第1章植組織培養(yǎng)實驗室的構(gòu)建和操作技術(shù)

1、第第1 1章章 植物組織培養(yǎng)實驗室植物組織培養(yǎng)實驗室 構(gòu)建及操作技術(shù)構(gòu)建及操作技術(shù) 大大 家家 好好 ！植物組織培養(yǎng)學植物組織培養(yǎng)學本章教學目的與要求：本章教學目的與要求：l(1)掌握組織培養(yǎng)實驗室的設(shè)計；掌握組織培養(yǎng)實驗室的設(shè)計；l(2)掌握組織培養(yǎng)常用的實驗儀器設(shè)備及其使用方法；掌握組織培養(yǎng)常用的實驗儀器設(shè)備及其使用方法；l(3)掌握調(diào)控組織培養(yǎng)的主要環(huán)境條件。掌握調(diào)控組織培養(yǎng)的主要環(huán)境條件。l(4)掌握滅菌和消毒的區(qū)別；掌握滅菌和消毒的區(qū)別；l(5)掌握滅菌的不同方法和具體操作過程；掌握滅菌的不同方法和具體操作過程；l(6)掌握無菌接種的步驟；掌握無菌接種的步驟；l(7)掌握外植體的培養(yǎng)

2、方法和步驟；掌握外植體的培養(yǎng)方法和步驟；l(8)一般掌握外植體褐變和玻璃化的處理方法；一般掌握外植體褐變和玻璃化的處理方法；l(9)掌握試管苗馴化的基本程序；掌握試管苗馴化的基本程序；第第1 1章章 植物組織培養(yǎng)實植物組織培養(yǎng)實驗室構(gòu)建及操作技術(shù)驗室構(gòu)建及操作技術(shù)第第1 1章章 植物組織培養(yǎng)實驗室植物組織培養(yǎng)實驗室 構(gòu)建及操作技術(shù)構(gòu)建及操作技術(shù)植物組織培養(yǎng)學植物組織培養(yǎng)學p 商業(yè)性組織培養(yǎng)實驗室和小工廠的商業(yè)性組織培養(yǎng)實驗室和小工廠的設(shè)計與主要設(shè)備設(shè)計與主要設(shè)備p 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制p 外植體的選擇與培養(yǎng)外植體的選擇與培養(yǎng)p 試管苗的馴化與移栽試管苗的馴化與移栽 第第1 1章章 植物

3、組織培養(yǎng)實驗室植物組織培養(yǎng)實驗室構(gòu)建及操作技術(shù)構(gòu)建及操作技術(shù) 1 1、培養(yǎng)器皿的清洗；、培養(yǎng)器皿的清洗； 2 2、培養(yǎng)基的配制、分裝和高壓滅菌；、培養(yǎng)基的配制、分裝和高壓滅菌； 3 3、無菌操作、無菌操作材料的表面滅菌和接種；材料的表面滅菌和接種； 4 4、將培養(yǎng)物放到培養(yǎng)室培養(yǎng)；、將培養(yǎng)物放到培養(yǎng)室培養(yǎng)； 5 5、試管苗的馴化、移栽和初期管理。、試管苗的馴化、移栽和初期管理。第第1 1章章 植物組織培養(yǎng)實驗室植物組織培養(yǎng)實驗室構(gòu)建及操作技術(shù)構(gòu)建及操作技術(shù)第一節(jié)第一節(jié) 商業(yè)性組織培養(yǎng)實驗室和小工廠的商業(yè)性組織培養(yǎng)實驗室和小工廠的 設(shè)計與主要設(shè)備設(shè)計與主要設(shè)備一般組織培養(yǎng)的操作工序：一般組織培養(yǎng)

