第十三章免疫細(xì)胞分離與功能檢測

1、人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社第十三章第十三章 免疫細(xì)胞分離與功能檢測及應(yīng)免疫細(xì)胞分離與功能檢測及應(yīng)用用 何何 印印 蕾民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社學(xué)習(xí)內(nèi)容學(xué)習(xí)內(nèi)容 1 1淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測及亞群分類淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測及亞群分類2 2抗原提呈細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測抗原提呈細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測3 3免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離其他免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)其他免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)5 5免疫細(xì)胞表面標(biāo)志和功能檢測的臨床應(yīng)用免疫細(xì)胞表面標(biāo)志和功能檢測的臨床應(yīng)用6 6淋巴細(xì)胞功能檢測淋巴細(xì)胞功能檢測4 4人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社目的要求目的要求掌握：掌握：Ficoll-hypaq

2、ue分層液分離分層液分離PBMC的的原理、方法，淋巴細(xì)胞亞群分離的原理、原理、方法，淋巴細(xì)胞亞群分離的原理、方法及應(yīng)用，方法及應(yīng)用，T細(xì)胞增殖試驗的方法，細(xì)胞增殖試驗的方法，B細(xì)細(xì)胞的數(shù)量及功能的檢測；胞的數(shù)量及功能的檢測；熟悉：熟悉：T細(xì)胞功能的體內(nèi)試驗，細(xì)胞功能的體內(nèi)試驗，T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒檢測的方法；細(xì)胞毒檢測的方法；了解：了解：淋巴細(xì)胞的純化與亞群分離的方法、淋巴細(xì)胞的純化與亞群分離的方法、吞噬細(xì)胞的分離方法、溶血空斑試驗。吞噬細(xì)胞的分離方法、溶血空斑試驗。人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社第一節(jié)第一節(jié) 免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社5免疫細(xì)胞的分離及檢測

3、免疫細(xì)胞的分離及檢測檢測：檢測：各類免疫細(xì)胞及其亞群的數(shù)量和各類免疫細(xì)胞及其亞群的數(shù)量和功能測定功能測定方法：方法：體外法為主體外法為主目的：目的：判斷機體免疫狀態(tài)判斷機體免疫狀態(tài)意義：意義：探討疾病的發(fā)病機制、發(fā)展、預(yù)后、療效探討疾病的發(fā)病機制、發(fā)展、預(yù)后、療效免疫細(xì)胞的分離免疫細(xì)胞的分離 是指將各種參與免疫反應(yīng)的是指將各種參與免疫反應(yīng)的 細(xì)胞從血液或組織中分離出來細(xì)胞從血液或組織中分離出來 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 免疫細(xì)胞的起源與分化免疫細(xì)胞的起源與分化 紅細(xì)胞 血小板 肥大細(xì)胞 中性粒細(xì)胞 巨噬細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞 漿細(xì)胞 T細(xì)胞 NK細(xì)胞人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社免疫細(xì)胞種類人民衛(wèi)

4、生出版社人民衛(wèi)生出版社免疫細(xì)胞的分離流程免疫細(xì)胞的分離流程外周血外周血PBMC純淋巴細(xì)胞純淋巴細(xì)胞T、B細(xì)胞細(xì)胞TC亞群亞群/BC亞群亞群人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 PBMCPBMC包括：淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞包括：淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞 各種血細(xì)胞比重不同各種血細(xì)胞比重不同, ,利用密度梯度離心進(jìn)行分離利用密度梯度離心進(jìn)行分離 常用分層液：常用分層液：ficollhypaque，percoll一、一、 外周血單個核細(xì)胞的分離和純化外周血單個核細(xì)胞的分離和純化人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社細(xì)胞細(xì)胞比重比重血小板血小板1.0301.035PBMC1.0751.090多核白細(xì)胞多核白細(xì)胞1.092紅細(xì)胞紅

