中文銀納米簇檢測(cè)尿酸

1、基于銀納米簇?zé)晒忖绶z測(cè)尿酸摘要以DNA為模板的銀納米團(tuán)簇作為熒光探針，利用熒光。位超靈敏檢測(cè)生物底物尿酸。在這里，我們利用簡(jiǎn)單易行、無(wú)毒無(wú)害的方法合成熒光強(qiáng)度高且穩(wěn)定性好的水溶性C AgNCs,其平均粒徑約為2.5mn,且在565nm處有穩(wěn)定的熒光發(fā)射。檢測(cè)機(jī)理為，尿酸在尿酸氧化醐的催化作用下，被溶解在溶液中的氧氣所氧化，可產(chǎn)生過(guò)氧化氫，利用過(guò)氧化氫對(duì)C AgNCs的猝滅作用， 從而間接測(cè)定尿酸的含量。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明， 該C AgNCs在565nm左右有很強(qiáng)的熒光發(fā)射且熒光穩(wěn)定性好。 在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下， 尿酸濃度在0.05IOOJLM范圍內(nèi)時(shí)， 體系熒光強(qiáng)度與尿酸濃度的對(duì)數(shù)之間呈現(xiàn)良好的線

2、性關(guān)系， 其最低檢測(cè)濃度為50nM。該方法靈敏度高，選擇性好，線性范圍寬，檢測(cè)限低，并可被用于復(fù)雜環(huán)境中尿酸的測(cè)定。由此，該方法不但有希望廣泛應(yīng)用于有過(guò)氧化氫產(chǎn)生的氧化還原反應(yīng)底物的檢測(cè)；而且，由于該納米傳感器穩(wěn)定的熒光發(fā)射及良好的生物相容性，如若對(duì)其進(jìn)一步修飾，將有助于其在體內(nèi)體外分析中得到廣泛應(yīng)用。關(guān)鍵字：CAgNCs；HQ?檢測(cè)；尿酸檢測(cè)：銀納米簇猝火Poly(cytosine)-templatedsilvernanoclusters(C-AgNCs)asafluorescentprobe,wereusedtopresentafluorescenceturn-offassayforbio

3、logicalsubstrates,whichweremoreamenabletoultrasensitiveassayofuncacidHere,byasimpleandnontoxicmethod,tliewatersolubleC-AgNCsweresynthesizedwithanaveragesizeof2.5nmandastableemissionat555nmThesensingmechanismwasmainlybasedonthenotion,thatwas.theoxidationofuncacidstimulatedbyuncaseandcoupledwiththefor

4、mationofH?Oj,bywhicheffectivefluorescencequenchingofC-AgNCsUnderoptimizedconditions,detectionofuncacidhasalinearconcentrationrangeof0.05to50PlMwithadetectableminimumconcentrationof0Therefore.C-AgNCsasfluorescentprobecandetectsubstratesbasedonH?。?一generatingredoxreactionandisfurthermodifiedforanalyti

5、calapplicationsinvivoduetoitssuperioropticalpropertiesandgoodbiocompatibilityKeywords:Keywords:C-AgNCs.Fluorescencequenching;HOj；Uncacid2.1 前言尿酸（2,6,8三羥基噪吟，UA）和其他的羥基噪吟是人體內(nèi)嗓吟代謝的主要最終產(chǎn)物。尿酸是由黃噤吟和次黃喋吟在黃噪吟氧化醐催化作用下轉(zhuǎn)換生成的。人體內(nèi)血清中尿酸的正常水平范圍為0.12-0.45I11M,尿排泄中約為2mMD。體液中尿酸濃度的變化可能會(huì)導(dǎo)致許多疾病和病理障礙包括痛風(fēng)、關(guān)節(jié)炎、腎臟疾病叫心血管疾病叫神經(jīng)