4、的操作工序：一、設(shè)計：一、設(shè)計：第一節(jié)第一節(jié) 組織培養(yǎng)實驗室的組織培養(yǎng)實驗室的 設(shè)計與主要設(shè)備設(shè)計與主要設(shè)備二、儀器設(shè)備和器皿用具二、儀器設(shè)備和器皿用具1、超凈工作臺或接種箱、超凈工作臺或接種箱2、空調(diào)、空調(diào)3、除濕機或加濕器、除濕機或加濕器4、恒溫培養(yǎng)箱、恒溫培養(yǎng)箱5、高壓滅菌鍋、高壓滅菌鍋6、冰箱、冰箱7、天平、天平8、顯微鏡、顯微鏡9、水浴鍋、水浴鍋10、搖床與轉(zhuǎn)床、搖床與轉(zhuǎn)床11、蒸餾水發(fā)生器、蒸餾水發(fā)生器12、酸度計、酸度計13、離心機、離心機第一節(jié)第一節(jié) 組織培養(yǎng)實驗室的組織培養(yǎng)實驗室的 設(shè)計與主要設(shè)備設(shè)計與主要設(shè)備1、培養(yǎng)器皿：、培養(yǎng)器皿：試管、三角瓶、培養(yǎng)皿、試管、三角瓶、培養(yǎng)

5、皿、 圓形培養(yǎng)瓶、果醬瓶圓形培養(yǎng)瓶、果醬瓶2、分注器、分注器3、離心管、離心管4、刻度移液管、刻度移液管5、細菌過濾器、細菌過濾器6、實驗器皿：、實驗器皿：量筒、燒杯、容量瓶、量筒、燒杯、容量瓶、 試劑瓶、塑料瓶、酒精燈等。試劑瓶、塑料瓶、酒精燈等。第一節(jié)第一節(jié) 組織培養(yǎng)實驗室的組織培養(yǎng)實驗室的 設(shè)計與主要設(shè)備設(shè)計與主要設(shè)備1 1、鑷子：尖頭鑷子、槍形鑷子、鑷子：尖頭鑷子、槍形鑷子2 2、剪子、剪子3 3、解剖刀、解剖刀4 4、接種針、接種針5 5、鉆孔器、鉆孔器第一節(jié)第一節(jié) 組織培養(yǎng)實驗室的組織培養(yǎng)實驗室的 設(shè)計與主要設(shè)備設(shè)計與主要設(shè)備第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制本節(jié)目的要求：

6、本節(jié)目的要求：(1)(1)一般掌握培養(yǎng)基的種類、特點；一般掌握培養(yǎng)基的種類、特點；(2)(2)掌握基本培養(yǎng)基的配方；掌握基本培養(yǎng)基的配方；(3)(3)一般掌握培養(yǎng)基的組成成分和適宜的劑量；一般掌握培養(yǎng)基的組成成分和適宜的劑量；(4)(4)掌握培養(yǎng)基母液和常用培養(yǎng)基的配制方法；掌握培養(yǎng)基母液和常用培養(yǎng)基的配制方法；(5)(5)熟練掌握培養(yǎng)基的滅菌方法；熟練掌握培養(yǎng)基的滅菌方法；(6)(6)一般掌握培養(yǎng)基的篩選辦法。一般掌握培養(yǎng)基的篩選辦法。 第第1 1章章 植物組織培養(yǎng)實驗室植物組織培養(yǎng)實驗室構(gòu)建及操作技術(shù)構(gòu)建及操作技術(shù)一、培養(yǎng)基的成分一、培養(yǎng)基的成分第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制培

7、養(yǎng)基組成培養(yǎng)基組成1、無機營養(yǎng)元素、無機營養(yǎng)元素(inorganic element) 1)1)大量元素：大量元素：指濃度大于指濃度大于0.5mmol0.5mmolL L的元素。的元素。 NN、P P、K K、MgMg、S S和和CaCa等等 。2)2)微量元素：微量元素：指小于指小于0.5mmol0.5mmolL L的元素。的元素。 FeFe，B B，MnMn，CuCu，MoMo，CoCo等等 。 第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制2、有機化合物、有機化合物(organic compound) F最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是較好的碳源。最常用的碳源是蔗糖，葡萄糖和果糖也是較好

