenin 與與 Wnt通路關(guān)聯(lián)通路關(guān)聯(lián) Kaiso是如何出核的？是如何出核的？4. Kaiso 在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用 Kaiso 過表達(dá)與過表達(dá)與NSCLC不良預(yù)后相關(guān)不良預(yù)后相關(guān)BMC Cancer. 2009, 9: 178 無論是在肺癌原發(fā)灶和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中，Kaiso 和p120ctn總是呈現(xiàn)同樣的表達(dá)部位免疫共沉淀證實(shí)，無論在肺癌組織還是細(xì)胞系中，Kaiso和p120都可以形成復(fù)合體 干擾干擾p120后后Kaiso核內(nèi)增多，核漿蛋白分離核內(nèi)增多，核漿蛋白分離進(jìn)一步驗證進(jìn)一步驗證Kaiso在核內(nèi)分布增多在核內(nèi)分布增多說明：p120無

17、論在細(xì)胞漿還是在核內(nèi)，都能與Kaiso結(jié)合轉(zhuǎn)染p120ctn-3A，Kaiso和p120ctn主要為漿表達(dá)LMB阻斷p120ctn出核則p120ctn和Kaiso主要位于核內(nèi)轉(zhuǎn)染p120-NLS-3A入核序列質(zhì)粒則p120ctn位于核內(nèi)，Kaiso也位于核內(nèi)我們得出結(jié)論：我們得出結(jié)論：p120ctn-3A影響影響Kaiso的核漿分布，的核漿分布，Kaiso的出核的出核 依賴與依賴與p120ctn-3A的存在的存在Exp Cell Res (revised)結(jié)論：lAxin、 DVL、 p120ctn、Kaiso在肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要的調(diào)控作用l-catenin在NSCLC中蓄積是由于Axi

18、n表達(dá)下調(diào) 所致，過表達(dá)Axin或用X線照射肺癌組織上調(diào)Axin的表達(dá)，都可明顯抑制肺癌的侵襲轉(zhuǎn)移，促進(jìn)肺癌細(xì)胞凋亡lP120與Wnt通路中的關(guān)鍵分子Dvl-3和-catenin相關(guān)lKaiso是通過與p120-3A結(jié)合被攜帶出核的Published ariticles (directly relative) 1. Axin downregulates TCF-4 transcription via beta-catenin, but not p53, and inhibits the proliferation and invasion of lung cancer cells. Mol C

19、ancer. 2010 Feb 2;9:25. 2. Cytoplasmic Kaiso is associated with poor prognosis in non-small cell lung cancer. BMC Cancer. 2009 Jun 9;9:178. 3. Kaiso is expressed in lung cancer: its expression and localization is affected by p120ctn. Lung Cancer 2010, 67(2):205-215. 4. X-ray induces non-smal cell lu

20、ng cancer apoptosis by up regulating Axin expression. Inter J Rad Onc. Biol. Phys. 2009,75(2): 518-265. Ablation of p120-Catenin Enhances Invasion and Metastasis of Human Lung Cancer Cells. Cancer Sci. 2009, 100(3):441-448. 6. Abnormal expression of p120-catenin, E-cadherin, and small GTPases is sig

21、nificantlyassociated with malignant phenotype of human lung cancer. Lung cancer. 2009, 63:375-382. 7. P120-catenin Isoforms 1A and 3A Differently Affect Invasion and Proliferation of Lung Cancer Cells. Exp cell res. 2009, 315(5):890-898. 8. Dishevelled family proteins are expressed in non-small cell

22、 lung cancer and function differentially on tumor progression. Lung Cancer .2008;62 (2): 181-19 9. Reduction of p120(ctn) isoforms 1 and 3 is significantly associated with metastatic progression of human lung cancer. APMIS. 2007, 115(7):848-56. 10. Overexpression of Axin Downregulates TCF-4 and Inhi

23、bits the Development of Lung Cancer. Ann Surg Oncol. 2007, 14(11):3251-9. 11. Abnormal beta-catenin and reduced axin expression are associated with poor differentiation and progression in non-small cell lung cancer. Am J Clin Pathol. 2006, 125(4):534-541. 12. Abnormal expression and clinicopathologi