6、系統(tǒng)疾病口、高血壓、高尿酸血癥、Lesch Nyan綜合癥等。以子癇前期為例，子癇前期是一種發(fā)生在懷孕期間的高血壓疾病，是孕產(chǎn)婦死亡的主要原因固。目前全球大約1075%的孕產(chǎn)婦死于子癇前期。如果子癇前期出現(xiàn)在懷孕的中期或晚期，那么除了早產(chǎn)嬰兒將沒(méi)有其他治療該疾病的方法。到目前為上，源于子癇前期的兩種癥狀（高血壓和尿液中蛋白質(zhì)含量高），該疾病的診斷主要是根據(jù)血壓和尿蛋白測(cè)試叫。然而，通常只有在子癇前期晚期的診斷中才使用這些測(cè)試。近年來(lái)，為了降低孕產(chǎn)婦和嬰兒死亡率，科研人員致力于發(fā)展子癇前期早期診斷的新方法研究證明,尿酸是尿液和血清樣本中一種重要的生物標(biāo)志物，可能是妊娠高血壓（子癇前期）早期測(cè)試的

7、關(guān)鍵口3習(xí)。血清中尿酸濃度約為0.4mM時(shí)表明病人患有輕度或中度的高血壓和蛋白尿，尿酸的濃度大于0.4mM時(shí)病人患有重度子癇前期06】。因此，尿酸水平是診斷和治療這些疾病的一個(gè)重要的分子標(biāo)志物，尤其在檢驗(yàn)科能夠擁有一套簡(jiǎn)單可靠的方法用于定期檢測(cè)尿酸是非常必需的。目前，各種技術(shù)被應(yīng)用于生物環(huán)境中尿素的檢測(cè)，包括電化學(xué)方法2。1,化學(xué)發(fā)光法”切,熒光法曲，色譜分析法由劃,等。在這些方法中，化學(xué)發(fā)光法易受顏色干擾；色譜法操作麻煩、費(fèi)時(shí)耗力；電化學(xué)方法因其高靈敏度，低成本，快速的響應(yīng),兼容性小型化，低人力需求，兼容精密加工技術(shù)等優(yōu)點(diǎn)而得到極大的關(guān)注。各種電化學(xué)方法如聚合物修飾電極田3門(mén),化學(xué)修飾電極卬

8、叫,能修飾電極34,和電化學(xué)預(yù)處理即均可被用來(lái)檢測(cè)UA。 然而， 監(jiān)測(cè)尿酸的主要障礙是其他電活性成分的干擾， 如抗壞血酸（AA） ,其氧化電勢(shì)在各種電極上均與尿酸一樣。此外，修飾電極經(jīng)常存在吸附、污染等干擾。因此，建立一種靈敏度高、抗干擾能力強(qiáng)，簡(jiǎn)單靈便的方法，是尿酸檢測(cè)的當(dāng)務(wù)之急。為了檢測(cè)尿酸含量， 尿酸傳感器得到廣泛研究， 尤其是在納米技術(shù)領(lǐng)域。 貴金屬 （如All,Ag,Pt）納米簇由于其獨(dú)特的物理和光學(xué)性質(zhì)常常被用來(lái)構(gòu)建生物傳感器。金屬納米簇?fù)碛泻芏鄡?yōu)點(diǎn)，例如合成簡(jiǎn)單方便，亞納米尺寸，光穩(wěn)定性好，大的Stokes位移，熒光發(fā)射波長(zhǎng)可調(diào)和低毒性等。在這些金屬納米簇中，AgNCs在熒光生物

9、傳感器方面的應(yīng)用最為廣泛。至今，DNA,硫醇類(lèi)，聚合物，多肽類(lèi)，蛋白質(zhì)類(lèi)等多種支撐材料被用來(lái)合成銀納米簇。其中，由于DNA單鏈中的胞嗜噬與銀離子之間有強(qiáng)的親和力， 這使其成為合成銀納米簇的優(yōu)越模板，并得到了大量關(guān)注。通過(guò)DNA堿基序列、鏈的長(zhǎng)度或鏈的二級(jí)結(jié)構(gòu)的改變，就可得到熒光發(fā)射波長(zhǎng)從紫外到近紅外范闈的C-AgNCSo據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，CAgNCs已經(jīng)廣泛用于金屬離子的檢測(cè)，硫醇類(lèi)分子的檢測(cè)，DNA/RNA的檢測(cè)，蛋白質(zhì)的檢測(cè)，活細(xì)胞表面標(biāo)記，細(xì)胞內(nèi)染色等。鑒于此，在本文中，我們首次建立以DNA AgNCs為熒光探針檢測(cè)尿酸含量的光學(xué)生物傳感器。 我們利用硼氫化鈉為還原劑， 以聚C堿基核苜酸連為模