8、的碳源。F 使用濃度在使用濃度在1%5%，常用，常用3%F 作用：碳源；維持培養(yǎng)基滲透壓。作用：碳源；維持培養(yǎng)基滲透壓。 第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制l在細胞里主要是以各種輔酶的形式參與多種代謝活動。在細胞里主要是以各種輔酶的形式參與多種代謝活動。l種類：種類：VBl(鹽酸硫胺素鹽酸硫胺素)、 VB6(鹽酸吡哆醇鹽酸吡哆醇)、 Vpp(煙酸煙酸)、 Vc（抗壞血酸）、（抗壞血酸）、 VH(生物素生物素)、 VB11(葉酸葉酸)、 VB12（鈷胺素（鈷胺素)等。等。l使用濃度：使用濃度：一般用量為一般用量為0.11.0mgL。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制l又叫環(huán)己六醇

9、，在糖類的相互轉(zhuǎn)化中起重要作用。又叫環(huán)己六醇，在糖類的相互轉(zhuǎn)化中起重要作用。l使用濃度使用濃度：一般為：一般為lOOmglOOmgL L，l作用作用：適當使用肌醇，能促進愈傷組織的生長以：適當使用肌醇，能促進愈傷組織的生長以及胚狀體和芽的形成。對組織和細胞的繁殖、分及胚狀體和芽的形成。對組織和細胞的繁殖、分化有促進作用，對細胞壁的形成也有作用?；写龠M作用，對細胞壁的形成也有作用。 第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制l作用作用：是很好的有機氮源，可直接被細胞吸：是很好的有機氮源，可直接被細胞吸收利用。收利用。l種類種類：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨酸、：最常用的是甘氨酸，其他的如精氨

10、酸、谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙谷氨酸，谷酰胺、天冬氨酸、天冬酰胺、丙氨酸等。氨酸等。l使用濃度使用濃度：為：為10200mg10200mgL L。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制3、有機附加物、有機附加物 （天然復合物）（天然復合物）第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制椰乳椰乳香蕉香蕉馬鈴薯馬鈴薯酵母提取液酵母提取液4、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)(hormone) 第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制 * *作用作用：主要被用于誘導愈傷組織形成；促進主要被用于誘導愈傷組織形成；促進細胞脫分化；促進細胞伸長；促進生根。細胞脫分化；促進細胞伸長；促進生根。

11、 在促進生長方面，根對生長素最敏感。在在促進生長方面，根對生長素最敏感。在極低的濃度下，極低的濃度下，(10(10-5-51010-8-8mgmgL)L)就可促進生就可促進生長，其次是莖和芽。長，其次是莖和芽。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制吲哚乙酸：吲哚乙酸：IAA（indo acetic acid）萘乙酸：萘乙酸：NAA（naphthalene acetic acid）吲哚丁酸：吲哚丁酸：IBA（indolebutyri acid）2,4-二氯苯氧乙酸：二氯苯氧乙酸：2,4D (2,4-dichlorophenoxybutyric acid) 第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及

12、其配制IAA(吲哚乙酸吲哚乙酸)NAA(萘乙酸萘乙酸)IBA(吲哚丁酸吲哚丁酸)2,4D(2,4二氯苯氧乙酸二氯苯氧乙酸)生長素作用強弱順序：生長素作用強弱順序：強強弱弱第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制種類：種類：l6BA(6芐基腺嘌呤芐基腺嘌呤)lKt (kinetin 激動素激動素)lZt (zeatin 玉米素玉米素) 第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制Kt ( 激動素激動素)6BA(6芐基腺嘌呤芐基腺嘌呤)Zt (玉米素玉米素)細胞分裂素作用強弱順序細胞分裂素作用強弱順序強強弱弱第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制GAGA3 3（赤霉酸）：（赤霉酸）：作用作用：