24、c significance of p120-catenin in lung cancer. Histol Histopathol. 2006, 21(8):841-847. 13. Expression of T cell factor-4 in non-small cell lung cancer. Chin Med J . 2005, 118(2):136-40. 14. Connexin 43 recruits E-cadherin expression and inhibits the malignant behaviour of lung cancer cells. Folia H

25、istochem Cytobiol. 2008;46(3):315-21. 15. Expression of serine threonine kinase 15 is associated with poor differentiation in lung squamous cell carcinoma and adenocarcinoma. Pathol Int. 2006, 56(7):375-380. 是由細(xì)胞產(chǎn)生或分泌，對細(xì)胞生長，分化等是由細(xì)胞產(chǎn)生或分泌，對細(xì)胞生長，分化等具有顯著調(diào)節(jié)作用的多肽具有顯著調(diào)節(jié)作用的多肽目前已發(fā)現(xiàn)的生長因子已有目前已發(fā)現(xiàn)的生長因子已有5050多種，并

26、有新多種，并有新的因子的報道，其中部分生長因子的結(jié)構(gòu)與的因子的報道，其中部分生長因子的結(jié)構(gòu)與生物學(xué)活性已基本搞清，有的已商品化，并生物學(xué)活性已基本搞清，有的已商品化，并在臨床上得以應(yīng)用在臨床上得以應(yīng)用一、生長因子一、生長因子growth factorgrowth factor意義意義 對各類生長因子的廣泛深入的研究，對各類生長因子的廣泛深入的研究，將有助于人類對胚胎發(fā)育、組織與器將有助于人類對胚胎發(fā)育、組織與器官的形成等基本生物學(xué)問題的認(rèn)識官的形成等基本生物學(xué)問題的認(rèn)識（如干細(xì)胞）同時對腫瘤，血管疾病（如干細(xì)胞）同時對腫瘤，血管疾病的診斷治療以及對創(chuàng)傷修復(fù)技術(shù)的提的診斷治療以及對創(chuàng)傷修復(fù)技術(shù)的

27、提高等都將產(chǎn)生巨大的影響高等都將產(chǎn)生巨大的影響（一）生長因子分類（一）生長因子分類 生長因子種類繁多，來源復(fù)雜，結(jié)生長因子種類繁多，來源復(fù)雜，結(jié)構(gòu)各異，生物學(xué)作用與其它細(xì)胞因子構(gòu)各異，生物學(xué)作用與其它細(xì)胞因子間又有交叉，因此，單靠一種分類方間又有交叉，因此，單靠一種分類方法是不足以反應(yīng)生長因子的本質(zhì)和作法是不足以反應(yīng)生長因子的本質(zhì)和作用機(jī)制的。目前的分類方法有以下幾用機(jī)制的。目前的分類方法有以下幾種種1.1.根據(jù)生物學(xué)效應(yīng)根據(jù)生物學(xué)效應(yīng)細(xì)胞生長促進(jìn)因子細(xì)胞生長促進(jìn)因子細(xì)胞生長抑制因子細(xì)胞生長抑制因子生長抑素生長抑素注意注意 同一種生長因子，對不同的組織細(xì)胞或同同一種生長因子，對不同的組織細(xì)胞或

28、同一種組織細(xì)胞的不同生長階段，可有相反的一種組織細(xì)胞的不同生長階段，可有相反的作用作用 如轉(zhuǎn)化生長因子（如轉(zhuǎn)化生長因子（TGF-TGF-）早期纖維母細(xì)）早期纖維母細(xì)胞生長胞生長，晚期起抑制作用，對細(xì)胞的增殖，晚期起抑制作用，對細(xì)胞的增殖既有促進(jìn)又有抑制既有促進(jìn)又有抑制2.2.根據(jù)理化特性根據(jù)理化特性單鏈多肽單鏈多肽表皮生長因子表皮生長因子EGFEGF含糖鏈的多肽二聚體蛋白含糖鏈的多肽二聚體蛋白PDGFPDGF糖蛋白糖蛋白集落刺激因子集落刺激因子CSFCSF和白細(xì)胞介和白細(xì)胞介素素ILIL3.3.根據(jù)其作用細(xì)胞類型根據(jù)其作用細(xì)胞類型 單價因子單價因子一種因子只作用于一類細(xì)一種因子只作用于一類細(xì)胞