5、細(xì)胞1.093外周血各細(xì)胞成分的密度人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 Ficoll分離液法分離液法是一種單次差速密度梯度離心是一種單次差速密度梯度離心的分離法，主要用于分離外周血中的單個核細(xì)胞。的分離法，主要用于分離外周血中的單個核細(xì)胞。Ficoll分層液：密度分層液：密度1.0771.0770.0010.001 離心：密度梯度離心離心：密度梯度離心 分離：各類細(xì)胞按其相應(yīng)密度重新分布分離：各類細(xì)胞按其相應(yīng)密度重新分布一、一、Ficoll分離法分離法人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社Ficoll分層液分離單個核細(xì)胞示意圖人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社二、淋巴細(xì)胞的分離二、淋巴細(xì)胞的分離 純淋巴細(xì)胞群的采集

6、純淋巴細(xì)胞群的采集 原理：利用單核細(xì)胞在原理：利用單核細(xì)胞在37和和Ca離子存在離子存在條件下，能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉條件下，能主動粘附在玻璃、塑料、尼龍毛、棉花纖維或葡聚糖凝膠的特性，據(jù)此建立許多從單花纖維或葡聚糖凝膠的特性，據(jù)此建立許多從單個核細(xì)胞中除去單核細(xì)胞的方法，以獲得高純度個核細(xì)胞中除去單核細(xì)胞的方法，以獲得高純度的淋巴細(xì)胞群。的淋巴細(xì)胞群。人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社(一一)粘附貼壁法粘附貼壁法因因B細(xì)胞也有貼壁現(xiàn)象，因此，本法分離細(xì)胞也有貼壁現(xiàn)象，因此，本法分離的淋巴細(xì)胞群中的淋巴細(xì)胞群中B細(xì)胞有所損失。細(xì)胞有所損失。(二二)吸附柱過濾法吸附柱過濾法 將單核將單核

7、細(xì)胞吸附于玻璃柱中，洗脫下來的細(xì)胞吸附于玻璃柱中，洗脫下來的主要是淋巴細(xì)胞主要是淋巴細(xì)胞人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 (三三)磁鐵吸引法磁鐵吸引法 利用單核細(xì)胞具有吞噬的特性，在利用單核細(xì)胞具有吞噬的特性，在懸液中加入羰基鐵顆粒，待單核細(xì)懸液中加入羰基鐵顆粒，待單核細(xì)胞吞噬鐵顆粒后，用磁鐵將細(xì)胞吸胞吞噬鐵顆粒后，用磁鐵將細(xì)胞吸至管底，上層液中含較純的淋巴細(xì)至管底，上層液中含較純的淋巴細(xì)胞群。胞群。人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社7898（四）Percoll分離法返回章目錄返回章目錄人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社三、T、B細(xì)胞和T細(xì)胞亞群的分離 免疫磁珠分離法免疫磁珠分離法 流式細(xì)胞術(shù)分離法流式細(xì)胞術(shù)

8、分離法 其他方法其他方法人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社（一）免疫磁珠分離（一）免疫磁珠分離法法 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社488 nm 激光激光+-前向散射光前向散射光檢測器檢測器 熒光檢測器熒光檢測器電磁場電磁場單個細(xì)胞被分類單個細(xì)胞被分類進(jìn)入檢測管進(jìn)入檢測管流流式式細(xì)細(xì)胞胞術(shù)術(shù)分分離離原原理理示示意意圖圖人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 第二節(jié)第二節(jié) 淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志淋巴細(xì)胞表面標(biāo)志的檢測及亞群分類的檢測及亞群分類人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社一、一、T細(xì)胞表面標(biāo)志及亞細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群群CD4+TCD8+TCD3+CD4+CD8-CD3+CD4-CD8+主要為主要為Th（help T cell