13、促進幼芽伸長生長，促進不定胚發(fā)育成?。捍龠M幼芽伸長生長，促進不定胚發(fā)育成小植株。植株。 赤霉素和生長素協(xié)同作用，對形成層的分化赤霉素和生長素協(xié)同作用，對形成層的分化有影響：當有影響：當生長素赤霉素比值高生長素赤霉素比值高時有利于時有利于木木質(zhì)部質(zhì)部分化，分化，比值低比值低時有利于時有利于韌皮部韌皮部分化。分化。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制5 5、培養(yǎng)材料的支持物、培養(yǎng)材料的支持物 -瓊脂瓊脂(agar) (agar) l固體培養(yǎng)時最好的固體培養(yǎng)時最好的固化劑固化劑。 l用量：用量：610g610gL L。l瓊脂是一種由海藻中提取的高分子碳水化合物，本身并瓊脂是一種由海藻中提取的高

14、分子碳水化合物，本身并不提供任何營養(yǎng)。瓊脂能溶解在熱水中，成為溶膠，冷不提供任何營養(yǎng)。瓊脂能溶解在熱水中，成為溶膠，冷卻至卻至40 40 即凝固為固體狀凝膠。即凝固為固體狀凝膠。l瓊脂的凝固能力除與原料、廠家的加工方式有關(guān)外，還瓊脂的凝固能力除與原料、廠家的加工方式有關(guān)外，還與與高壓滅菌時的溫度、時間、高壓滅菌時的溫度、時間、pHpH值值等因素有關(guān)，長時間等因素有關(guān)，長時間的高溫會使凝固能力下降，過酸過堿加之高溫會使瓊脂的高溫會使凝固能力下降，過酸過堿加之高溫會使瓊脂發(fā)生水解，喪失凝固能力。時間過久，瓊脂變褐，也會發(fā)生水解，喪失凝固能力。時間過久，瓊脂變褐，也會逐漸喪失凝固能力。逐漸喪失凝固能

15、力。 第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制固體培養(yǎng)基的特點（與液體培養(yǎng)基相比）固體培養(yǎng)基的特點（與液體培養(yǎng)基相比）: :優(yōu)點優(yōu)點: :操作簡便，通氣問題易解決，便于觀察研究。操作簡便，通氣問題易解決，便于觀察研究。缺點缺點: :培養(yǎng)物與培養(yǎng)基的接觸培養(yǎng)物與培養(yǎng)基的接觸( (即吸收即吸收) )面積小，各種養(yǎng)分在面積小，各種養(yǎng)分在瓊脂中擴散較慢，影響?zhàn)B分充分利用，同時培養(yǎng)物排出瓊脂中擴散較慢，影響?zhàn)B分充分利用，同時培養(yǎng)物排出的代謝廢物，聚集在吸收表面，對組織產(chǎn)生毒害作用。的代謝廢物，聚集在吸收表面，對組織產(chǎn)生毒害作用。固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)液體培養(yǎng)液體培養(yǎng)第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制

16、6、抗生物質(zhì)、抗生物質(zhì)(antibiotic) l種類：種類：青霉素、鏈霉素、慶大霉素等。青霉素、鏈霉素、慶大霉素等。l濃度：濃度：520mg/L。l作用：作用：可可防止菌類污染防止菌類污染。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制7、活性炭、活性炭(active carbon) l目的：目的：是是利用其吸附能力，減少一些有毒物利用其吸附能力，減少一些有毒物質(zhì)的影響質(zhì)的影響；利于生根。；利于生根。l使用濃度：使用濃度：15gL。l它的顆粒大小決定著吸附能力：粒度越小，它的顆粒大小決定著吸附能力：粒度越小，吸附能力越大；溫度低吸附力強，溫度高吸吸附能力越大；溫度低吸附力強，溫度高吸附力減弱，甚

