藥物定量分析與分析方法驗(yàn)證

1、藥物分析藥物分析 第四章第四章 藥物定量分析藥物定量分析 與分析方法驗(yàn)證與分析方法驗(yàn)證姚美村姚美村中山大學(xué)藥學(xué)院中山大學(xué)藥學(xué)院2目的和要求目的和要求n1、掌握不同結(jié)構(gòu)藥物的穩(wěn)定性規(guī)律、掌握不同結(jié)構(gòu)藥物的穩(wěn)定性規(guī)律n2、掌握色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的內(nèi)容、掌握色譜系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的內(nèi)容n3、熟悉氧瓶燃燒法的實(shí)驗(yàn)過程、熟悉氧瓶燃燒法的實(shí)驗(yàn)過程n4、了解定量分析樣品的前處理方法的進(jìn)展及、了解定量分析樣品的前處理方法的進(jìn)展及在藥物分析中的應(yīng)用在藥物分析中的應(yīng)用Yao Meicun, Tel: Email: L3第一節(jié)第一節(jié) 定量分析樣品的前處理方法定量分析樣品的前處理方法n1、概述、

2、概述n2、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法n3、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法Yao Meicun, Tel: Email: L4一、概述一、概述n藥物的定量分析，需要根據(jù)藥物的定量分析，需要根據(jù)分析方法的特點(diǎn)分析方法的特點(diǎn)、藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)，以及藥物制劑的處方組成藥物的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)，以及藥物制劑的處方組成，采用合適的方法對(duì)樣品進(jìn)行處理采用合適的方法對(duì)樣品進(jìn)行處理，以，以滿足所滿足所選擇的分析方法對(duì)樣品的要求選擇的分析方法對(duì)樣品的要求。n有些藥物可以用相對(duì)較簡(jiǎn)單的方法處理，如化有些藥物可以用相對(duì)較簡(jiǎn)單的方法處理，如化學(xué)藥單體等；學(xué)藥單體等；對(duì)于

3、藥物制劑來說，需要考慮處對(duì)于藥物制劑來說，需要考慮處方中其他組分的干擾（在處理樣品過程中除掉方中其他組分的干擾（在處理樣品過程中除掉干擾，不同于色譜法的分離分析干擾，不同于色譜法的分離分析）Yao Meicun, Tel: Email: L5一、概述（續(xù)一、概述（續(xù)1）n本節(jié)主要介紹含金屬和鹵素、硫、磷、硒等特本節(jié)主要介紹含金屬和鹵素、硫、磷、硒等特殊元素的藥物分析時(shí)的前處理過程。殊元素的藥物分析時(shí)的前處理過程。n這些藥物的處理方法需這些藥物的處理方法需根據(jù)它們?cè)诜肿又薪Y(jié)合根據(jù)它們?cè)诜肿又薪Y(jié)合的牢固程度不同的牢固程度不同而有所選擇。而有所選擇。n含鹵素藥物結(jié)合牢固與否

4、有三種情況：含鹵素藥物結(jié)合牢固與否有三種情況：Yao Meicun, Tel: Email: L6一、概述（續(xù)一、概述（續(xù)2）7一、概述（續(xù)一、概述（續(xù)3）n（1）與苯環(huán)直接相連，鹵原子和苯環(huán)形成強(qiáng)）與苯環(huán)直接相連，鹵原子和苯環(huán)形成強(qiáng)共軛結(jié)構(gòu)，電子云密度重新分布，此時(shí)鹵原子共軛結(jié)構(gòu)，電子云密度重新分布，此時(shí)鹵原子結(jié)合牢固，不易脫離；需要破壞后才可分析。結(jié)合牢固，不易脫離；需要破壞后才可分析。n（2）與脂肪鏈相連，結(jié)合不牢固；根據(jù)情況）與脂肪鏈相連，結(jié)合不牢固；根據(jù)情況選擇。選擇。n（3）與芐基相連，相當(dāng)于活潑取代氫的位置）與芐基相連，相當(dāng)于活潑取代氫的位置，鹵原子易脫

5、掉，結(jié)合最不牢固，易處理。，鹵原子易脫掉，結(jié)合最不牢固，易處理。8一、概述（續(xù)一、概述（續(xù)4）n含金屬藥物前處理有兩種情況：含金屬藥物前處理有兩種情況：n（1）金屬原子不直接與碳原子相連）金屬原子不直接與碳原子相連，通常為，通常為有機(jī)酸或者酚的有機(jī)酸或者酚的金屬配合物金屬配合物，即含金屬的有機(jī)，即含金屬的有機(jī)藥物，藥物，結(jié)合不牢固，很容易在水溶液中離解成結(jié)合不牢固，很容易在水溶液中離解成金屬離子金屬離子；如果；如果有機(jī)結(jié)構(gòu)部分不干擾分析，可有機(jī)結(jié)構(gòu)部分不干擾分析，可在溶液中直接進(jìn)行金屬的鑒別和含量測(cè)定在溶液中直接進(jìn)行金屬的鑒別和含量測(cè)定。9葡萄糖酸鈣葡萄糖酸鈣10一、概述（續(xù)一、概述（續(xù)5）n

6、（2）金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵連接，金屬原子直接與碳原子以共價(jià)鍵連接，結(jié)合狀態(tài)比較牢固，即有機(jī)金屬藥物結(jié)合狀態(tài)比較牢固，即有機(jī)金屬藥物。該類藥。該類藥物在溶液中物在溶液中一般不能解離成離子狀態(tài)。一般不能解離成離子狀態(tài)。此時(shí)，此時(shí)，可以根據(jù)金屬共價(jià)鍵的牢固程度，可以根據(jù)金屬共價(jià)鍵的牢固程度，經(jīng)處理后轉(zhuǎn)經(jīng)處理后轉(zhuǎn)變?yōu)榭煞治龅碾x子狀態(tài)變?yōu)榭煞治龅碾x子狀態(tài)，然后進(jìn)行相應(yīng)分析。，然后進(jìn)行相應(yīng)分析。11一、概述（續(xù)一、概述（續(xù)6）n因此，對(duì)于含金屬或鹵素等的藥物，因此，對(duì)于含金屬或鹵素等的藥物，需要根據(jù)需要根據(jù)藥物與他們結(jié)合的牢固程度，預(yù)先進(jìn)行適當(dāng)處藥物與他們結(jié)合的牢固程度，預(yù)先進(jìn)行適當(dāng)處理。理。n處