29、胞 多價因子多價因子一種因子可作用于不同類一種因子可作用于不同類型細(xì)胞型細(xì)胞4.4.按其作用效果按其作用效果增殖因子增殖因子IL-2、IL-3、GM-CSF、BCGF分化因子分化因子IL-2、IL-3、BCGF、IFN效應(yīng)因子效應(yīng)因子TNF（二）生長因子作用的靶細(xì)胞范圍（二）生長因子作用的靶細(xì)胞范圍 隨著對各類生長因子的認(rèn)識不斷加深，發(fā)現(xiàn)生隨著對各類生長因子的認(rèn)識不斷加深，發(fā)現(xiàn)生長因子的作用和作用范圍都較原來發(fā)現(xiàn)時廣得多，長因子的作用和作用范圍都較原來發(fā)現(xiàn)時廣得多，寬得多寬得多舉例舉例 在免疫細(xì)胞中分離出來在免疫細(xì)胞中分離出來IL-IIL-I，起初認(rèn)為是調(diào)節(jié)，起初認(rèn)為是調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)的信號分子，

30、后來發(fā)現(xiàn)，還對角質(zhì)細(xì)胞、免疫系統(tǒng)的信號分子，后來發(fā)現(xiàn)，還對角質(zhì)細(xì)胞、f f母細(xì)胞，星狀細(xì)胞，軟骨細(xì)胞有作用母細(xì)胞，星狀細(xì)胞，軟骨細(xì)胞有作用另外另外 從非免疫細(xì)胞中分離出來的轉(zhuǎn)化生長因子從非免疫細(xì)胞中分離出來的轉(zhuǎn)化生長因子TGF-TGF-卻有著很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，在抑制卻有著很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用，在抑制T T細(xì)胞功能上要比環(huán)孢霉素至少強(qiáng)細(xì)胞功能上要比環(huán)孢霉素至少強(qiáng)1010倍。同時也倍。同時也有很強(qiáng)的抑制有很強(qiáng)的抑制B B細(xì)胞合成免疫球蛋白的作用。細(xì)胞合成免疫球蛋白的作用。因此，它是在器官移植方面，一個非常好的生因此，它是在器官移植方面，一個非常好的生物制劑物制劑（三）生長因子作用的處境依賴性三）生

31、長因子作用的處境依賴性 生長因子的作用及作用強(qiáng)度是視其周圍環(huán)境條生長因子的作用及作用強(qiáng)度是視其周圍環(huán)境條件而定的，即依賴于受體和其它效應(yīng)分子的存在件而定的，即依賴于受體和其它效應(yīng)分子的存在舉例舉例TGF-在在EGF存在時，對存在時，對f母細(xì)胞的生長起抑制作用母細(xì)胞的生長起抑制作用TGF-在在PDGF存在時，對存在時，對f母細(xì)胞的生長起促進(jìn)作用母細(xì)胞的生長起促進(jìn)作用另外另外TNF在在IL-1和和TGF-存在時才發(fā)揮作用存在時才發(fā)揮作用因此要辯證地看待生長因子作用的廣泛性、可變性因此要辯證地看待生長因子作用的廣泛性、可變性（四）生長因子與原癌基因產(chǎn)物的關(guān)系（四）生長因子與原癌基因產(chǎn)物的關(guān)系 絕大多