17、至不吸附。附力減弱，甚至不吸附。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制作用：作用：是植物原生質(zhì)體的組成成分，也是一切是植物原生質(zhì)體的組成成分，也是一切代謝過程的介質(zhì)和溶媒。代謝過程的介質(zhì)和溶媒。 注意：注意：用蒸餾水，最好是重蒸餾水；以保持培用蒸餾水，最好是重蒸餾水；以保持培養(yǎng)基成分的精確性。大規(guī)模生產(chǎn)時可用自來養(yǎng)基成分的精確性。大規(guī)模生產(chǎn)時可用自來水。水。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制二、培養(yǎng)基的二、培養(yǎng)基的PH值值 (pH value)1、多數(shù)植物要求、多數(shù)植物要求pH5.6-5.82、用、用0.1-1N的的NaOH和和0.1-1N的的HCI調(diào)節(jié)調(diào)節(jié). .3、注意：注意：p

18、經(jīng)高壓滅菌后，培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，培養(yǎng)基pHpH會下降會下降0.2-0.8,0.2-0.8,固固調(diào)整調(diào)整pHpH值時值時, ,應高于應高于0.50.5；ppHpH的大小會影響瓊脂的凝固能力，當?shù)拇笮绊懎傊哪棠芰?，當pH6.0pH6.0時，培養(yǎng)基將會變硬，時，培養(yǎng)基將會變硬，pH 5.0pH 5.0時，瓊脂凝固時，瓊脂凝固不好。不好。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制種類種類最適最適pH值值種類種類最適最適pH值值杜鵑杜鵑4.0月季月季5.8越桔越桔4.5胡蘿卜、石刁柏胡蘿卜、石刁柏6.0蠶豆蠶豆5.5桃桃7.0番茄番茄5.7 第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制不同植物對

19、培養(yǎng)基最適不同植物對培養(yǎng)基最適pH值的要求不同值的要求不同(見表見表) 培養(yǎng)基培養(yǎng)基(culture medium) ：是植物組織培是植物組織培養(yǎng)的重要基質(zhì)。在離體培養(yǎng)條件下，不同種養(yǎng)的重要基質(zhì)。在離體培養(yǎng)條件下，不同種植物的組織對營養(yǎng)有不同的要求，甚至同一植物的組織對營養(yǎng)有不同的要求，甚至同一種植物不同部位的組織對營養(yǎng)的要求也不相種植物不同部位的組織對營養(yǎng)的要求也不相同。因此，沒有一種培養(yǎng)基能夠適合一切類同。因此，沒有一種培養(yǎng)基能夠適合一切類型的植物組織或器官，在建立一項新的培養(yǎng)型的植物組織或器官，在建立一項新的培養(yǎng)系統(tǒng)時，首先必須找到一合適的培養(yǎng)基，培系統(tǒng)時，首先必須找到一合適的培養(yǎng)基，培

20、養(yǎng)才有可能成功。養(yǎng)才有可能成功。 三、培養(yǎng)基的種類、配方及特點三、培養(yǎng)基的種類、配方及特點第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制1、根據(jù)態(tài)相不同：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基、根據(jù)態(tài)相不同：固體培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基2、根據(jù)培養(yǎng)物培養(yǎng)過程：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基、根據(jù)培養(yǎng)物培養(yǎng)過程：初代培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基3、根據(jù)作用不同：誘導培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、根據(jù)作用不同：誘導培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、 生根培養(yǎng)基生根培養(yǎng)基4、根據(jù)營養(yǎng)水平：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、根據(jù)營養(yǎng)水平：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基、 改良培養(yǎng)基。改良培養(yǎng)基。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制F 若只含有大量元素與微量元素和碳水化合物若只含有