7、理方法：處理方法：n（1）不經(jīng)有機(jī)破壞不經(jīng)有機(jī)破壞的方法，的方法，適用于與芐基相適用于與芐基相連的鹵素及金屬有機(jī)藥物連的鹵素及金屬有機(jī)藥物等；等；n（2）需要有機(jī)破壞需要有機(jī)破壞的方法，的方法，適用于與苯環(huán)直適用于與苯環(huán)直接相連和有機(jī)金屬藥物接相連和有機(jī)金屬藥物等。等。12二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法n本類方法不對(duì)藥物分子中的有機(jī)結(jié)構(gòu)部分進(jìn)行本類方法不對(duì)藥物分子中的有機(jī)結(jié)構(gòu)部分進(jìn)行完全破壞，僅選用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙鈽悠?，使得完全破壞，僅選用適當(dāng)?shù)娜軇┤芙鈽悠?，使得待測(cè)元素離子電離，或經(jīng)簡(jiǎn)單的回流處理使得待測(cè)元素離子電離，或經(jīng)簡(jiǎn)單的回流處理使得有機(jī)結(jié)合的待測(cè)元素離解而轉(zhuǎn)化成無

8、機(jī)鹽類后有機(jī)結(jié)合的待測(cè)元素離解而轉(zhuǎn)化成無機(jī)鹽類后測(cè)定測(cè)定。n本類方法適用于本類方法適用于含金屬有機(jī)藥物或結(jié)合不牢固含金屬有機(jī)藥物或結(jié)合不牢固的含鹵素藥物的樣品前處理的含鹵素藥物的樣品前處理。13二、不經(jīng)有機(jī)破壞分析方法（續(xù)二、不經(jīng)有機(jī)破壞分析方法（續(xù)1）n（一）直接測(cè)定法（一）直接測(cè)定法n凡金屬原子不直接與碳原子相連的有機(jī)藥物或凡金屬原子不直接與碳原子相連的有機(jī)藥物或者某些雖然相連但結(jié)合非常不牢固的有機(jī)金屬者某些雖然相連但結(jié)合非常不牢固的有機(jī)金屬藥物，藥物，在水溶液中都可以直接電離為離子狀態(tài)在水溶液中都可以直接電離為離子狀態(tài)，可以直接測(cè)定分析。，可以直接測(cè)定分析。n可以應(yīng)用的有配位滴定法和可以

9、應(yīng)用的有配位滴定法和氧化還原滴定法氧化還原滴定法。14n【含量測(cè)定含量測(cè)定】 取本品取本品約約0.3g，精密稱定，精密稱定，加稀硫加稀硫酸酸15ml，加熱溶解后加熱溶解后，放冷，放冷，加新沸過的冷水加新沸過的冷水50ml與鄰二氮菲指示液與鄰二氮菲指示液2 滴，立即滴，立即用硫酸鈰滴定用硫酸鈰滴定液液(0.1mol/L)滴定滴定，并將，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正正。每每1ml硫酸鈰滴定液硫酸鈰滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于16.99mg的的C4H2FeO4。 例：例：15二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)2）n（二）經(jīng)水解后測(cè)定法（二）經(jīng)

10、水解后測(cè)定法n分為兩種：分為兩種：堿水解后測(cè)定和酸水解后測(cè)定堿水解后測(cè)定和酸水解后測(cè)定n1、堿水解后測(cè)定、堿水解后測(cè)定；適用于；適用于含鹵素有機(jī)藥物中含鹵素有機(jī)藥物中鹵原子結(jié)合不牢固的藥物鹵原子結(jié)合不牢固的藥物，如鹵素和脂肪碳鏈，如鹵素和脂肪碳鏈相連者。相連者。n方法方法:將藥物在適當(dāng)溶劑中將藥物在適當(dāng)溶劑中n溶解后，溶解后，加氫氧化鈉溶液后加氫氧化鈉溶液后n加熱回流使其轉(zhuǎn)變成無機(jī)形加熱回流使其轉(zhuǎn)變成無機(jī)形n式的離子后分析。式的離子后分析。16二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)3）n2、酸水解后測(cè)定法、酸水解后測(cè)定法n將含金屬的有機(jī)藥物與適當(dāng)?shù)牡V酸（如鹽酸、將含金屬的

11、有機(jī)藥物與適當(dāng)?shù)牡V酸（如鹽酸、硫酸等）硫酸等）共沸共沸，將不溶性金屬鹽類水解置換成將不溶性金屬鹽類水解置換成可溶性鹽可溶性鹽，然后選用配位滴定法或剩余酸堿滴，然后選用配位滴定法或剩余酸堿滴定法測(cè)定。定法測(cè)定。n注意與前邊僅加熱溶解的方法不同。注意與前邊僅加熱溶解的方法不同。17二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)二、不經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)4）n（三）經(jīng)還原分解后測(cè)定法（三）經(jīng)還原分解后測(cè)定法n鹵素中的鹵素中的碘若結(jié)合在芳環(huán)上面碘若結(jié)合在芳環(huán)上面，由于，由于形成共價(jià)形成共價(jià)鍵，須在堿性溶液中加還原劑鍵，須在堿性溶液中加還原劑（如鋅粉）（如鋅粉）回流回流，使得碳碘鍵斷裂，形成無機(jī)碘后測(cè)定，使得碳碘鍵

12、斷裂，形成無機(jī)碘后測(cè)定。n泛影酸泛影酸、膽影酸、膽影酸、碘番酸碘番酸、膽影葡胺、泛影葡、膽影葡胺、泛影葡胺、碘他垃酸等，都可以用此法測(cè)定分析。胺、碘他垃酸等，都可以用此法測(cè)定分析。18n【含量測(cè)定含量測(cè)定】 取本品取本品約約0.3g，精密稱定，精密稱定，加氫加氫氧化鈉試液氧化鈉試液30ml與鋅粉與鋅粉1g，加熱回流加熱回流30分鐘，分鐘，放冷放冷，冷凝管用水少量洗滌，冷凝管用水少量洗滌，濾過濾過，燒瓶與濾，燒瓶與濾器用水洗滌器用水洗滌3 次，每次次，每次15ml，合并濾液與洗液合并濾液與洗液，加冰醋酸加冰醋酸5ml 與曙紅鈉指示液與曙紅鈉指示液5 滴，滴，用硝酸用硝酸銀滴定液銀滴定液(0.1m

13、ol/L)滴定。每滴定。每1ml硝酸銀滴定液硝酸銀滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于相當(dāng)于19.03mg的的C11H12I3NO2。19n酸性還原后測(cè)定法：與堿性法原理類似（酸性還原后測(cè)定法：與堿性法原理類似（JP14）20三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法n當(dāng)含金屬等藥物中的當(dāng)含金屬等藥物中的待測(cè)元素與碳原子結(jié)合牢待測(cè)元素與碳原子結(jié)合牢固者固者，在用，在用水解或者氧化還原等方法難以奏效水解或者氧化還原等方法難以奏效的情況下，的情況下，需要有機(jī)破壞方法需要有機(jī)破壞方法，使有機(jī)結(jié)合狀，使有機(jī)結(jié)合狀態(tài)的待測(cè)原子態(tài)的待測(cè)原子轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y(cè)定的無機(jī)離子轉(zhuǎn)變?yōu)榭蓽y(cè)定的無機(jī)離子，然后，然后再用再用

