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1、鹽酸環(huán)丙沙星注射液的高效液相色譜測(cè)定-    核心提示:鹽酸環(huán)丙沙星注射液的高效液相色譜測(cè)定摘要:建立測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星注射液中鹽酸環(huán)丙沙星含量的高效液相色譜檢測(cè)方法。色譜柱為Gemini C18110A( 250 mm×4.60 mm,5 m),流動(dòng)相.鹽酸環(huán)丙沙星注射液的高效液相色譜測(cè)定摘要:建立測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星注射液中鹽酸環(huán)丙沙星含量的高效液相色譜檢測(cè)方法。色譜柱為Gemini C18110A( 250 mm×4.60 mm,5 m),流動(dòng)相為0.025 mol/L磷酸溶液(用三乙胺調(diào)pH至3.0±0.1)-乙腈(752

2、5),檢測(cè)波長(zhǎng)277 nm,流速1.0 mL/min,進(jìn)樣量10 L。在12.5 g/mL200 g/mL濃度范圍內(nèi),鹽酸環(huán)丙沙星的峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.999 4(n5),平均回收率為99.58%。該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏,可用于測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星注射液的含量。關(guān)鍵詞:鹽酸環(huán)丙沙星;注射液;高效液相色譜法;含量測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星屬于氟喹諾酮類廣譜抗菌藥,在獸醫(yī)臨床上,用于敏感細(xì)菌和支原體所致家畜、禽類及小動(dòng)物的各種感染性疾病。此藥具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)、吸收良好、體內(nèi)分布廣泛、抗菌作用獨(dú)特、無交叉耐藥性等特點(diǎn)1-2,醫(yī)學(xué)上已廣泛應(yīng)用3-5。鹽酸環(huán)丙沙星注射液在獸藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)2

3、003年版已有收載,該標(biāo)準(zhǔn)采用紫外分光光度法測(cè)定含量6。此法專屬性不強(qiáng),準(zhǔn)確性不及高效液相色譜法,作為生產(chǎn)過程中中間產(chǎn)品的質(zhì)量控制方法較適合。筆者采用高效液相色譜法測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星注射液的含量6-10,經(jīng)與紫外分光光度法11比較12-13,結(jié)果基本一致,而且準(zhǔn)確性高,專屬性和可信度強(qiáng)。1材料與方法1.1材料Agilent 1200型高效液相色譜儀,CP225D型電子天平,UV-2450型紫外可見分光光度計(jì),pHS-3C型精密pH計(jì)。鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)照品,批號(hào)為H010105,含量100.0%,中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所生產(chǎn);鹽酸環(huán)丙沙星(原料),批號(hào)為HB070945,浙江新華制藥有限公司生產(chǎn);鹽酸環(huán)丙

4、沙星注射液,規(guī)格為10 mL含0.2 g,批號(hào)為20080601,20080602,20080603,廣東大華農(nóng)動(dòng)物保健品股份有限公司生產(chǎn);磷酸、鹽酸、三乙胺為分析純;乙腈為色譜純。1.2方法1.2.1試劑的配備1.2.1.1鹽酸溶液(0.1 mol/L)取鹽酸9 mL,加水至1 000 mL,搖勻,備用。1.2.1.2磷酸溶液(0.025 mol/L)取磷酸1.71 mL,加水至1 000 mL,搖勻,備用。1.2.2色譜條件色譜柱:填料Gemini 5 m C18110A,尺寸:250 mm×4.60 mm 5 micron;流動(dòng)相:0.025mol/L磷酸溶液(用三乙胺調(diào)pH至

5、3.0±0.1)-乙腈(7525);檢測(cè)波長(zhǎng)277 nm;流速1.0 mL/min;進(jìn)樣量10 L。1.2.3繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線取鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)照品0.012 5、0.025、0.05、0.1、0.2 g精密稱量,分別置100 mL容量瓶中,用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度,搖勻;各精密量取5 mL,置50 mL容量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,制成濃度分別為12.5、25、50、100、200 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液,參照高效液相色譜法14測(cè)定。1.2.4系統(tǒng)適用性精密量取鹽酸環(huán)丙沙星注射液(批號(hào)20080601)5 mL,按1.2.3方法稀釋并測(cè)定。1.2.5穩(wěn)定性試驗(yàn)精密量取鹽酸環(huán)丙沙星注射液(批號(hào)