21、大量元素與微量元素和碳水化合物的培養(yǎng)基，稱為的培養(yǎng)基，稱為基本培養(yǎng)基基本培養(yǎng)基。F 在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加各種各樣的生在基本培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，添加各種各樣的生長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他有機附加物的培養(yǎng)基叫長調(diào)節(jié)物質(zhì)和其他有機附加物的培養(yǎng)基叫完全完全培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。初代培養(yǎng)基：初代培養(yǎng)基： 指用來第一次接種外植體的培養(yǎng)基。指用來第一次接種外植體的培養(yǎng)基。繼代培養(yǎng)基：繼代培養(yǎng)基：指用來接種繼初代培養(yǎng)之后的培養(yǎng)物的培養(yǎng)基指用來接種繼初代培養(yǎng)之后的培養(yǎng)物的培養(yǎng)基 。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制母液名稱母液名稱 藥品藥品 名稱名稱 原配方量原配方量 (mg)/ L大量元素母液大量元素母液 NH4N

22、O31650KNO31900CaCl2H2O440MgSO4 7H2O370KH2PO4170微量元素母液微量元素母液 MnSO4H2O22.3ZnSO47H2O8.6CoCl6H2O0.025CuSO45H2O0.02H3BO36.2Na2MO42H2O0.25KI0.83鐵鹽母液鐵鹽母液 FeSO47H2O28.7Na2-EDTA37.3有機物母液有機物母液 煙酸煙酸(Vpp)0.5鹽酸吡哆醇鹽酸吡哆醇 0.5鹽酸硫胺素鹽酸硫胺素 0.1肌醇肌醇 100甘氨酸甘氨酸 2第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制1 1、MSMS培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：它是它是19621962年由年由Murashig

23、eMurashige和和SkoogSkoog為為培養(yǎng)煙草細胞而設(shè)計的。是目前應用最廣泛的培培養(yǎng)煙草細胞而設(shè)計的。是目前應用最廣泛的培養(yǎng)基。養(yǎng)基。 特點：特點：是無機鹽離子濃度較高，有高含量的是無機鹽離子濃度較高，有高含量的N N、K K，硝酸鹽量大，營養(yǎng)豐富。硝酸鹽量大，營養(yǎng)豐富。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制2 2、WhiteWhite培養(yǎng)基：培養(yǎng)基：19431943年由年由WhiteWhite為培養(yǎng)番茄根為培養(yǎng)番茄根尖而設(shè)計的。尖而設(shè)計的。特點：特點：無機鹽濃度較低，適于生根培養(yǎng)。無機鹽濃度較低，適于生根培養(yǎng)。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制(4)B(4)B5 5培養(yǎng)

24、基培養(yǎng)基: :是是19681968年由年由GalmborgGalmborg等為培養(yǎng)大豆等為培養(yǎng)大豆根細胞而設(shè)計的。根細胞而設(shè)計的。特點：特點：是含有較低的銨鹽，較高的硝酸鹽和鹽酸是含有較低的銨鹽，較高的硝酸鹽和鹽酸硫胺素。硫胺素。(5)KM8P(5)KM8P培養(yǎng)基培養(yǎng)基: :它是它是19741974年為原生質(zhì)體培養(yǎng)而年為原生質(zhì)體培養(yǎng)而設(shè)計的。設(shè)計的。特點：特點：是有機成分較復雜，它包括了所有的單糖是有機成分較復雜，它包括了所有的單糖和維生素。和維生素。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制 四、四、 培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的配制 （一）、母液（一）、母液(stock solution)的配制和

25、保存的配制和保存l所謂所謂母液母液是欲配制液的是欲配制液的濃縮液濃縮液。l意義意義: 保證各物質(zhì)成分的準確性保證各物質(zhì)成分的準確性 配制時的快速移取配制時的快速移取 便于低溫保藏。便于低溫保藏。l一般母液配成比所需濃度高一般母液配成比所需濃度高10-10010-100倍。倍。l母液配制時可分別配成母液配制時可分別配成大量元素、微量元素、鐵大量元素、微量元素、鐵鹽、有機物和激素類等鹽、有機物和激素類等。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制l單配法：單配法：將培養(yǎng)基配方中的各種成分分別配成一將培養(yǎng)基配方中的各種成分分別配成一定濃度的母液。一般用定濃度的母液。一般用mg/ml mg/ml 或或