14、適當(dāng)?shù)姆椒ǚ治鲞m當(dāng)?shù)姆椒ǚ治?。n經(jīng)有機(jī)破壞的方法一般有：經(jīng)有機(jī)破壞的方法一般有：濕法破壞、干法破濕法破壞、干法破壞壞。21三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)1）n（一）濕法破壞（一）濕法破壞n本法適用于本法適用于含氮有機(jī)合成藥物的前處理含氮有機(jī)合成藥物的前處理，在，在生生物制品分析中用于氮（包括蛋白質(zhì)）、磷、硫物制品分析中用于氮（包括蛋白質(zhì)）、磷、硫及氯化鈉測(cè)定法及氯化鈉測(cè)定法的前處理。另外，此法還可用的前處理。另外，此法還可用于于生物樣品中金屬元素測(cè)定時(shí)生物基質(zhì)的去除生物樣品中金屬元素測(cè)定時(shí)生物基質(zhì)的去除n本法本法主要使用硫酸作為分解劑主要使用硫酸作為分解劑（消解或消化

15、）（消解或消化），常加入，常加入氧化劑氧化劑（如硝酸、高氯酸、過氧化氫（如硝酸、高氯酸、過氧化氫等）等）作為輔助分解劑作為輔助分解劑。根據(jù)分解劑組合形式的根據(jù)分解劑組合形式的不同，本法可分為若干種方法不同，本法可分為若干種方法。22三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)2）n簡(jiǎn)單介紹以硫酸簡(jiǎn)單介紹以硫酸-硫酸鹽法為基礎(chǔ)的含氮有機(jī)硫酸鹽法為基礎(chǔ)的含氮有機(jī)藥物定量分析方法藥物定量分析方法凱氏定氮法凱氏定氮法的原理。的原理。n原理：原理：含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥含氮藥物與硫酸在凱氏燒瓶中共熱，藥物分子中有機(jī)結(jié)構(gòu)被氧化分解成二氧化碳和水物分子中有機(jī)結(jié)構(gòu)被氧化分解成二氧化碳和

16、水，有機(jī)結(jié)合的氮?jiǎng)t被轉(zhuǎn)化成無機(jī)氨，并與過量，有機(jī)結(jié)合的氮?jiǎng)t被轉(zhuǎn)化成無機(jī)氨，并與過量的硫酸結(jié)合成硫酸銨和硫酸氫銨，經(jīng)氫氧化鉀的硫酸結(jié)合成硫酸銨和硫酸氫銨，經(jīng)氫氧化鉀堿化后釋放出氨氣，并隨水蒸氣餾出，用硼酸堿化后釋放出氨氣，并隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴溶液或定量的酸滴定液吸收后，再用酸或堿滴定液滴定。定液滴定。2324半定量法裝置示意圖半定量法裝置示意圖25三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)三、經(jīng)有機(jī)破壞的分析方法（續(xù)3）n適用范圍：適用范圍：n凱氏定氮法主要應(yīng)用于測(cè)定含有凱氏定氮法主要應(yīng)用于測(cè)定含有氨基或酰胺結(jié)氨基或酰胺結(jié)構(gòu)的藥物含量構(gòu)的藥物含量。對(duì)于以偶氮或阱等結(jié)構(gòu)

17、存在的。對(duì)于以偶氮或阱等結(jié)構(gòu)存在的藥物，因在消解過程中易產(chǎn)生氮?dú)舛斐蓳p失藥物，因在消解過程中易產(chǎn)生氮?dú)舛斐蓳p失，可以先用金屬鋅粉還原后再處理。對(duì)于雜環(huán)，可以先用金屬鋅粉還原后再處理。對(duì)于雜環(huán)氮和含量較高的，也要經(jīng)過適當(dāng)處理后再進(jìn)行氮和含量較高的，也要經(jīng)過適當(dāng)處理后再進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定。26（二）干法破壞（二）干法破壞n本法主要適用于本法主要適用于含鹵素、硫、磷等有機(jī)藥物分含鹵素、硫、磷等有機(jī)藥物分析的前處理析的前處理，也可用于某些藥物中，也可用于某些藥物中硒及砷鹽硒及砷鹽的的檢查。可分為檢查?？煞譃楦邷?zé)胱品ǜ邷責(zé)胱品ê秃脱跗咳紵ㄑ跗咳紵?。n1、高溫?zé)胱品?、高溫?zé)胱品╪是將含待測(cè)元素的有機(jī)

18、藥物經(jīng)高溫?zé)胱苹一?，是將含待測(cè)元素的有機(jī)藥物經(jīng)高溫?zé)胱苹一?，使有機(jī)藥物分解而使有機(jī)藥物分解而待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為無機(jī)元素或待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為無機(jī)元素或可溶性無機(jī)鹽可溶性無機(jī)鹽，然后進(jìn)行分析。，然后進(jìn)行分析。27（二）干法破壞（續(xù)（二）干法破壞（續(xù)1）n本法主要適用于含本法主要適用于含鹵素藥物鹵素藥物的鑒別，也用于含的鑒別，也用于含磷藥物的含量測(cè)定和藥物中砷鹽的檢查。磷藥物的含量測(cè)定和藥物中砷鹽的檢查。適用適用于用濕法不易完全破壞的有機(jī)物，以及某些不于用濕法不易完全破壞的有機(jī)物，以及某些不能用硫酸進(jìn)行破壞的有機(jī)藥物。能用硫酸進(jìn)行破壞的有機(jī)藥物。n在進(jìn)行砷鹽的檢查時(shí)，注意溫度不要過高（不在進(jìn)行砷鹽的檢查時(shí)，

19、注意溫度不要過高（不超過超過700度），溫度過高易導(dǎo)致砷鹽揮發(fā)。度），溫度過高易導(dǎo)致砷鹽揮發(fā)。28（二）干法破壞（續(xù)（二）干法破壞（續(xù)2）n2、氧瓶燃燒法、氧瓶燃燒法n氧瓶燃燒法氧瓶燃燒法：是將含：是將含有待測(cè)元素的有機(jī)藥物有待測(cè)元素的有機(jī)藥物置置于于充滿氧氣的充滿氧氣的密閉的密閉的燃燒瓶中充分燃燒燃燒瓶中充分燃燒，使得，使得待待測(cè)元素轉(zhuǎn)化為不同價(jià)態(tài)的氧化物測(cè)元素轉(zhuǎn)化為不同價(jià)態(tài)的氧化物，被，被吸收于吸收于適當(dāng)?shù)奈找褐羞m當(dāng)?shù)奈找褐?，然后根?jù)待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，然后根據(jù)待測(cè)物質(zhì)的性質(zhì)，選用合適的方法選用合適的方法進(jìn)行分析。進(jìn)行分析。n本法適用于分析含本法適用于分析含鹵素有機(jī)藥物、氮、硫和硒鹵素有機(jī)