10、板， 合成了無(wú)毒害，熒光強(qiáng)度強(qiáng)，光穩(wěn)定性好的水溶性銀納米簇?；谶^(guò)氧化氫對(duì)銀納米簇的猝滅作用，得以簡(jiǎn)便快速地檢測(cè)尿酸。此外，該方法靈敏度高,選擇性好，檢測(cè)限低（0.05gM）,且在較寬濃度范圍內(nèi)有良好線性，并可用于復(fù)雜體系中尿酸的測(cè)定。2.2 實(shí)驗(yàn)部分2.1.1化學(xué)試劑與儀器實(shí)驗(yàn)中所用到的核昔酸鏈（5-TTAACCCCCCCCCCCCTTAA-3f） ,由寶生物工程 （中國(guó)，大連）有限公司合成。尿酸氧化酶購(gòu)白北京百靈威科技有限公司（中國(guó)，北京）。尿酸購(gòu)自西格瑪奧德里奇公司 （中國(guó)， 上海） 。 硝酸銀、 雙氧水、 磷酸氫二鈉（Na2Hp0,1240）、磷酸二氫鈉（NaHzPO.-240）、尿酸

11、、葡萄糖、甘氨酸、L-組氨酸、抗壞血酸、尿素等試劑均為分析純，使用前未經(jīng)過(guò)任何處理。測(cè)定中使用的是自制的20mMPB緩沖液（pH7.0,20mMNaH2PoN電HPO。實(shí)驗(yàn)用水來(lái)自Direct-PurePlus超純水及R0純水組合型一體機(jī)純水儀，電阻率為18.2MQo實(shí)驗(yàn)所用緩沖溶液和超純水均需滅菌處理。pH調(diào)節(jié)是依靠pH計(jì)(PHS-3C)來(lái)完成。 反應(yīng)溫度控制通過(guò)微量恒溫器(HW-8C)實(shí)現(xiàn)。所有的熒光光譜實(shí)驗(yàn)，均在FL-7000熒光光譜儀(H立，H本)上完成對(duì)樣品的熒光測(cè)量及分析；固定激發(fā)波長(zhǎng)為490nm,在510nm至650nm范圍內(nèi)收集熒光光譜；激發(fā)和發(fā)射狹縫寬度均為5.0nm：掃描速

12、度為1200nm/min,響應(yīng)時(shí)間2.Os,PMT電壓700Vo2.1.2 GAgNCs的合成本實(shí)驗(yàn)中C-AgNCs的合成方法如下：首先配制100mM的AgNG儲(chǔ)備液，滅菌后于4c避光存放，使用時(shí)稀釋成所需濃度使用。DNA凍干粉先于8000rpm離心5min,再用20mMPB緩沖液(pH7.0)溶解使其濃度為100pM。 將0.6|JL10mMAgNa溶液和IOJJLlOOpM單鏈DNA模板加入至86.4PL20mMPB緩沖液(pH7.0)中，充分混勻，在避光條件下冰中孵育30min。 然后迅速加入3口L2mM新制的NaBH溶液,劇烈震蕩1min,于暗處在4c下靜置5h后，即可進(jìn)行熒光測(cè)量。D

13、NA、硼氫化鈉、硝酸銀的最終濃度分別為10pM,60pM和60pM。2.1.3過(guò)氧化氫的猝滅作用考察將30%的過(guò)氧化氫的原液用20mMPB緩沖液稀(pH；.0)釋至3%的過(guò)氧,化氫作為儲(chǔ)備液(置于4c避光保存)，不同濃度的過(guò)氧化氫溶液由該儲(chǔ)備液稀釋得到。由丁過(guò)氧化氫易分解，故需根據(jù)情況重新配制過(guò)氧化氫溶液。將50HL不同濃度的過(guò)氧化氫溶液加入到50pL上述制備好的C-AgNCs中， 避光條件下于37溫浴30min后， 進(jìn)行熒光測(cè)定。2.1.4尿酸含量的檢測(cè)尿酸儲(chǔ)備液是濃度為41nM的水溶液， 使用時(shí)先稀釋成ImM,然后再根據(jù)需要稀釋成不同濃度的尿酸溶液。尿酸氧化酹(10unit/mg)溶解在P