9、）輔助性）輔助性T細(xì)胞細(xì)胞主要為主要為Tc（cytotoxic T cell）細(xì)胞毒性）細(xì)胞毒性T細(xì)胞細(xì)胞人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社二、二、B細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群亞群細(xì)胞表面標(biāo)志及亞群亞群人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社NK細(xì)胞典型標(biāo)志：細(xì)胞典型標(biāo)志：CD56和和CD16三、三、 NK細(xì)胞表面標(biāo)志細(xì)胞表面標(biāo)志人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社第三節(jié)第三節(jié) 抗原提呈細(xì)胞表面標(biāo)志抗原提呈細(xì)胞表面標(biāo)志抗原提呈細(xì)胞（抗原提呈細(xì)胞（APCAPC）：）：是指能攝取、加工、處理抗原，并將抗原信息提呈是指能攝取、加工、處理抗原，并將抗原信息提呈給抗原特異性淋巴細(xì)胞的一類免疫細(xì)胞。給抗原特異性淋巴細(xì)胞的一類免疫細(xì)胞。單核

10、單核- -巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞樹突狀細(xì)胞樹突狀細(xì)胞人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社（1）分泌TNF-、NO、反應(yīng)氧中間產(chǎn)物及蛋白水解酶等（2）ADCC效應(yīng)（3）激活T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子等活化巨噬細(xì)胞協(xié)同殺傷腫瘤細(xì)胞。（一）（一）單核吞噬細(xì)胞（CD14）1.吞噬和殺傷作用 2.殺傷腫瘤細(xì)胞人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 形態(tài)呈樹突樣 具有一些相對特征性表面標(biāo)志 抗原提呈能力強能激活初始T細(xì)胞 免疫應(yīng)答的始動者二、樹突狀細(xì)胞二、樹突狀細(xì)胞 （dendritic cells，DC）特征：人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社1.起源于造血干細(xì)胞 由髓樣干細(xì)胞（多數(shù)）、淋巴干細(xì)胞分化。2.表面標(biāo)志豐富 如：MHC類分子及類

11、分子、B7-1和B7-2、CD40、CD1以及粘附分子等。3.分泌多種細(xì)胞因子 IL-1、IL-6、IL-12、TNF-、IFN-等。DCDC主要標(biāo)志：主要標(biāo)志：CD1aCD1a、CD11cCD11c、CD83CD83人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社第四節(jié)第四節(jié) T細(xì)胞功能檢測細(xì)胞功能檢測 一、一、T細(xì)胞功能檢測細(xì)胞功能檢測人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞DNADNA合成合成分化分化母細(xì)胞母細(xì)胞刺激物刺激物細(xì)胞變大細(xì)胞變大細(xì)胞漿擴大細(xì)胞漿擴大空泡空泡核仁明顯核仁明顯核染色質(zhì)疏松核染色質(zhì)疏松（一）（一）T淋巴細(xì)胞增殖試驗淋巴細(xì)胞增殖試驗人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 形態(tài)學(xué)檢查法形態(tài)學(xué)檢查

12、法 3H-TdR3H-TdR摻入法摻入法 MTTMTT比色法比色法 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的檢測方法淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的檢測方法人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社形態(tài)學(xué)檢查法形態(tài)學(xué)檢查法人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞未轉(zhuǎn)化的淋巴細(xì)胞淋巴母細(xì)胞淋巴母細(xì)胞 過渡型過渡型細(xì)胞大小細(xì)胞大小( (直徑直徑m)m)12122020121216166 68 8核大小、染色質(zhì)核大小、染色質(zhì)增大、疏松增大、疏松增大、疏松增大、疏松不增大、密集不增大、密集核仁核仁清晰、清晰、1 14 4個個有或無有或無無無有絲分裂有絲分裂有或無有或無無無無無胞質(zhì)、著色胞質(zhì)、著色增多、嗜堿增多、嗜堿增多、嗜堿

13、增多、嗜堿極少、天青色極少、天青色漿內(nèi)空泡漿內(nèi)空泡有或無有或無有或無有或無無無偽足偽足有或無有或無有或無有或無無無未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的形態(tài)特征未轉(zhuǎn)化和轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的形態(tài)特征人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社原理：原理：刺激物刺激物3756hG1期期 S1期期 合成合成DNADNA 3H-TdR3716hDNA- 3H-TdR測淋巴細(xì)胞內(nèi)放射量（測淋巴細(xì)胞內(nèi)放射量（cpmcpm）計算計算SISI判斷淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度判斷淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化程度外周血（外周血（T T）G G0 0期期3H-TdR摻入法摻入法人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社評價：該方法敏感性高、客觀性強、重復(fù)評價：該方法敏感性高、客觀性強、重復(fù)性好