20、藥物、氮、硫和硒等藥物等藥物。293031（二）干法破壞（續(xù)（二）干法破壞（續(xù)3）n操作法操作法：在燃燒瓶中加入規(guī)定的：在燃燒瓶中加入規(guī)定的吸收液吸收液，并將，并將瓶口用水濕潤(rùn)；小心急速通瓶口用水濕潤(rùn)；小心急速通氧氣氧氣約約1分鐘（通分鐘（通氣口接近液面），立即用表面皿覆蓋瓶口，備氣口接近液面），立即用表面皿覆蓋瓶口，備用；用；點(diǎn)燃點(diǎn)燃包有供試品的包有供試品的濾紙包濾紙包，迅速放入燃燒，迅速放入燃燒瓶中，瓶中，按緊瓶蓋按緊瓶蓋，用，用少量水封閉瓶口少量水封閉瓶口，使，使燃燒燃燒完畢完畢，充分振搖充分振搖，使生成的煙霧完全吸收入吸，使生成的煙霧完全吸收入吸收液中，放置收液中，放置15min后，用

21、后，用少量水沖洗瓶塞及少量水沖洗瓶塞及鉑絲鉑絲，合并洗液也吸收液。合并洗液也吸收液。然后用同法做然后用同法做空白空白試驗(yàn)試驗(yàn)。32（二）干法破壞（續(xù)（二）干法破壞（續(xù)4）n需要注意的問題：需要注意的問題：n（1）氧氣要充足！燃燒要充分。）氧氣要充足！燃燒要充分。n（2）瓶中不得有有機(jī)溶劑殘留?。┢恐胁坏糜杏袡C(jī)溶劑殘留！n（3）不得有潤(rùn)滑油等涂抹瓶口?。┎坏糜袧?rùn)滑油等涂抹瓶口！n（4）水封瓶口，且用手按住瓶口?。┧馄靠冢矣檬职醋∑靠?！n（5）選擇合適的吸收液（多數(shù)是水和氫氧化）選擇合適的吸收液（多數(shù)是水和氫氧化鈉的混合液）鈉的混合液）n（6）若瓶中出現(xiàn)黑色顆粒，則為燃燒不充分）若瓶中出現(xiàn)黑色

22、顆粒，則為燃燒不充分33例：碘苯酯的測(cè)定例：碘苯酯的測(cè)定34例：碘苯酯的測(cè)定（續(xù)例：碘苯酯的測(cè)定（續(xù)1）n【含量測(cè)定含量測(cè)定】 取本品取本品約約20mg，精密稱定精密稱定，照氧瓶燃燒法照氧瓶燃燒法（附錄（附錄 C）進(jìn)行有機(jī)破壞進(jìn)行有機(jī)破壞，用，用氫氧化鈉試液氫氧化鈉試液2ml 與水與水10ml為吸收液為吸收液，俟吸俟吸收完全后，加溴醋酸溶液收完全后，加溴醋酸溶液.，用硫代硫酸，用硫代硫酸鈉滴定液鈉滴定液(0.02mol/L) 滴定，并將滴定的結(jié)果滴定，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。用空白試驗(yàn)校正。每每1ml硫代硫酸鈉滴定液硫代硫酸鈉滴定液(0.02mol/L) 相當(dāng)于相當(dāng)于1.388mg 的的

23、C19H29IO2。35第二節(jié)第二節(jié) 定量分析方法的特點(diǎn)定量分析方法的特點(diǎn)n容量分析法容量分析法n光譜分析法光譜分析法n色譜分析法色譜分析法36一、容量分析法一、容量分析法n（一）容量分析的特點(diǎn)（一）容量分析的特點(diǎn)n為經(jīng)典方法為經(jīng)典方法，滴定分析法滴定分析法。是將。是將已知濃度已知濃度的藥物由的藥物由滴定管滴定管滴加到滴加到待測(cè)藥物的溶液待測(cè)藥物的溶液中中，直到所加滴定液與被測(cè)藥物，直到所加滴定液與被測(cè)藥物反應(yīng)完全為反應(yīng)完全為止（通過適當(dāng)方法指示），止（通過適當(dāng)方法指示），然后然后根據(jù)滴定根據(jù)滴定液的濃度和消耗的體積液的濃度和消耗的體積，按化學(xué)計(jì)量關(guān)系，按化學(xué)計(jì)量關(guān)系計(jì)算計(jì)算出被測(cè)藥物的含量。

24、出被測(cè)藥物的含量。原料藥分析常采原料藥分析常采用用。3738一、容量分析法（續(xù)一、容量分析法（續(xù)1）n當(dāng)?shù)味ㄒ号c被測(cè)藥物完全作用時(shí)，反應(yīng)達(dá)當(dāng)?shù)味ㄒ号c被測(cè)藥物完全作用時(shí)，反應(yīng)達(dá)到化學(xué)計(jì)量點(diǎn)。主要是滴定終點(diǎn)的確認(rèn)（到化學(xué)計(jì)量點(diǎn)。主要是滴定終點(diǎn)的確認(rèn)（反應(yīng)完全與否的指示）。反應(yīng)完全與否的指示）。n化學(xué)計(jì)量點(diǎn)與滴定終點(diǎn)并不一定恰好符合化學(xué)計(jì)量點(diǎn)與滴定終點(diǎn)并不一定恰好符合，二者之差稱為滴定誤差。，二者之差稱為滴定誤差。指示劑的選擇指示劑的選擇和靈敏度是影響結(jié)果的原因之一，常產(chǎn)生和靈敏度是影響結(jié)果的原因之一，常產(chǎn)生滴定誤差；滴定誤差；合適的指示劑可以使得滴定終合適的指示劑可以使得滴定終點(diǎn)盡可能的接近滴定反

25、應(yīng)的化學(xué)計(jì)量點(diǎn)點(diǎn)盡可能的接近滴定反應(yīng)的化學(xué)計(jì)量點(diǎn)。3940一、容量分析法（續(xù)一、容量分析法（續(xù)2）n特點(diǎn)：特點(diǎn)：n1、快速，準(zhǔn)確（、快速，準(zhǔn)確（RSD0.2），靈敏度高；），靈敏度高；n2、適合于高含量或中含量組分分析（、適合于高含量或中含量組分分析（1%）。）。所以，廣泛用于原料藥的含量測(cè)定。所以，廣泛用于原料藥的含量測(cè)定。n3、儀器簡(jiǎn)單，操作方便，適用范圍廣、儀器簡(jiǎn)單，操作方便，適用范圍廣n4、專屬性較差。、專屬性較差。41一、容量分析法（續(xù)一、容量分析法（續(xù)3）n（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算（二）容量分析法的有關(guān)計(jì)算n1、滴定度及其計(jì)算、滴定度及其計(jì)算n指每指每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)