14、B緩沖液(pH7.0)中配制成100.g/ml的尿酸氧化酶溶液，置于4避光保存保存?zhèn)溆?。?0pL不同濃度的尿酸溶液和50pL2.5pg/ml的尿酸氧化酶溶液混合,在避光條件下37中皆育20min,然后將這100pL混合液加入到100pL上述制備的銀納米團(tuán)簇溶液中，于暗處在37下孵育30min,進(jìn)行熒光測(cè)定。2.1.5復(fù)雜環(huán)境中尿酸的檢測(cè)人血液樣品是從當(dāng)?shù)蒯t(yī)院所收集到的健康自愿者血液樣品。先將血液樣品于12000rpm離心lOmin,并靜置2h以上，得到上層血清液。再用超純水將上述所得血清稀釋不同的倍數(shù)， 稀釋后的血清用于后續(xù)尿酸的分析測(cè)定。 其測(cè)定條件及實(shí)驗(yàn)過(guò)程同上。2.3 結(jié)果與討論417

15、C-AgNCs熒光傳感器原理D、AAgCAg-圖31基于氏。2對(duì)C-AgNCs熒光的猝滅檢測(cè)尿酸的基本原理示意圖基于H3O2對(duì)C-AgNCs熒光的猝滅，我們建立了一種新的檢測(cè)尿酸含量的熒光分析方法，作用原理如圖3.1所示。根據(jù)尿酸的檢測(cè)過(guò)程一尿酸在尿酸氧化酶的催化作用下，被溶解在溶液中的氧氣所氧化，產(chǎn)生過(guò)氧化氫：過(guò)氧化氫可以有效猝滅銀納米團(tuán)簇的熒光。由此，過(guò)氧化氫作為中介物，我們能夠構(gòu)建一種尿酸生物傳感器以實(shí)現(xiàn)其定量檢測(cè)。450EM(nm)620圖321以DNA為模板合成的AgNCs的三維熒光光譜。 實(shí)驗(yàn)中所用的DNA序列為(STTAACCCCCCCCCCCCTTAA-SOo最大激發(fā)波長(zhǎng)為48

16、8nm,最大發(fā)射波長(zhǎng)為556nm,熒光強(qiáng)度為1890o圖3.2.2C-AgNCs的TEM圖和粒徑分布圖通過(guò)快速簡(jiǎn)便的方法，我們合成出高熒光強(qiáng)度的水溶性的C-AgNCs。我們對(duì)合成的C AgNCs進(jìn)行了熒光性質(zhì)的考察，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。結(jié)果表明以該DNA分子為模板合成的銀納米簇，其熒光最大激發(fā)波長(zhǎng)在488nm左右，最大發(fā)射波長(zhǎng)在566um左右，并且熒光強(qiáng)度很強(qiáng)。此外，利用透射電子顯微鏡TEM和動(dòng)態(tài)光散射粒度儀DLS,我們對(duì)該DNA分子為模板合成的銀納米簇的結(jié)構(gòu)大小進(jìn)行了表征，如圖2所示，可以看出C-AgNCs粒子為球形，直徑約為2.5mn,粒徑主要分布在2.5nm左右。Wavelength(i

17、un)Wavelength(iun)圖331C-AgNCs的熒光光譜圖（曲線I和H）。其中，曲線I為無(wú)H2O2條件下的光譜曲線,曲線H為濃度為lmMHQ5條件下的光譜曲線。圖332PH對(duì)C-AgNCs的熒光的影響。（a）不存在H3O3條件下，pH對(duì)C-AgNCs的熒光的影響（b）存在H2O2條件下（100處 QpH對(duì)C-AgNCs的熒光的影響。首先，我們考察了田。2對(duì)C AgNCs的熒光響應(yīng),實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3.3.1所示。當(dāng)我們向合成的銀納米簇中加入ImMH2O2后，銀納米簇在565nm處的熒光強(qiáng)度顯著下降（曲線|）,該實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示表明，以DNA為模板合成的銀納米簇有作為熒光探針來(lái)7007000