32、數(shù)原癌基因產(chǎn)物已被證明都是與細(xì)胞生絕大多數(shù)原癌基因產(chǎn)物已被證明都是與細(xì)胞生長，增殖、分化有關(guān)的蛋白質(zhì)?，F(xiàn)已搞清，生長長，增殖、分化有關(guān)的蛋白質(zhì)?，F(xiàn)已搞清，生長調(diào)控基因與原癌基因，在很大程序上就是一回事調(diào)控基因與原癌基因，在很大程序上就是一回事舉例舉例 sissis基因表達(dá)產(chǎn)物與基因表達(dá)產(chǎn)物與PDGFPDGF的的B B鏈有鏈有92%92%的同源性，的同源性，erbBerbB基因產(chǎn)物與基因產(chǎn)物與EGFEGF受體高度同源受體高度同源所以，在一定程度上講，癌蛋白就是生長因子、所以，在一定程度上講，癌蛋白就是生長因子、受體、細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子或受體、細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子或DNADNA結(jié)合蛋白結(jié)合蛋白（五）

33、生長因子的臨床應(yīng)用（五）生長因子的臨床應(yīng)用 生長因子參與了炎癥、血管新生、損傷修復(fù)生長因子參與了炎癥、血管新生、損傷修復(fù)和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在腫瘤形成中起關(guān)鍵作用和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在腫瘤形成中起關(guān)鍵作用的生長因子，在炎癥、損傷修復(fù)中，卻是一種的生長因子，在炎癥、損傷修復(fù)中，卻是一種正常的反應(yīng)性的生理表達(dá)，這種表達(dá)也是至關(guān)正常的反應(yīng)性的生理表達(dá)，這種表達(dá)也是至關(guān)重要的重要的目前應(yīng)用目前應(yīng)用TGF-TGF-用于抑制免疫反應(yīng)和排斥反應(yīng)用于抑制免疫反應(yīng)和排斥反應(yīng)bFGFbFGF用于抑制腫瘤內(nèi)血管形成用于抑制腫瘤內(nèi)血管形成GM-CSFGM-CSF用于再障或放化療后用于再障或放化療后 幾乎每種生長因子都可用

34、基因重組方法生產(chǎn)，幾乎每種生長因子都可用基因重組方法生產(chǎn)，未來的未來的1010年將是生長因子從基礎(chǔ)到臨床過渡的年將是生長因子從基礎(chǔ)到臨床過渡的1010年年幾種常見的生長因子：幾種常見的生長因子：1.1.血小板源生長因子血小板源生長因子 platelet-derived growth factor PDGFplatelet-derived growth factor PDGF，最初是，最初是在血小板中發(fā)現(xiàn)的一種促分裂劑在血小板中發(fā)現(xiàn)的一種促分裂劑1)1)這一名稱不夠準(zhǔn)確這一名稱不夠準(zhǔn)確，因為血小板可產(chǎn)生許多生長，因為血小板可產(chǎn)生許多生長因子因子血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子vascul

35、ar endothelial growth factor，VEGF表皮生長因子表皮生長因子epidermal growth factor，EGF轉(zhuǎn)化生長因子轉(zhuǎn)化生長因子transforming growth factor-，TGF-2）另外，許多細(xì)胞都可產(chǎn)生）另外，許多細(xì)胞都可產(chǎn)生PDGF如VSMC、表皮細(xì)胞、皮膚f母細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞PDGF分子量為28-35KDa，由A、B兩條鏈組成，B鏈與sis原癌基因編碼蛋白有92%同源性體內(nèi)存在形式：PDGF-AA PDGF-BB PDGF-ABA鏈與A受體結(jié)合B鏈即能與B又能與A結(jié)合購買抗體時應(yīng)注意實(shí)驗的組織或細(xì)胞上是否存在被檢受體生物作用生物作用誘導(dǎo)

36、細(xì)胞增殖，是一種強(qiáng)促有絲分裂劑誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，是一種強(qiáng)促有絲分裂劑趨化作用，引起間充質(zhì)細(xì)胞、單核細(xì)胞、中趨化作用，引起間充質(zhì)細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞，定向遷移及釋放顆粒性粒細(xì)胞，定向遷移及釋放顆粒引起引起-型膠原的合成和分泌，調(diào)節(jié)細(xì)胞外型膠原的合成和分泌，調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)基質(zhì) PDGF的臨床意義的臨床意義1)創(chuàng)傷修復(fù)創(chuàng)傷修復(fù)創(chuàng)口處血小板沉積創(chuàng)口處血小板沉積PDGF中性中性WBC、單核、單核/巨噬巨噬C內(nèi)移清除異物內(nèi)移清除異物cap f母細(xì)胞、母細(xì)胞、SMC內(nèi)內(nèi)移、增生移、增生肉芽肉芽填補(bǔ)傷口填補(bǔ)傷口cap f母細(xì)胞、母細(xì)胞、SMC釋放釋放PDGFC.T增生、增加增生、增加膠原沉積膠原沉積愈合愈合