14、、可自動操作；設(shè)備昂貴、放射污染性好、可自動操作；設(shè)備昂貴、放射污染。 刺激指數(shù)（刺激指數(shù)（stimulating indexstimulating index，SI SI ） SI=SI=試驗管試驗管cpmcpm均值均值/ /對照管對照管cpmcpm均值均值3H-TdR摻入法摻入法人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社放射性測定放射性測定3H-TdR絲裂原（抗原）刺激絲裂原（抗原）刺激淋淋巴巴細(xì)細(xì)胞胞轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)化化試試驗驗原原理理示示意意3H-TdR摻入法摻入法人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社原理原理: :用刺激劑體外激活淋巴細(xì)胞，用蛋白轉(zhuǎn)運抑用刺激劑體外激活淋巴細(xì)胞，用蛋白轉(zhuǎn)運抑制如莫能霉素阻止細(xì)胞因子分泌到

15、細(xì)胞外，細(xì)胞制如莫能霉素阻止細(xì)胞因子分泌到細(xì)胞外，細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運方式被打亂，引起細(xì)胞因子向高爾內(nèi)蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運方式被打亂，引起細(xì)胞因子向高爾基體積聚，用流式細(xì)胞儀便可測出淋巴細(xì)胞內(nèi)的基體積聚，用流式細(xì)胞儀便可測出淋巴細(xì)胞內(nèi)的細(xì)胞因子種類，從而確定細(xì)胞因子種類，從而確定TH1/ TH2TH1/ TH2細(xì)胞的百分率。細(xì)胞的百分率。淋巴細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測淋巴細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測（二）（二）T細(xì)胞分泌功能檢定細(xì)胞分泌功能檢定人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社分泌的細(xì)胞因子分泌的細(xì)胞因子 Thl Th2Thl Th2 IL-2 + - IFN- + - TNF- + + IL-3 + + GM-CSF + + T

16、NF- - + IL-4 - + IL-5 - + IL-6 - + IL-10 - + Thl和和Th2分泌的細(xì)胞因子分泌的細(xì)胞因子人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社原理原理:靶細(xì)胞抗原靶細(xì)胞抗原T T細(xì)胞細(xì)胞觀察殺傷活力觀察殺傷活力致敏致敏CTLCTL靶細(xì)胞靶細(xì)胞（三）（三）T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 試驗方法試驗方法: 同位素法同位素法 淋巴細(xì)胞（淋巴細(xì)胞（CTLCTL）+ +含含51Cr 51Cr 的腫瘤細(xì)胞的腫瘤細(xì)胞 腫瘤細(xì)胞破壞腫瘤細(xì)胞破壞 51Cr 51Cr 釋放釋放 測定測定射線射線51Cr特異釋放率= 均值對照孔均值最大釋放孔均值對照孔均

17、值試驗孔cpmcpmcpmcpm100%（三）（三）T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社（三）（三）T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒試驗背景無效應(yīng)細(xì)胞背景無效應(yīng)細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞靶細(xì)胞 1:1效應(yīng)細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞靶細(xì)胞 5:1效應(yīng)細(xì)胞效應(yīng)細(xì)胞/靶細(xì)胞靶細(xì)胞 20:1細(xì)胞溶解細(xì)胞溶解人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社特異性抗原皮膚試驗特異性抗原皮膚試驗PHAPHA皮膚試驗皮膚試驗（四）體內(nèi)試驗（四）體內(nèi)試驗人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社溶血空斑試驗溶血空斑試驗酶聯(lián)免疫斑點試驗酶聯(lián)免疫斑點試驗體內(nèi)試驗體內(nèi)試驗二、二、B細(xì)胞功能檢測細(xì)胞功能檢測人民衛(wèi)生出