18、-0-650650(=P)X1ISU9JUI550550600600檢測(cè)過(guò)氧化氫的可行性， 進(jìn)而也存在用該方法檢測(cè)尿酸的可能性。 為了能夠用C AgNCs進(jìn)行高靈敏度檢測(cè)H2O2,我們對(duì)反應(yīng)體系的pH進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。我們分別檢測(cè)了不同pH值下，過(guò)氧化氫存在（lOOgM）和不存在的條件下，CAgNCs的熒光強(qiáng)度，如圖3.3.2所示。由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，在pH從4.0到8.0范圍內(nèi)（我們選取4.0,5.0,6.0,7.0,8.0五個(gè)pH值）,無(wú)論體系中是否存在H2O2，C AgNCs在pH值為7時(shí)熒光強(qiáng)度達(dá)到最大，并且在pH范圍在67時(shí)，熒光猝滅效率最大，故而我們選擇pH7.0作為最優(yōu)值。因此，接下來(lái)

19、的實(shí)驗(yàn)均在該pH條件下進(jìn)行。2.3.4過(guò)氧化氫濃度對(duì)銀簇?zé)晒鈴?qiáng)度的影響(_1IOAWS_3UILog(ConeentrationofH,OLog(ConeentrationofH,O2 2/jiM)/jiM)圖34(A)H2O2濃度對(duì)C-AgNCs熒光強(qiáng)度的影響。馬。2濃度(從“ImM)：0,5,10,25,50,100,200,300,400,500,1000處4。(B)圖為校準(zhǔn)曲線4。2濃度在5-3001范困內(nèi)，濃度的對(duì)數(shù)與C-AgNCs熒光強(qiáng)度的線性關(guān)系。在最優(yōu)pH下，我們用C AgNCS探針檢測(cè)溶液中不同濃度的過(guò)氧化氫。與過(guò)氧化氫孵育30min后，C-AgNCs的熒光強(qiáng)度隨H2O3濃度

20、的升高而降低(如圖3.4A)o圖3.4(B)顯示，為。?濃度在5300pM范圍內(nèi)時(shí)，熒光強(qiáng)度與過(guò)氧化氫濃度的對(duì)數(shù)之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系， 對(duì)應(yīng)的線性回歸方程為F=1307.9863-503.87391ogC(R2=0.99474),式中F為體系中C-AgNCs的熒光強(qiáng)度，C為H?。?的濃度。結(jié)果證明C AgNCs對(duì)HiCh的熒光響應(yīng)非常靈敏。根據(jù)空白信號(hào)的三倍標(biāo)準(zhǔn)偏差規(guī)則，其檢測(cè)限為0.67gM。與之前的用熒光法檢測(cè)過(guò)氧化氫的報(bào)道閩相比，該方法效果相當(dāng)。23.5實(shí)驗(yàn)條件的優(yōu)化(nSAJISl_yl_I.100-.100-0.60.81.00.60.81.0121.41.61.41.616162

21、.02.02224242.62.6Teinperature(eC)Teinperature(eC)圖3.5(a)前反應(yīng)溫度時(shí)體系分析性能的影響。尿酸和尿酸氧化酶的濃度分別為150處I和25ng/mlo(b)尿酸氧化酶濃度對(duì)體系根系性能的影響。尿酸濃度為250心心在測(cè)定尿酸的含量之前，我們對(duì)尿酸氧化的催化尿酸的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化。首先，我們考察了酶反應(yīng)體系溫度在3080c范圍內(nèi)經(jīng)尿酸氧化酶作用后的產(chǎn)物對(duì)C AgNCs熒光強(qiáng)度的影響(如圖3.5a所示)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在其他條件一定時(shí)，當(dāng)酶反應(yīng)體系的溫度在30Y0C范圍內(nèi)變化時(shí)，經(jīng)尿酸氧化酶作用后的產(chǎn)物對(duì)C AgNCs的熒光強(qiáng)度影響程度相當(dāng)，變化幅