26、的被測(cè)藥物規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y(cè)藥物的質(zhì)量。的質(zhì)量。ChP用用mg來表示來表示。naAbBcCdDnT （mg/ml） m(a/b)Mn其中，其中，m為滴定液的摩爾濃度，為滴定液的摩爾濃度，a和和b分別為被分別為被測(cè)藥物和滴定劑的摩爾數(shù)，測(cè)藥物和滴定劑的摩爾數(shù)，M為被測(cè)藥物毫摩為被測(cè)藥物毫摩爾質(zhì)量。（書上計(jì)算要看會(huì)）爾質(zhì)量。（書上計(jì)算要看會(huì)）42一、容量分析法（續(xù)一、容量分析法（續(xù)4）n2、含量的計(jì)算：分、含量的計(jì)算：分直接滴定法和間接滴定法直接滴定法和間接滴定法n（1）直接滴定法：以滴定液的濃度和體積直）直接滴定法：以滴定液的濃度和體積直接計(jì)算含量。接計(jì)算含量。n含量（）（含量（）（V

27、TF）W100n其中，其中，V是消耗滴定液體積；是消耗滴定液體積；T為標(biāo)準(zhǔn)滴定度為標(biāo)準(zhǔn)滴定度（藥典規(guī)定或計(jì)算得到）；（藥典規(guī)定或計(jì)算得到）；F為相對(duì)濃度（實(shí)為相對(duì)濃度（實(shí)際濃度和標(biāo)準(zhǔn)濃度比值），際濃度和標(biāo)準(zhǔn)濃度比值），W為供試品取樣量為供試品取樣量n其中，其中，F(xiàn)值由滴定液的標(biāo)定獲得；值由滴定液的標(biāo)定獲得；V由滴定過由滴定過程讀取程讀取。43一、容量分析法（續(xù)一、容量分析法（續(xù)5）n（2）間接滴定法）間接滴定法n1）生成物滴定法）生成物滴定法：將待測(cè)物與某物質(zhì)作用定：將待測(cè)物與某物質(zhì)作用定量生成另外一種物質(zhì)，然后用滴定液滴定的過量生成另外一種物質(zhì)，然后用滴定液滴定的過程。與直接滴定法基本一致。

28、只是需要考慮各程。與直接滴定法基本一致。只是需要考慮各反應(yīng)物之間的相互化學(xué)計(jì)量關(guān)系。反應(yīng)物之間的相互化學(xué)計(jì)量關(guān)系。44一、容量分析法（續(xù)一、容量分析法（續(xù)6）n2）剩余量滴定法：也稱為回滴定法剩余量滴定法：也稱為回滴定法。n此法是先加入定量過量的滴定液此法是先加入定量過量的滴定液A，使其與被，使其與被測(cè)藥物定量反應(yīng)；待反應(yīng)完全后，再用另一滴測(cè)藥物定量反應(yīng)；待反應(yīng)完全后，再用另一滴定液定液B來回滴反應(yīng)中剩余的滴定液來回滴反應(yīng)中剩余的滴定液An本法常需要做空白試驗(yàn)本法常需要做空白試驗(yàn)。45例：剩余量滴定法例：剩余量滴定法46例：剩余量滴定法（續(xù)例：剩余量滴定法（續(xù)1）n【含量測(cè)定含量測(cè)定】 取本品

29、取本品約約0.1g，精密稱定，精密稱定，置置250ml碘瓶中碘瓶中，加水，加水10ml，振搖使溶解，振搖使溶解，精密精密加溴滴定液加溴滴定液(0.1mol/L)25ml，再加鹽酸，再加鹽酸5ml ，立即密塞并振搖立即密塞并振搖1分鐘，分鐘，在暗處靜置在暗處靜置15分鐘分鐘后后，注意微開瓶塞，注意微開瓶塞，加碘化鉀試液加碘化鉀試液10ml，立即，立即密塞，搖勻后，密塞，搖勻后，用硫代硫酸鈉滴定液用硫代硫酸鈉滴定液(0.1mol/L)滴定滴定，至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液至近終點(diǎn)時(shí)，加淀粉指示液，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空，繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失，并將滴定的結(jié)果用空白試驗(yàn)校正白試驗(yàn)校正。每每1

30、ml溴滴定液溴滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)相當(dāng)于于13.01mg 的的C12H17N2NaO3。47二、光譜分析法二、光譜分析法n利用物質(zhì)的光譜進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析的利用物質(zhì)的光譜進(jìn)行定性、定量和結(jié)構(gòu)分析的方法稱為光譜分析法。方法稱為光譜分析法。n主要是通過測(cè)定主要是通過測(cè)定被測(cè)物質(zhì)被測(cè)物質(zhì)在光譜的在光譜的特定波長(zhǎng)處特定波長(zhǎng)處或或一定波長(zhǎng)范圍的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度一定波長(zhǎng)范圍的吸光度或發(fā)光強(qiáng)度，對(duì)該物，對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行分析的方法，稱為分光光度法。質(zhì)進(jìn)行分析的方法，稱為分光光度法。n主要有主要有紫外紫外-可見分光光度法可見分光光度法、紅外分光光度紅外分光光度法法、原子吸收分光光度法、熒光分析法和火

31、焰、原子吸收分光光度法、熒光分析法和火焰光度法等。光度法等。48（一）紫外（一）紫外-可見分光光度法可見分光光度法n該法是對(duì)物質(zhì)在該法是對(duì)物質(zhì)在紫外光區(qū)（紫外光區(qū)（200400nm）和和可見光區(qū)（可見光區(qū)（400760nm）的單色光輻射的吸的單色光輻射的吸收特性建立的光譜分析方法。收特性建立的光譜分析方法。n吸收特征遵循吸收特征遵循朗伯比爾定律朗伯比爾定律：nA=ECL（各代表什么意思？）（各代表什么意思？）n對(duì)于對(duì)于純物質(zhì)純物質(zhì)來說，以上定律適用；對(duì)于多組分來說，以上定律適用；對(duì)于多組分來說，光譜具有疊加性質(zhì)。來說，光譜具有疊加性質(zhì)。n定性分析較弱，多用于定量分析定性分析較弱，多用于定量分析