18、版社人民衛(wèi)生出版社（一）溶血空斑試驗（一）溶血空斑試驗溶血斑溶血斑補體抗血清包被抗血清包被綿羊紅細(xì)胞綿羊紅細(xì)胞人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社（二）酶聯(lián)免疫斑點法（二）酶聯(lián)免疫斑點法抗體產(chǎn)生抗體產(chǎn)生B細(xì)胞細(xì)胞抗原抗原包被包被酶聯(lián)抗酶聯(lián)抗抗體抗體凝膠底物凝膠底物顯色顯色人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社刺激體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有刺激體內(nèi)抗體產(chǎn)生的特異性抗原有白喉類毒素白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素破傷風(fēng)類毒素、多價肺炎鏈球菌多價肺炎鏈球菌等。等。將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前將適量抗原皮下或肌肉注射免疫，并于免疫前及免疫后及免疫后1 1周、周、2 2周、周、3 3周分別采血，分離血清，周分別采血，

19、分離血清，測定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的效價，判斷受測定受檢者免疫前后相應(yīng)抗體的效價，判斷受檢者體內(nèi)檢者體內(nèi)B B細(xì)胞的功能。細(xì)胞的功能。（三）體內(nèi)試驗（三）體內(nèi)試驗人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社染色計數(shù)染色計數(shù)離心取上清離心取上清測測LDHLDH或或AKPAKP測發(fā)光強度測發(fā)光強度測測CPMCPM值值形態(tài)法形態(tài)法酶釋法酶釋法放射性核素釋放射性核素釋放法放法流式細(xì)胞術(shù)流式細(xì)胞術(shù)靶靶細(xì)細(xì)胞胞溶溶解解常用靶細(xì)胞常用靶細(xì)胞: K562: K562細(xì)胞株細(xì)胞株三、三、NK細(xì)胞活性檢測細(xì)胞活性檢測返回章目錄返回章目錄人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 大吞噬細(xì)胞大吞噬細(xì)胞: :即單核即單核- -吞噬細(xì)胞系統(tǒng)吞噬細(xì)

20、胞系統(tǒng) 小吞噬細(xì)胞小吞噬細(xì)胞: :即中性粒細(xì)胞即中性粒細(xì)胞第五節(jié)第五節(jié) 其他免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)其他免疫細(xì)胞功能檢測技術(shù)吞噬細(xì)胞的種類吞噬細(xì)胞的種類人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社特征性標(biāo)志特征性標(biāo)志 CD14CD14分離技術(shù)分離技術(shù) PecollPecoll密度梯度分離法密度梯度分離法 流式細(xì)胞儀分離技術(shù)流式細(xì)胞儀分離技術(shù) 免疫磁珠分離法：為目前較常用的方法免疫磁珠分離法：為目前較常用的方法 黏附法黏附法一、吞噬細(xì)胞的分離一、吞噬細(xì)胞的分離（一）單核細(xì)胞的分離人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社斑蝥敷貼法分離人巨噬細(xì)胞斑蝥敷貼法分離人巨噬細(xì)胞 動物的巨噬細(xì)胞直接從腹腔滲出液中獲取動物的巨噬細(xì)胞直接從腹腔

21、滲出液中獲取 （二）巨噬細(xì)胞的分離（二）巨噬細(xì)胞的分離人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 聚合物加速沉降法聚合物加速沉降法 可從外周血中分離出白細(xì)胞可從外周血中分離出白細(xì)胞RBC血漿血漿(抗凝血抗凝血)WBCRBC FicollFicoll分離法分離法 可從白細(xì)胞中分離出純化的中性粒細(xì)胞可從白細(xì)胞中分離出純化的中性粒細(xì)胞（三）中性粒細(xì)胞的分離（三）中性粒細(xì)胞的分離人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社Ficoll-Hypaque密度梯度離心分離中性粒細(xì)胞密度梯度離心分離中性粒細(xì)胞人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社吞噬細(xì)胞的吞噬活動大體分為吞噬細(xì)胞的吞噬活動大體分為趨化趨化、吞噬吞噬和和胞內(nèi)殺胞內(nèi)殺滅滅作用三個階段，