22、度不大，而當(dāng)酶反應(yīng)體系的溫度升高至70時(shí)，C AgNCs的熒(IrGAfsuyuI(WIOAJISUawI60708060708000250.51,0102.55.000250.51,0102.55.0Uricaseconcentrationg/mL)Uricaseconcentrationg/mL)光強(qiáng)度很強(qiáng)，猝滅效果不明顯，這表明在該溫度下，尿酸氧化酶失活變性，不具備對(duì)尿酸的催化作用，故而不能引發(fā)猝滅反應(yīng)。由此，在本章實(shí)驗(yàn)中，我們選擇人體正常生理溫度37c作為實(shí)驗(yàn)中酶反應(yīng)體系的溫度。此外，我們也對(duì)尿酸氧化酶的濃度進(jìn)行了優(yōu)化（如圖3.5b所示），不難看出，隨著尿酸氧化酣濃度的增大，能夠催化產(chǎn)

23、生更多的為5,使得C-AgNCs的熒光強(qiáng)度逐漸下降， 當(dāng)尿酸氧化酶濃度增加至2.5|ig/ml時(shí)，CAgNCs的熒光強(qiáng)度達(dá)到最小值，因此，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中，尿酸銃化醐的濃度一直為ZJjig/ml。2.3.6尿酸的定量檢測(cè)1400140012001200- -500500520520Wavelength(nin)Wavelength(nin)64064066966920040060080010002004006008001000ConcentrationofUAQiM)ConcentrationofUAQiM)1400-1400-1200-1200-1000-1000-800-800-600-600

24、-400-400-?- -2-10122-1012Log(ConcentrationofUA/jiM)Log(ConcentrationofUA/jiM)圖36(A)不同濃度尿酸對(duì)體系熒光強(qiáng)度的影響:尿酸濃度從上到下分別為0,005,02,05,25,5,25,50,75,100,150,200,250,300,400,500,1000處九(B)該傳感器對(duì)尿酸濃度的動(dòng)力學(xué)響應(yīng)范圍。(C)為該傳感器檢測(cè)尿酸的校準(zhǔn)曲線,尿酸濃度在00550處4和50700處I范圍內(nèi)，尿酸濃度的對(duì)數(shù)與C-AgNCs熒光強(qiáng)度的線性關(guān)系。在最優(yōu)實(shí)驗(yàn)條件下，我們用C-AgNCs探針測(cè)定了不同濃度尿酸對(duì)其熒光強(qiáng)度的影響。在

25、尿酸氧化酶濃度為2.51ig/mL時(shí)，C-AgNCs的熒光強(qiáng)度隨尿酸濃度的升高(Irloulsuolul而降低(如圖3.6(A,B)。圖3.6(。顯示，尿酸濃度在0.055011M和50400IiM范圍內(nèi)時(shí)， 熒光強(qiáng)度與尿酸濃度的對(duì)數(shù)之間呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系， 其最低檢測(cè)濃度為0.0511M,對(duì)應(yīng)的線性回歸方程分別為：F=1028.5429-166.6836logC,(R2=09963)(2)F=1873.8153-670.8776logC,(R2=09971)(3)式中F為體系中C-AgNCs的熒光強(qiáng)度，C為尿酸的濃度。結(jié)果證明C-AgNCs對(duì)尿酸的熒光響應(yīng)非常靈敏。 與其他檢測(cè)尿酸的文獻(xiàn)報(bào)道

26、相比(如表1所示),該方法有明顯優(yōu)勢(shì)，比較滿意。Table1AnalysisofuncaadbydifferentmethodsMethodSystemDetectionlimit(M)ReferenceEC-SERSAu/Agsubstrat10X10-410X10-437UV-spectrophotometryTCNE5.7X105.7X106 638ElectrochemistryDPD-Auelectrode50X10-50X10-7 739ElectrochemistryCNT/NanoZnO148X10148X106 640EHectrochemistryFc-GO1oxio1ox

27、ioJ J41ElectrochemistryFe304Au-S-Fc/GS-chitosan/GCE2OXIO2OXIO7 742FluorometryDNA-AgNCs50X1050X108 8Thiswork23.7選擇性考察1000-圖3.7該分析方法選擇性考察。圖為C-AgNCs在尿酸和干擾物存在時(shí)的熒光強(qiáng)度，各干擾物濃度均為500處1,尿酸濃度為250pM。我們選取了抗壞血酸（維生素C）、尿素、甘氨酸、L.組氨酸等幾種血液中常見(jiàn)組分作為干擾物，對(duì)該方法的選擇性進(jìn)行了考察，各干擾物濃度均為500皿，測(cè)定過(guò)程和測(cè)定條件均與測(cè)定尿酸時(shí)相同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖3.7,結(jié)果表明，抗壞血酸（維生素C