32、。4950（一）紫外（一）紫外-可見分光光度法（續(xù)可見分光光度法（續(xù)1）n特點(diǎn)：特點(diǎn)：n（1）靈敏度高，可達(dá)到）靈敏度高，可達(dá)到10-410-7g/ml；n（2）準(zhǔn)確度高，相對(duì)誤差為）準(zhǔn)確度高，相對(duì)誤差為2%5%;（滴定（滴定分析呢？）分析呢？）n（3）儀器價(jià)格較便宜，操作簡(jiǎn)單，易于普及）儀器價(jià)格較便宜，操作簡(jiǎn)單，易于普及n（4）應(yīng)用廣泛。是）應(yīng)用廣泛。是HPLC中使用最為廣泛的中使用最為廣泛的檢測(cè)器類型。檢測(cè)器類型。5152（一）紫外（一）紫外-可見分光光度法（續(xù)可見分光光度法（續(xù)2）n儀器的校正和檢定：儀器的校正和檢定：n放置時(shí)間過長(zhǎng)，容易導(dǎo)致波長(zhǎng)略有偏差，因此放置時(shí)間過長(zhǎng)，容易導(dǎo)致波長(zhǎng)略

33、有偏差，因此需要定期對(duì)儀器進(jìn)行全面校正需要定期對(duì)儀器進(jìn)行全面校正。n吸光度的準(zhǔn)確度校正用吸光度的準(zhǔn)確度校正用硫酸溶液硫酸溶液在不同波長(zhǎng)處在不同波長(zhǎng)處的吸光度進(jìn)行規(guī)定。的吸光度進(jìn)行規(guī)定。53（一）紫外（一）紫外-可見分光光度法（續(xù)可見分光光度法（續(xù)3）n對(duì)溶劑的要求：對(duì)溶劑的要求：n含有含有雜原子的有機(jī)溶劑雜原子的有機(jī)溶劑通常具有通常具有較強(qiáng)的末端吸較強(qiáng)的末端吸收，因此它們的適用范圍不能小于截至波長(zhǎng)，收，因此它們的適用范圍不能小于截至波長(zhǎng)，如如甲醇、乙醇的截至波長(zhǎng)為甲醇、乙醇的截至波長(zhǎng)為205nm（乙腈較（乙腈較小，在小，在190nm左右）左右）n此外，還需要對(duì)溶劑的純度進(jìn)行檢查，否則也此外，還

34、需要對(duì)溶劑的純度進(jìn)行檢查，否則也會(huì)造成干擾。會(huì)造成干擾。5455（一）紫外（一）紫外-可見分光光度法（續(xù)可見分光光度法（續(xù)4）n測(cè)定法：測(cè)定法：n（1）對(duì)照品比較法）對(duì)照品比較法：n（2）吸收系數(shù)法：誤差較大）吸收系數(shù)法：誤差較大n（3）計(jì)算分光光度法：）計(jì)算分光光度法：n（4）比色法：在可見光區(qū)的分析。）比色法：在可見光區(qū)的分析。56（二）熒光分析法（二）熒光分析法n某些物質(zhì)受紫外光或可見光照射激發(fā)后發(fā)射出某些物質(zhì)受紫外光或可見光照射激發(fā)后發(fā)射出比激發(fā)光波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光，比激發(fā)光波長(zhǎng)較長(zhǎng)的熒光，利用物質(zhì)在一定濃利用物質(zhì)在一定濃度時(shí)，其熒光強(qiáng)度與溶液中該物質(zhì)的濃度成正度時(shí)，其熒光強(qiáng)度與溶液中該物

35、質(zhì)的濃度成正比關(guān)系，可以用來定量分析比關(guān)系，可以用來定量分析。n特點(diǎn)：特點(diǎn)：n（1）靈敏度高靈敏度高，比，比UVVis更高，更高，可達(dá)到可達(dá)到10-1010-12g/ml。n（2）濃度太高，有熒光淬滅作用，濃度太高，有熒光淬滅作用，應(yīng)在低濃應(yīng)在低濃度中進(jìn)行測(cè)定。度中進(jìn)行測(cè)定。5758（二）熒光分析法（續(xù)（二）熒光分析法（續(xù)1）n（3）可以通過衍生化的方法可以通過衍生化的方法，使得無熒光的，使得無熒光的物質(zhì)帶有熒光基團(tuán)。在氨基酸等物質(zhì)的分析中物質(zhì)帶有熒光基團(tuán)。在氨基酸等物質(zhì)的分析中常用。常用。n測(cè)定時(shí)常采用測(cè)定時(shí)常采用對(duì)照品對(duì)照對(duì)照品對(duì)照的方法進(jìn)行分析。的方法進(jìn)行分析。n熒光分析法也是熒光分析法

36、也是HPLC常用的檢測(cè)器常用的檢測(cè)器之一。之一。59三、色譜分析法三、色譜分析法n是一種分離分析的方法，根據(jù)混合物中各組分是一種分離分析的方法，根據(jù)混合物中各組分的色譜行為差異，先行分離后在線對(duì)各組分逐的色譜行為差異，先行分離后在線對(duì)各組分逐一進(jìn)行分析的方法，是分離混合物的有力手段一進(jìn)行分析的方法，是分離混合物的有力手段n較常見的是較常見的是TLC、HPLC、GC以及各種聯(lián)用以及各種聯(lián)用技術(shù)。技術(shù)。定量一般用定量一般用HPLC和和GC等等。n1、HPLC：適用范圍廣，越來越廣泛：適用范圍廣，越來越廣泛n2、GC：理論成熟，但使用受限：理論成熟，但使用受限n3、TLC：少用于定量，：少用于定量，

37、TLCS應(yīng)用不多應(yīng)用不多6061色譜法特點(diǎn)：色譜法特點(diǎn)：n1、條件選擇范圍寬，包括色譜柱、流動(dòng)相、條件選擇范圍寬，包括色譜柱、流動(dòng)相、檢測(cè)器等。檢測(cè)器等。n2、應(yīng)用范圍寬：大部分藥物都可以用色譜法、應(yīng)用范圍寬：大部分藥物都可以用色譜法分析，以分析，以HPLC為最廣泛。為最廣泛。n3、靈敏度高，準(zhǔn)確度好，重線性好。、靈敏度高，準(zhǔn)確度好，重線性好。n4、操作繁瑣，實(shí)驗(yàn)消耗大。、操作繁瑣，實(shí)驗(yàn)消耗大。n5、適用于多組分的分離分析，與光譜等聯(lián)用、適用于多組分的分離分析，與光譜等聯(lián)用，可進(jìn)行定性和定量分析。，可進(jìn)行定性和定量分析。62（一）（一）HPLC法法n高效液相色譜法（高效液相色譜法（High P