22、據(jù)此建立相應(yīng)的檢測方法。作用三個階段，據(jù)此建立相應(yīng)的檢測方法。 （一）中性粒細(xì)胞功能檢測技術(shù)（一）中性粒細(xì)胞功能檢測技術(shù) （二）巨噬細(xì)胞功能檢測技術(shù)（二）巨噬細(xì)胞功能檢測技術(shù)二、相關(guān)功能檢測二、相關(guān)功能檢測人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社細(xì)胞趨化功能的檢測細(xì)胞趨化功能的檢測吞噬功能的檢測吞噬功能的檢測殺菌功能的檢測殺菌功能的檢測（一）中性粒細(xì)胞功能檢測（一）中性粒細(xì)胞功能檢測人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 體內(nèi)試驗法：皮膚窗法體內(nèi)試驗法：皮膚窗法 體外試驗法：濾膜滲透法體外試驗法：濾膜滲透法 瓊脂糖平板法瓊脂糖平板法 趨化功能檢測趨化功能檢測檢測細(xì)胞運動功能檢測細(xì)胞運動功能皮膚窗法皮膚窗法 在在受檢

23、者前臂屈側(cè)中央受檢者前臂屈側(cè)中央3 3范圍內(nèi)，搔刮范圍內(nèi)，搔刮皮膚后，用蓋玻片壓緊固定，在第皮膚后，用蓋玻片壓緊固定，在第2 2，5 5，8 8，1212，2424，3636小時各取樣一次，染色觀察中性粒細(xì)胞聚集小時各取樣一次，染色觀察中性粒細(xì)胞聚集開始時間、聚集程度等。健康正常人一般開始時間、聚集程度等。健康正常人一般2 23h3h后后開始聚集，達(dá)開始聚集，達(dá)5050100100個，個，6 6小時可達(dá)小時可達(dá)10001000個以上個以上。 人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社 原理及技術(shù)要點原理及技術(shù)要點 在一特制的分上下兩層的小盒，將趨化因子加在一特制的分上下兩層的小盒，將趨化因子加入下室，待檢細(xì)

24、胞加入上室，兩室用微孔濾膜分入下室，待檢細(xì)胞加入上室，兩室用微孔濾膜分隔，隔，3737溫育數(shù)小時后，上室的中性粒細(xì)胞受下溫育數(shù)小時后，上室的中性粒細(xì)胞受下室趨化因子的吸引，由濾膜微孔進(jìn)入濾膜內(nèi)，取室趨化因子的吸引，由濾膜微孔進(jìn)入濾膜內(nèi)，取濾膜清洗、固定、干燥、染色和透明，在高倍鏡濾膜清洗、固定、干燥、染色和透明，在高倍鏡下觀察細(xì)胞穿越濾膜的移動距離，從而判斷其趨下觀察細(xì)胞穿越濾膜的移動距離，從而判斷其趨化功能。化功能。濾膜滲透法濾膜滲透法人民衛(wèi)生出版社人民衛(wèi)生出版社原理及技術(shù)要點原理及技術(shù)要點 在瓊脂糖凝膠平板的中孔加白細(xì)胞懸液，左孔加在瓊脂糖凝膠平板的中孔加白細(xì)胞懸液，左孔加趨化因子，右孔加對照液，溫育趨化因子，右孔加對照液，溫育48小時后，用顯小時后，用顯微鏡測微器測定中性粒細(xì)胞向左孔的移動距離微鏡測微器測定中性粒細(xì)胞向左孔的移動距離A和和向右孔的移動距離向右孔的移動距離B，計算趨化指數(shù)。，計算趨化指數(shù)。趨化指數(shù)趨化指數(shù)= A/B趨化指數(shù)越大，表明中性粒細(xì)胞運動功能越強趨化指數(shù)越大，表明中性粒細(xì)胞運動功能越強 瓊脂糖平板法瓊脂糖平板法人民衛(wèi)生出