28、）、尿素、葡萄糖、甘氨酸均對(duì)銀納米簇產(chǎn)生一定的猝滅作用，L組氨酸對(duì)銀納米簇?zé)晒猱a(chǎn)生一定的增強(qiáng)作用，但與尿酸相比，這些干擾物所引起的銀納米簇?zé)晒鈴?qiáng)度的變化程度可忽略不計(jì)，由此表明該方法具有良好的選擇性。2.3.8復(fù)雜體系中尿酸的檢測(cè)為了評(píng)定該方法的適用性，我們將其應(yīng)用于復(fù)雜環(huán)境中尿酸含量的分析。通過(guò)復(fù)雜體系加標(biāo)回收率的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)，我們?cè)u(píng)估了該方法的準(zhǔn)確度（數(shù)據(jù)如表2）。結(jié)果顯示，用該實(shí)驗(yàn)方法所得檢測(cè)數(shù)據(jù)與已知血清稀釋液中尿酸含量十分接近。因此， 我們建立的這種用于尿酸分析的生物傳感器可以用于復(fù)雜體系中尿酸含量,并具有檢測(cè)實(shí)際血液樣品中尿酸含量以及應(yīng)用于臨床血樣的可能。Table2Thedetect

29、ionofuncacidcontentinthecomplexsystemsamplediluted(mM)Spiked(mM)found(mM)(mean-SD,Recovery(%)Onginal(mM)1 114XKT14XKT1 116X1016X103.12X10IID0503.12X10IID05010751075014014*2.7X102.7X1023X1023X102 23 35.03x10400905.03x1040090101310130270273 33.5X103.5X1015X10?15X10?496X10MD100496X10MD10097.397.3035035

30、a(Meanvalueofthreedetermination.)b(Standarddeviation)2.4 小結(jié)在這一章中，我們利用銀納米簇簡(jiǎn)單環(huán)保的合成方法和優(yōu)越的光學(xué)性能，構(gòu)建了一1Dryhurst,GElectrochemistryofBiologicalMolecules,AcademicPressNewYork,1977.2Ames,RB.;Cathcart.R.;Schwiers,EiHochstein,PProc.Natl.AcadSci.USA1981.78,6858-68613Chu.Q.C;Lin,M;Geng,CH,Ye,JNChromatographia2007,

31、65,179-184種新的檢測(cè)過(guò)氧化氫和尿酸的平臺(tái)。 該光學(xué)生物傳感器檢測(cè)尿酸的原理是,尿酸在尿酸氧化酶的催化作用下，被溶解在水溶液中的氧氣所氧化，可產(chǎn)生過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫將C-AgNCs中的銀原子氧,化，銀納米簇結(jié)構(gòu)遭到破壞而失去相應(yīng)的光學(xué)性能，從而產(chǎn)生熒光猝滅的現(xiàn)象。結(jié)果表明該方法有較好的選擇性和較高的靈敏度高，并且有較寬的線性范圍核較低的檢測(cè)限，并可被用于復(fù)雜環(huán)境中尿酸的測(cè)定。由此，該方法不但有希望廣泛應(yīng)用于那些有過(guò)氧化氫產(chǎn)生的反應(yīng)底物的檢測(cè)：而且，由于該納米傳感器穩(wěn)定的熒光發(fā)射及良好的生物相容性，如若對(duì)其進(jìn)一步修飾，將有助于其在體內(nèi)體外分析中得到廣泛應(yīng)用。參考文獻(xiàn)Wortmann,RL

32、DisordersofpunnepynmidinemetabolismInHarrisonsPrinciplesofInteimalMedicine,15thed.;Braunwald,E,Fauci,A.S.,Kasper,DL.,Hauser,S.L,Longo,DL.,Jameson,J.L,Eds,McGraw-Hill:NewYork,2001,pp2268-2273Khosla,UM.;Zharikov,S.;Finch.JL;Nakagawa,T.;Roncal.C.;Mu.W,Krotova,K;Block,E.R;Prabhakar,S,Johnson,RJKidneyInt

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