38、erformance Liquid Chromatography, HPLC）是在）是在經(jīng)典液相色經(jīng)典液相色譜法譜法的基礎(chǔ)上，引入了的基礎(chǔ)上，引入了氣相色譜法氣相色譜法的理論和實(shí)的理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù)，以驗(yàn)技術(shù)，以高壓輸送流動(dòng)相高壓輸送流動(dòng)相，采用，采用高效固定相高效固定相及及高靈敏度檢測(cè)器高靈敏度檢測(cè)器，發(fā)展而成的現(xiàn)代液相色譜，發(fā)展而成的現(xiàn)代液相色譜分析方法。分析方法。nHPLC具有具有分離效率高、選擇性好、分析速度分離效率高、選擇性好、分析速度快、檢測(cè)靈敏度高、操作自動(dòng)化和應(yīng)用范圍廣快、檢測(cè)靈敏度高、操作自動(dòng)化和應(yīng)用范圍廣的的特點(diǎn)。特點(diǎn)。63HPLC實(shí)物圖實(shí)物圖64（一）（一）HPLC法（續(xù)法（

39、續(xù)1）n主要區(qū)別：主要區(qū)別：固定相差別，輸液設(shè)備和檢測(cè)手段固定相差別，輸液設(shè)備和檢測(cè)手段n1經(jīng)典經(jīng)典LC：僅做為一種分離手段僅做為一種分離手段n柱內(nèi)徑柱內(nèi)徑13cm，固定相粒徑，固定相粒徑100m 且不均且不均勻勻n常壓輸送流動(dòng)相常壓輸送流動(dòng)相 n柱效低（柱效低（H，n）n分析周期長(zhǎng)分析周期長(zhǎng)n無法在線檢測(cè)無法在線檢測(cè)65（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)2）n2HPLC：分離和分析：分離和分析n柱柱內(nèi)徑內(nèi)徑26mm，固定相粒徑，固定相粒徑10m（球形，（球形，勻漿裝柱）勻漿裝柱） n高壓高壓輸送流動(dòng)相輸送流動(dòng)相n柱效高（柱效高（H，n）n分析時(shí)間分析時(shí)間大大縮短大大縮短 n可以可以在線檢測(cè)在線

40、檢測(cè)66（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)3）n與經(jīng)典與經(jīng)典LC比較，比較，HPLC具有如下優(yōu)點(diǎn)：具有如下優(yōu)點(diǎn)：n（1）采用高效固定相，）采用高效固定相，柱效高，分離效率高柱效高，分離效率高；n（2）采用高壓泵輸送流動(dòng)相，）采用高壓泵輸送流動(dòng)相，流速快，分析流速快，分析速度快速度快，一般需要幾分鐘到十幾分鐘即可分析，一般需要幾分鐘到十幾分鐘即可分析完樣品，完樣品，要求要求20分鐘之內(nèi)分析結(jié)束分鐘之內(nèi)分析結(jié)束；n（3）廣泛采用高靈敏度檢測(cè)器廣泛采用高靈敏度檢測(cè)器，可分析微量，可分析微量或極微量物質(zhì)的含量?；驑O微量物質(zhì)的含量。UV檢測(cè)器可達(dá)到檢測(cè)器可達(dá)到1ng，熒光檢測(cè)器可達(dá)到熒光檢測(cè)器可達(dá)到1pg

41、。但不是對(duì)所有樣品都但不是對(duì)所有樣品都可達(dá)到這個(gè)靈敏度?？蛇_(dá)到這個(gè)靈敏度。67（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)4）nHPLC與與GC比較：比較：n相同相同：兼具：兼具分離和分析分離和分析功能，均可以功能，均可以在線檢測(cè)在線檢測(cè) n區(qū)別區(qū)別：分析對(duì)象分析對(duì)象的差別和的差別和流動(dòng)相流動(dòng)相的差別的差別n1、GC：分析：分析可氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較可氣化、熱穩(wěn)定性好、且沸點(diǎn)較低的樣品低的樣品，對(duì)于高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性，對(duì)于高沸點(diǎn)、揮發(fā)性差、熱穩(wěn)定性差、離子型及高聚物的樣品難以分析。差、離子型及高聚物的樣品難以分析。可分析可分析樣品占有機(jī)物的樣品占有機(jī)物的20%。n采用的采用的流動(dòng)相為惰性氣體

42、流動(dòng)相為惰性氣體，組分與流動(dòng)相無親，組分與流動(dòng)相無親合作用力，只與固定相作用。合作用力，只與固定相作用。n實(shí)驗(yàn)過程常實(shí)驗(yàn)過程常需加溫操作需加溫操作。68（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)5）n2、HPLC：可分析：可分析溶解后能制成溶液溶解后能制成溶液的樣品，的樣品，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的限制 ，對(duì)于分對(duì)于分子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及高分子和離子子量大、難氣化、熱穩(wěn)定性差及高分子和離子型樣品均可檢測(cè)型樣品均可檢測(cè)；所以用途廣泛，約占可；所以用途廣泛，約占可分析分析有機(jī)物的有機(jī)物的80%。nHPLC的的流動(dòng)相為液體流動(dòng)相為液體，流動(dòng)相與組分間有親，流動(dòng)相與組分間

43、有親合作用力；合作用力；流動(dòng)相種類較多流動(dòng)相種類較多，選擇余地廣；，選擇余地廣；可可選用不同比例兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相選用不同比例兩種或兩種以上液體作為流動(dòng)相。n實(shí)驗(yàn)過程一般是實(shí)驗(yàn)過程一般是常溫常溫。69（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)6）n與與GC比較，比較，HPLC具有的優(yōu)點(diǎn)：具有的優(yōu)點(diǎn)：n（1）分析樣品范圍廣）分析樣品范圍廣，不受樣品揮發(fā)性和熱，不受樣品揮發(fā)性和熱穩(wěn)定性的影響；穩(wěn)定性的影響；n（2）流動(dòng)相選擇范圍寬，）流動(dòng)相選擇范圍寬，可精細(xì)調(diào)節(jié)流動(dòng)相可精細(xì)調(diào)節(jié)流動(dòng)相的條件，使得分析結(jié)果符合要求；的條件，使得分析結(jié)果符合要求；n（3）一般常溫進(jìn)行，）一般常溫進(jìn)行，不需要高柱溫。不需

44、要高柱溫。70HPLC部分構(gòu)造圖部分構(gòu)造圖71GC部分構(gòu)造圖部分構(gòu)造圖72色譜柱比較色譜柱比較73（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)7）n一、定性分析方法一、定性分析方法nHPLC的定性分析方法可以分為的定性分析方法可以分為色譜鑒定法色譜鑒定法和和非色譜鑒定法非色譜鑒定法，后者可分為化學(xué)鑒定法和兩譜，后者可分為化學(xué)鑒定法和兩譜聯(lián)用鑒定法。聯(lián)用鑒定法。n1、色譜鑒定法色譜鑒定法：利用：利用色譜定性參數(shù)保留時(shí)間色譜定性參數(shù)保留時(shí)間（或保留體積）和相對(duì)保留值，或（或保留體積）和相對(duì)保留值，或用已知物對(duì)用已知物對(duì)照法對(duì)組分進(jìn)行鑒別分析照法對(duì)組分進(jìn)行鑒別分析。其。其原理是同一物質(zhì)原理是同一物質(zhì)在相同色譜條