26、mg/Lmg/L表示。表示。l混配法：混配法：將幾類營養(yǎng)成分按配方中的用量擴大一將幾類營養(yǎng)成分按配方中的用量擴大一定倍數(shù)稱量，分別溶解后再混合成母液。定倍數(shù)稱量，分別溶解后再混合成母液。l配制生長素類：配制生長素類：可先用少量可先用少量0.1N0.1N的的NaOHNaOH或或95%95%酒精助溶酒精助溶。濃度為：。濃度為：1-5mg1-5mgmlml。l配制細胞分裂素類：配制細胞分裂素類：一般先用少量一般先用少量0.5-1N0.5-1N鹽酸加鹽酸加熱溶解熱溶解。濃度為：。濃度為：1-5mg1-5mgmlml。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制 母液的配制方法：母液的配制方法： 培養(yǎng)基母

27、液的配制培養(yǎng)基母液的配制 母液名稱母液名稱 藥品藥品 名稱名稱 原配方量原配方量 (mg)/ L擴大倍數(shù)擴大倍數(shù) 稱取量稱取量 (mg) 母液體積母液體積 (ml) 移取量移取量 (ml)/L 大量元素母液大量元素母液 NH4NO3165010165001000100KNO319001019000CaCl2H2O44010 4400MgSO4 7H2O370103700KH2PO417010 1700微量元素母液微量元素母液 MnSO4H2O22.31002230100010ZnSO47H2O8.6100860CoCl6H2O0.0251002.5CuSO45H2O0.0210025H3BO3

28、6.2100620Na2MO42H2O0.25100 25KI0.83100 83鐵鹽母液鐵鹽母液 FeSO47H2O28.71002870100010Na2-EDTA37.31003730有機物母液有機物母液 煙酸煙酸(Vpp)0.5502550010鹽酸吡哆醇鹽酸吡哆醇 0.55025鹽酸硫胺素鹽酸硫胺素 0.1505肌醇肌醇 100505000甘氨酸甘氨酸 250100第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制（二）培養(yǎng)基的配制及其滅菌（二）培養(yǎng)基的配制及其滅菌l1.配制方法：配制方法：1 1、將母液按順序擺放、將母液按順序擺放2 2、取適量的蒸餾水、取適量的蒸餾水( (所需培養(yǎng)基量的所

29、需培養(yǎng)基量的2/3)2/3)入容器入容器3 3、按需要量依次取母液及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)、按需要量依次取母液及生長調(diào)節(jié)物質(zhì)4 4、加入蔗糖、加入蔗糖(30g/L)(30g/L)溶解溶解5 5、加瓊脂、加瓊脂(6-10g/L)(6-10g/L)，煮沸，煮沸，2-3min2-3min5 5、定容、定容6 6、調(diào)、調(diào)PHPH值值(pH=5.8)(pH=5.8)7 7、分裝培養(yǎng)瓶，封口、分裝培養(yǎng)瓶，封口8 8、高壓滅菌、高壓滅菌第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制l組織培養(yǎng)常見的滅菌方法l消毒消毒:是指殺死、消除或充分抑制部分微生物，是指殺死、消除或充分抑制部分微生物，使之不再發(fā)生危害作用。使之不再發(fā)生危害作用。l滅菌滅菌:是指用物理或化學的方法，殺死物體表是指用物理或化學的方法，殺死物體表面和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體，即把所有面和孔隙內(nèi)的一切微生物或生物體，即把所有生命的物質(zhì)全部殺死。生命的物質(zhì)全部殺死。第二節(jié)第二節(jié) 培養(yǎng)基及其配制培養(yǎng)基及其配制常用的滅菌方