37、舉例舉例 Knighton采用病人自身血小板釋采用病人自身血小板釋放物質(zhì)（放物質(zhì)（PDGF），處理因糖尿?。幚硪蛱悄虿〕霈F(xiàn)的難愈合的皮下潰瘍，使瀕于出現(xiàn)的難愈合的皮下潰瘍，使瀕于截肢危險的潰瘍得到了愈合截肢危險的潰瘍得到了愈合2)2)動脈粥樣硬化形成及血管再狹窄動脈粥樣硬化形成及血管再狹窄動脈內(nèi)皮細(xì)胞動脈內(nèi)皮細(xì)胞 血小板血小板增殖增殖內(nèi)膜增厚內(nèi)膜增厚SMC收縮型收縮型分泌型分泌型膠原沉積膠原沉積硬化硬化PTCA血管移植血管移植PDGFVSMC游走游走分裂分裂PDGFSMC游走、增殖游走、增殖再狹窄再狹窄restenosis設(shè)想設(shè)想用單克隆抗體中和局部產(chǎn)生的用單克隆抗體中和局部產(chǎn)生的PDGF

38、在動物及細(xì)胞培養(yǎng)上獲得成功，但用于人體，在動物及細(xì)胞培養(yǎng)上獲得成功，但用于人體，給藥途徑受到限制給藥途徑受到限制antisense RNA局部轉(zhuǎn)染，可以研究探討局部轉(zhuǎn)染，可以研究探討抑制疤痕形成抑制疤痕形成中和抗體和反義中和抗體和反義RNA技術(shù)等技術(shù)等但應(yīng)注意但應(yīng)注意 PDGFPDGF的作用，不是孤立的，它是在其它細(xì)的作用，不是孤立的，它是在其它細(xì)胞因子和生長因子也參與細(xì)胞反應(yīng)的復(fù)雜環(huán)胞因子和生長因子也參與細(xì)胞反應(yīng)的復(fù)雜環(huán)境中發(fā)揮其作用的，也就是說，抑制了境中發(fā)揮其作用的，也就是說，抑制了PDGFPDGF的作用只是一個方面，而其它的因子仍然在的作用只是一個方面，而其它的因子仍然在起作用，在判定

39、實(shí)驗結(jié)果時，要綜合進(jìn)行考起作用，在判定實(shí)驗結(jié)果時，要綜合進(jìn)行考慮慮2.纖維母細(xì)胞生長因子纖維母細(xì)胞生長因子 fibroblast growth factor 最初是在腦和垂體中發(fā)現(xiàn)，對纖維母細(xì)胞有最初是在腦和垂體中發(fā)現(xiàn)，對纖維母細(xì)胞有促分裂作用而命名的。促分裂作用而命名的。FGF本身種類繁多，由本身種類繁多，由于制備方法和來源不同給予許多特殊命名，因于制備方法和來源不同給予許多特殊命名，因此，極易混淆。如肝素結(jié)合生長因子等。多數(shù)此，極易混淆。如肝素結(jié)合生長因子等。多數(shù)人認(rèn)為，按其等電點(diǎn)分為兩類比較合適，人認(rèn)為，按其等電點(diǎn)分為兩類比較合適，即即aFGF和和bFGF FGF與原癌基因與原癌基因hs