45、件下保留時(shí)間相同在相同色譜條件下保留時(shí)間相同。此法只能對(duì)。此法只能對(duì)范圍已知的化合物進(jìn)行定性。范圍已知的化合物進(jìn)行定性。7475（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)8）n2、化學(xué)鑒定法化學(xué)鑒定法：利用專屬性化學(xué)反應(yīng)的分離：利用專屬性化學(xué)反應(yīng)的分離后收集的組分進(jìn)行定性分析。此法只適合于鑒后收集的組分進(jìn)行定性分析。此法只適合于鑒定組分屬于哪一類化合物。通常是收集餾分，定組分屬于哪一類化合物。通常是收集餾分，再與官能團(tuán)分類試劑反應(yīng)。再與官能團(tuán)分類試劑反應(yīng)。n3、兩譜聯(lián)用鑒定法兩譜聯(lián)用鑒定法：當(dāng)相鄰：當(dāng)相鄰兩組分的分離度兩組分的分離度夠大夠大時(shí)，以制備時(shí)，以制備HPLC獲得純組分，而后與獲得純組分，而后與

46、UV、IR、MS或或NMR等分析手段進(jìn)行定性鑒定。等分析手段進(jìn)行定性鑒定。76（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)9）n色譜的定量，都需要色譜系統(tǒng)符合一定要求，色譜的定量，都需要色譜系統(tǒng)符合一定要求，即要進(jìn)行即要進(jìn)行色譜系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)色譜系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)，包括對(duì)主要組，包括對(duì)主要組分的分的理論塔板數(shù)理論塔板數(shù)、主要組分與其他組份的、主要組分與其他組份的分離分離度度，以及，以及重復(fù)性重復(fù)性和主要組分的和主要組分的峰對(duì)稱因子峰對(duì)稱因子（拖（拖尾因子）等。其中尾因子）等。其中分離度和重復(fù)性分離度和重復(fù)性是其中更具是其中更具實(shí)用意義的參數(shù)。實(shí)用意義的參數(shù)。n1、色譜柱的理論塔板數(shù)色譜柱的理論塔板數(shù)（n）：在

47、）：在規(guī)定的色規(guī)定的色譜條件下譜條件下（固定相，流動(dòng)相等），注入供試品（固定相，流動(dòng)相等），注入供試品溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，溶液或各品種項(xiàng)下規(guī)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)溶液，77（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)10）n記錄色譜圖，量出供試品記錄色譜圖，量出供試品主成分主成分或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰或內(nèi)標(biāo)物質(zhì)峰的的保留時(shí)間保留時(shí)間tR（以分鐘或長(zhǎng)度計(jì)，下同，但應(yīng)（以分鐘或長(zhǎng)度計(jì)，下同，但應(yīng)取相同單位）和取相同單位）和半高峰寬（半高峰寬（Wh/2），），按按n5.54（tR/Wh/2）2計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)，計(jì)算色譜柱的理論板數(shù)，如如果測(cè)得理論板數(shù)低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最小理果測(cè)得理論板數(shù)低于各品種項(xiàng)下規(guī)定的最

48、小理論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件（如柱長(zhǎng)、論板數(shù)，應(yīng)改變色譜柱的某些條件（如柱長(zhǎng)、載體性能、色譜柱充填的效果等），使理論板載體性能、色譜柱充填的效果等），使理論板數(shù)符合要求數(shù)符合要求。n問：為什么不用峰寬來計(jì)算理論塔板數(shù)？問：為什么不用峰寬來計(jì)算理論塔板數(shù)？7879（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)11）n2、分離度分離度（R）：無論是）：無論是定性鑒別還是定量定性鑒別還是定量分析分析，均要求，均要求待測(cè)峰與其他峰、內(nèi)標(biāo)峰或特定待測(cè)峰與其他峰、內(nèi)標(biāo)峰或特定的雜質(zhì)對(duì)照峰之間有較好的分離度的雜質(zhì)對(duì)照峰之間有較好的分離度。分離度的。分離度的計(jì)算公式為：計(jì)算公式為：n式中式中tR2、tR1分別為相鄰兩

49、峰中后一峰和前一峰分別為相鄰兩峰中后一峰和前一峰的保留時(shí)間；的保留時(shí)間；W1及及W2為此相鄰兩峰的峰寬。為此相鄰兩峰的峰寬。n除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于除另有規(guī)定外，分離度應(yīng)大于1.5。80（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)12）n3、重復(fù)性重復(fù)性：取各品種項(xiàng)下的對(duì)照溶液，連續(xù)：取各品種項(xiàng)下的對(duì)照溶液，連續(xù)進(jìn)樣進(jìn)樣35次，除另有規(guī)定外，其次，除另有規(guī)定外，其峰面積測(cè)量值峰面積測(cè)量值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。也可按各品。也可按各品種校正因子測(cè)定項(xiàng)下，配制相當(dāng)于種校正因子測(cè)定項(xiàng)下，配制相當(dāng)于80%、100%和和120%的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的內(nèi)的對(duì)照品溶液，加入規(guī)定量的

50、內(nèi)標(biāo)溶液，配成標(biāo)溶液，配成3種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣種不同濃度的溶液，分別進(jìn)樣3次，計(jì)算平均校正因子。次，計(jì)算平均校正因子。其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差也應(yīng)不大于不大于2.0%。81（一）（一）HPLC法（續(xù)法（續(xù)13）n4、拖尾因子（拖尾因子（T）：為保證分離效果和測(cè)定：為保證分離效果和測(cè)定精度，應(yīng)檢查待測(cè)峰的拖尾因子是否符合各品精度，應(yīng)檢查待測(cè)峰的拖尾因子是否符合各品種項(xiàng)下的規(guī)定。拖尾因子的計(jì)算公式為：種項(xiàng)下的規(guī)定。拖尾因子的計(jì)算公式為：n式中式中 W0.05h為為0.05峰高處的峰寬峰高處的峰寬；d1為峰頂點(diǎn)為峰頂點(diǎn)至峰前沿之間的距離。至峰前沿之間的距離。n除另有規(guī)定外，峰高法定量時(shí)除另有規(guī)定外，峰高法定量時(shí)T應(yīng)在應(yīng)在0.951.05之間。峰面積定量影響不大，也不應(yīng)太大之間。峰面積定量影響不大，也不應(yīng)太大82Yao Meicun, Tel:/p>