冬凌草提取物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠慢性肝損傷的保護(hù)作用

1、冬凌草提取物對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的小鼠慢性肝損傷的保護(hù)作用 10-08-24 15:15:00 編輯：studa20 作者：姚會(huì)枝，李吉學(xué)， 鄭海娜【摘要】 目的觀察冬凌草提取物對(duì)四氯化碳致小鼠慢性肝損傷的影響。方法小鼠皮下注射20% CCl4花生油溶液造成慢性肝損傷，末次給藥24 h后測(cè)定血清中主要生化指標(biāo)，以及觀察肝組織病理學(xué)變化。結(jié)果冬凌草提取物能夠顯著降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的水平，降低總蛋白(TP)、白蛋白(ALB )和丙二醛(MDA)的含量，提高超氧化物歧化酶(SOD)活性，減輕肝組織變性、壞死程度，緩解肝組織的病理改變。結(jié)論冬凌草提取物對(duì)四氯化碳致小鼠慢性肝損

2、傷有保護(hù)作用。 【關(guān)鍵詞】 冬凌草提取物; 慢性肝損傷; 復(fù)方益肝靈片; 四氯化碳; 小鼠Abstract：Objective To observe the effect of Isodon rubsecens extact on CCl4- induced chronic hepatic injury in mice. MethodsThe chronic hepatic model was developed by injection of 20% CCl4 in mice. Sixty mice were divided into 6 groups with 10 mice in eac

3、h group: normal control group(group A),model group (group B), Isodon rubescens small-,middle-,large-dose groups(group C1,C2,C3 ) and Compound liver-benepitino Remedy tablet control group (group D). The mice in group C1,C2,C3 were administered with I.rubescens at different doses for 8 weeks. The mice

4、 in group D were then administered with Compound liver-benepitino Remedy tablets. The levels of serum AST,ALT,SOD,MDA,TP,ALB were measured and pathological changes of liver tissue was examined after HE staining. ResultsI.rubescens could significantly decrease the level of serum ALT,AST,TP and ALB, r

5、educe the content of MDA and significantly increase the activity of SOD in serum. There had no significant difference between I.rubescens and Compound liver-benepitino Remedy tablets.Conclusion I. rubescens has protective effects on the experimental chronic hepatic injury induced by CCl4 in mice.Key

6、 words：Isodon rubescens; Chronic hepatic injury; Compound liver-benepitino Remedy tablets; Carbon Tetrachloride; Mice冬凌草Isodon rubescens (Hemsl) Hara為唇型科香茶菜屬植物,1991年我國(guó)衛(wèi)生部批準(zhǔn)干燥葉及其地上部分作為中藥材。冬凌草味甘苦，性微寒，具清熱解毒、消炎止痛、抗腫瘤等功效1，2。冬凌草提取物主要化學(xué)成分是貝殼杉烯類二萜，冬凌草甲素為其主要活性成分，還有一些三萜成分和揮發(fā)油3。冬凌草及其主要活性成分的良好作用引起了國(guó)內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注，近3

7、0年來國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)其進(jìn)行了多方面的研究4。本研究從護(hù)肝的角度報(bào)道了冬凌草提取物對(duì)四氯化碳致小鼠慢性肝損傷及早期肝纖維化的影響,并初步探討其作用機(jī)理。1 儀器與材料1.1 儀器UV-754紫外可見分光光度計(jì)(上海科學(xué)精密儀器有限公司)，電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司制造)，LEICARM2135石蠟切片機(jī)(德國(guó)LEICA公司) ，光學(xué)顯微鏡(NIKON)。1.2 動(dòng)物昆明種健康小鼠，雌雄各半，體質(zhì)量(202)g，隨機(jī)分組，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(合格證號(hào)：2009A318)。1.3 藥品 冬凌草購(gòu)自河南省濟(jì)源市藥材公司，制備冬凌草提取物：將冬凌草全草2 kg用95%工業(yè)乙醇回流提取，

8、提取液合并減壓濃縮，在丙酮中溶解，加等體積的水，振蕩后靜置。傾倒出清液，用醋酸乙酯萃取，醋酸乙酯部分濃縮至漿狀，干燥，即得冬凌草提取物粉末，HPLC法測(cè)定冬凌草甲素的含量為8.92 mg/kg。將冬凌草提取物用0.5% CMC-Na溶液配成所需濃度的溶液備用。復(fù)方益肝靈片(每片含水飛薊素以水飛薊賓為21 mg)，批號(hào)為081108，購(gòu)自北京雙鶴現(xiàn)代醫(yī)藥技術(shù)有限責(zé)任公司。復(fù)方益肝靈片研碎用0.5% CMC-Na溶液配成含水飛薊賓2.1 mg/ml混懸液做陽(yáng)性對(duì)照藥。1.4 試劑四氯化碳(CCl4)，分析純，批號(hào)20081231，購(gòu)自天津市德恩化學(xué)試劑有限公司。谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)測(cè)定試劑盒，谷草

9、轉(zhuǎn)氨酶(AST)測(cè)定試劑盒，超氧化物歧化酶(SOD)測(cè)定試劑盒，丙二醛(MDA)試劑盒，總蛋白(TP)測(cè)定試劑盒，白蛋白(ALB)測(cè)定試劑盒,其批號(hào)均為20081111，均購(gòu)自南京建成生物工程研究所。2 方法2.1 實(shí)驗(yàn)方法小鼠隨機(jī)分為6組，空白對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱空白組，10只)，慢性肝損傷模型組(以下簡(jiǎn)稱模型組，10只)，復(fù)方益肝靈陽(yáng)性對(duì)照組(10只)，冬凌草提取物高、中、低劑量組各10只。預(yù)飼養(yǎng)1周后開始造模，除空白對(duì)照組外其余各組以20% CCl4花生油溶液腹部皮下注射，首次0.2 ml/10g,以后每5天注射20% CCl4 0.1 ml/kg，連續(xù)8周。造模前兩天開始灌胃給藥或0.5%

10、 CMC-Na溶液，一直持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束，1次/d，劑量為：空白組和模型組灌以0.5% CMC-Na 0.2 ml(10gd)-1;復(fù)方益肝靈組灌以0.42mg(10gd) -1,冬凌草提取物預(yù)防低、中、高0.08，0.04，0.02 g(10gd)-1,8周末各組小鼠末次灌胃后24 h取材，處死。取血完畢后處死小鼠，立刻剖開腹腔，暴露肝臟，取肝右葉約0.3 cm3,迅速投入10%福爾馬林溶液中固定。石蠟包埋，制備病理切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡觀察肝細(xì)胞組織病理變化。分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)：(-)表示肝組織無腫脹、壞死及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);(+)表示肝細(xì)胞輕度腫脹，單個(gè)肝細(xì)胞壞死，或少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn);(+)表示肝細(xì)胞中度腫脹，或肝細(xì)胞造性壞死，或有明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn);(+)表示肝細(xì)胞重度腫脹，或肝細(xì)胞片狀壞死，或大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。2.2 觀察指標(biāo)及測(cè)定方法在實(shí)驗(yàn)過程中每天觀察各組小鼠進(jìn)食、飲水、活動(dòng)情況及皮毛變化，每周稱體