40、t，int-2編碼的蛋編碼的蛋白有很大同源性白有很大同源性來源來源f母母c，血管內(nèi)皮，血管內(nèi)皮C、SMC，粒，粒C，腎上，腎上腺皮質(zhì)腺皮質(zhì)C、星形膠質(zhì)、星形膠質(zhì)C，腫瘤細(xì)胞等，腫瘤細(xì)胞等生物作用生物作用強(qiáng)的血管生長因子，誘發(fā)新生強(qiáng)的血管生長因子，誘發(fā)新生capcap作用作用促進(jìn)創(chuàng)傷愈合和組織修復(fù)促進(jìn)創(chuàng)傷愈合和組織修復(fù)參與胚胎發(fā)育和分化參與胚胎發(fā)育和分化刺激外周神經(jīng)再生和營養(yǎng)神經(jīng)的作用刺激外周神經(jīng)再生和營養(yǎng)神經(jīng)的作用調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的作用調(diào)節(jié)內(nèi)分泌的作用FGF的臨床意義的臨床意義創(chuàng)傷愈合創(chuàng)傷愈合FGF用于治療胃潰瘍方面的嘗試最多，但用于治療胃潰瘍方面的嘗試最多，但由于由于FGF不穩(wěn)定，全身投與很難達(dá)到

41、胃潰不穩(wěn)定，全身投與很難達(dá)到胃潰瘍部位，直接口服由于胃酸的破壞使其作瘍部位，直接口服由于胃酸的破壞使其作用大大減弱用大大減弱辦法：辦法：FGF可與肝素結(jié)合，不僅穩(wěn)定，且可與肝素結(jié)合，不僅穩(wěn)定，且耐酸、耐熱，可獲較好的效果耐酸、耐熱，可獲較好的效果腫瘤治療腫瘤治療實(shí)體腫瘤無一例外均能產(chǎn)生實(shí)體腫瘤無一例外均能產(chǎn)生FGFautocrineautointra-factorparacrine血管生長血管生長自身增殖自身增殖舉例舉例利用利用bFGFbFGF單抗中和單抗中和FGFFGF，達(dá)到對腫，達(dá)到對腫瘤的治療，在動物體內(nèi)獲成功瘤的治療，在動物體內(nèi)獲成功蘇拉明阻止蘇拉明阻止bFGFbFGF與受體結(jié)合，達(dá)到

42、與受體結(jié)合，達(dá)到了對腫瘤的抑制了對腫瘤的抑制設(shè)想設(shè)想用人的用人的bFGFbFGF單抗和受體單抗，結(jié)合介入單抗和受體單抗，結(jié)合介入局部給藥，或放入支架制成緩釋劑局部給藥，或放入支架制成緩釋劑結(jié)合介入，局部給予反義結(jié)合介入，局部給予反義RNA-RNA-基因治基因治內(nèi)皮支架基因表達(dá)內(nèi)皮支架基因表達(dá) 促進(jìn)側(cè)枝循環(huán)的形成促進(jìn)側(cè)枝循環(huán)的形成 大面積心梗最令人擔(dān)心的是猝死，但經(jīng)大面積心梗最令人擔(dān)心的是猝死，但經(jīng)搶救免于一死，也擔(dān)心心臟破裂或室壁瘤的搶救免于一死，也擔(dān)心心臟破裂或室壁瘤的出現(xiàn)。如何加強(qiáng)梗死部位的強(qiáng)度，最好的方出現(xiàn)。如何加強(qiáng)梗死部位的強(qiáng)度，最好的方式就是能盡快機(jī)化。而式就是能盡快機(jī)化。而bFGF

43、bFGF是一種強(qiáng)的新生是一種強(qiáng)的新生CapCap生成因子。國外在狗模型中證實(shí)給梗死生成因子。國外在狗模型中證實(shí)給梗死部位血管內(nèi)注入部位血管內(nèi)注入bFGFbFGF，很快使梗死面積縮小，很快使梗死面積縮小，組織學(xué)上有較多的側(cè)枝循環(huán)的出現(xiàn)。說明組織學(xué)上有較多的側(cè)枝循環(huán)的出現(xiàn)。說明FGFFGF用于治療心梗方面可望成為可能用于治療心梗方面可望成為可能血管再狹窄血管再狹窄PTCAbFGF PDGFSMS增生增生restenosis設(shè)想：狗設(shè)想：狗+介入球囊介入球囊心梗模型、冠狀血管狹窄心梗模型、冠狀血管狹窄模型模型放置放置注入注入bFGF心梗縮小心?？s小 注入注入bFGF抗體抗體狹窄減輕反義狹窄減輕反義R

44、NA周圍神經(jīng)再生周圍神經(jīng)再生 脊髓損傷脊髓損傷+bFGF 促進(jìn)神經(jīng)纖維膜細(xì)胞生長，軸促進(jìn)神經(jīng)纖維膜細(xì)胞生長，軸突長入突長入3.表皮生長因子表皮生長因子 epidermal growth factor EGF 是一個較早被發(fā)現(xiàn)的生長因子，是一個較早被發(fā)現(xiàn)的生長因子，EGF基因基因與與V-mos原癌基因有部分同源性，原癌基因有部分同源性，EGF受體基受體基因與因與erbB-1基因有基因有75%以上同源性，在人體以上同源性，在人體主要存在于各種體液或分泌物中，促進(jìn)愈合，主要存在于各種體液或分泌物中，促進(jìn)愈合，其中前列腺液、乳液中最高。除表皮細(xì)胞外，其中前列腺液、乳液中最高。除表皮細(xì)胞外，對許多細(xì)胞都

45、有促進(jìn)生長作用對許多細(xì)胞都有促進(jìn)生長作用應(yīng)用應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)液中加入培養(yǎng)液中加入EGF角膜損傷修復(fù)：在動物角膜上早獲成功，角膜損傷修復(fù)：在動物角膜上早獲成功，將將EGF制成點(diǎn)眼液，使角膜燒傷無法愈制成點(diǎn)眼液，使角膜燒傷無法愈合，只留光感的患者，幾周后恢復(fù)正常合，只留光感的患者，幾周后恢復(fù)正常皮膚創(chuàng)傷愈合皮膚創(chuàng)傷愈合1)植皮病人，加用植皮病人，加用EGF明顯達(dá)到了促進(jìn)創(chuàng)面愈明顯達(dá)到了促進(jìn)創(chuàng)面愈合的目的合的目的2)EGF體外培養(yǎng)自體表皮或表皮細(xì)胞，繁殖到體外培養(yǎng)自體表皮或表皮細(xì)胞，繁殖到一定數(shù)量后，將培養(yǎng)好的表皮植入創(chuàng)面，一定數(shù)量后，將培養(yǎng)好的表皮植入創(chuàng)面，或?qū)⑴囵B(yǎng)的表皮細(xì)胞象播種一樣撒在

46、創(chuàng)面，或?qū)⑴囵B(yǎng)的表皮細(xì)胞象播種一樣撒在創(chuàng)面，不僅加快愈合，也減少了疤痕產(chǎn)生不僅加快愈合，也減少了疤痕產(chǎn)生二、白細(xì)胞介素二、白細(xì)胞介素interleukins 為淋巴因子家族中一類，是聯(lián)系白細(xì)胞間相互作用的為淋巴因子家族中一類，是聯(lián)系白細(xì)胞間相互作用的細(xì)胞因子。共有細(xì)胞因子。共有18種，種，IL1-13研究的比較多，研究的比較多，IL14-18是是最近才被命名的最近才被命名的主要生物學(xué)作用：主要生物學(xué)作用：1.參與免疫反應(yīng)參與免疫反應(yīng) 在移植物排斥反應(yīng)、哮喘疾病發(fā)生、腫在移植物排斥反應(yīng)、哮喘疾病發(fā)生、腫瘤免疫中均起重要作用瘤免疫中均起重要作用它們的作用相互協(xié)同而加強(qiáng)它們的作用相互協(xié)同而加強(qiáng)如如I

47、L-1 BC增殖、分化、產(chǎn)生抗體增殖、分化、產(chǎn)生抗體 TC產(chǎn)生產(chǎn)生IL-2及及IL-2受體受體 IL-4,5 可協(xié)同加強(qiáng)可協(xié)同加強(qiáng)IL-1對對BC的作用的作用2.參與炎癥反應(yīng)參與炎癥反應(yīng)IL-1 使機(jī)體發(fā)熱，外周使機(jī)體發(fā)熱，外周WBC升高，促進(jìn)內(nèi)升高，促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子，增進(jìn)皮細(xì)胞表達(dá)粘附分子，增進(jìn)WBC與與之粘附之粘附IL-8 是中性是中性WBC趨化因子和激活因子趨化因子和激活因子 IL-12 是是T、NK細(xì)胞等免疫效應(yīng)細(xì)胞的促進(jìn)細(xì)胞等免疫效應(yīng)細(xì)胞的促進(jìn)因子，具有抗寄生蟲、病毒和細(xì)菌和因子，具有抗寄生蟲、病毒和細(xì)菌和抗腫瘤等功能抗腫瘤等功能3.3.參與損傷修復(fù)參與損傷修復(fù) IL-1 與

48、酸性與酸性FGF有同源性，促進(jìn)血有同源性，促進(jìn)血管新生管新生 IL-2 可使可使f母母C數(shù)量增加數(shù)量增加4.4.抗腫瘤作用抗腫瘤作用 IL-12 使使NK細(xì)胞激活細(xì)胞激活 使使CD8+T細(xì)胞細(xì)胞細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞細(xì)胞毒淋巴細(xì)胞CTL 這已在這已在IL-12轉(zhuǎn)基因動物研究中得到證實(shí)轉(zhuǎn)基因動物研究中得到證實(shí)IL-2 使使T細(xì)胞細(xì)胞淋巴細(xì)胞激活的殺傷細(xì)胞淋巴細(xì)胞激活的殺傷細(xì)胞 LAK細(xì)胞細(xì)胞 從外周血分離從外周血分離TC、經(jīng)、經(jīng)IL-12、2作用后，作用后， 回輸給病人回輸給病人抗抗 腫瘤作用腫瘤作用 白細(xì)胞介素功能很多，作用極強(qiáng)，白細(xì)胞介素功能很多，作用極強(qiáng)，相互間有重疊，誘導(dǎo)交叉，協(xié)同和拮抗，相互間

49、有重疊，誘導(dǎo)交叉，協(xié)同和拮抗，需要進(jìn)一步研究的方面較多，但抗病毒、需要進(jìn)一步研究的方面較多，但抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)控作用是肯定的。目前，抗腫瘤和免疫調(diào)控作用是肯定的。目前，絕大多數(shù)絕大多數(shù)IL可用基因工程方法生產(chǎn)，相可用基因工程方法生產(chǎn)，相信不久將廣泛用于臨床為人類造福信不久將廣泛用于臨床為人類造福三、細(xì)胞粘附分子三、細(xì)胞粘附分子 cell adhension molecules CAMSConcept:是一群在多種細(xì)胞上表達(dá)，介導(dǎo)細(xì)胞間是一群在多種細(xì)胞上表達(dá)，介導(dǎo)細(xì)胞間 粘附和具有傳遞信息作用的糖蛋白物質(zhì)粘附和具有傳遞信息作用的糖蛋白物質(zhì)分為以下分為以下5類類鈣離子依賴型蛋白家族鈣離子依賴型蛋白家族cadherin family CF 1. 主要參與特定組織和器官細(xì)胞間粘附，胞主要參與特定組織和器官細(xì)胞間粘附，胞內(nèi)段與細(xì)胞骨架聯(lián)結(jié)，因此較牢固內(nèi)段與細(xì)胞骨架聯(lián)結(jié)，因此較牢固可以想象：如肝細(xì)胞間無此種粘附，可以想象：如肝細(xì)胞間無此種粘附，就不會有肝這個器官，肝就不會有肝這個器官，肝C將將分布周身分布周身癌細(xì)胞：如果癌細(xì)胞：如果CF粘附表達(dá)下降，就粘附表達(dá)下降，就會出現(xiàn)浸襲和轉(zhuǎn)移會出現(xiàn)浸襲和轉(zhuǎn)移2.整合蛋白家族整合蛋白家族integrin family, IF IF多為跨膜結(jié)構(gòu)的受體型糖蛋白，主要多為跨膜結(jié)構(gòu)的受體型糖蛋白，主要參與細(xì)胞間，細(xì)胞與外