6、20080601)5 mL,置100 mL容量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻;精密量取5 mL,置50 mL容量瓶中,加流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,放置0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 h,按1.2.3方法測(cè)定。1.2.6空白試驗(yàn)按處方比例稱取輔料適量,制備不含鹽酸環(huán)丙沙星的空白樣品,按1.2.3方法測(cè)定。1.2.7回收試驗(yàn)取在105 干燥至恒重的鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)照品50、100、200 mg各3份,精密稱量,分別置于100 mL容量瓶中,按處方量加入其他輔料,加溶劑溶解,搖勻,制成小樣,分別精密量取5 mL,置50 mL容量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻;按1.2.3方法測(cè)定峰面積。1.

7、2.8精密度試驗(yàn)取在105 干燥至恒重的鹽酸環(huán)丙沙星原料藥(批號(hào)HB070945)3份,各約100 mg,精密稱量,分別置100 mL容量瓶中,按處方量加入其他輔料,加溶劑溶解,搖勻,制成3份注射液小樣,分別精密量取5 mL,置50 mL容量瓶中,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,作為測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星注射液精密度試驗(yàn)用溶液,另取鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)照品適量,按1.2.3項(xiàng)下方法測(cè)定,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。1.2.9高效液相色譜法與紫外分光光度法測(cè)定鹽酸環(huán)丙沙星注射液含量的比較。1.2.9.1高效液相色譜法取批號(hào)為20080601、20080602、20080603的鹽酸環(huán)丙沙星注射液,精密量取5 mL,按1

8、.2.3方法稀釋并測(cè)定,記錄色譜圖。另取鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)照品適量,同法測(cè)定,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算含量。1.2.9.2紫外分光光度法參照文獻(xiàn)6,取批號(hào)20080601,20080602,20080603的鹽酸環(huán)丙沙星注射液,精密量取5 mL,分別置200 mL容量瓶中,加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,精密量取2 mL,置200 mL容量瓶中,加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,按照紫外分光光度法,在277 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,按環(huán)丙沙星(C17H18FN3O3)的吸收系數(shù)為1 266.1計(jì)算出含量。1.2.9.3紫外分光光度法參照文獻(xiàn)13,取批號(hào)20080601,2008

9、0602,20080603的鹽酸環(huán)丙沙星注射液,精密量取5 mL,分別置200 mL容量瓶中,加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻,精密量取2 mL,置200 mL容量瓶中,加0.1 mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度,搖勻。另取鹽酸環(huán)丙沙星對(duì)照品適量,照紫外分光光度法,在277 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度,并計(jì)算出含量13。2結(jié)果2.1標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見表1。以峰面積(A)為縱坐標(biāo),濃度(C)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A63.765C134.15(r0.999 4,n5,C的單位為g/mL)。結(jié)果表明,在12.5 g/mL200 g/mL的濃度范圍內(nèi),濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系(圖1

10、)。     表1標(biāo)準(zhǔn)溶液的峰面積  Table 1The peak-area of standard solution 濃度/(g·mL1) Concentration12.52550100200峰面積AUC844.11 683.03 363.26 692.112 797.4圖1鹽酸環(huán)丙沙星標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1The standard curve ofciprofloxacin hydrochloride2.2系統(tǒng)適用性結(jié)果連續(xù)進(jìn)樣6次,所得峰面積的RSD為0.14%。按鹽酸環(huán)丙沙星峰計(jì)算,理論板數(shù)為10 922,保留時(shí)間約為3.5

11、min。2.3穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果從表2可見,鹽酸環(huán)丙沙星注射液在2.5 h內(nèi)峰面積基本保持不變,穩(wěn)定性良好。表2鹽酸環(huán)丙沙星注射液的穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果Table 2The stabilitytest of ciprofloxacin hydrochloride injection時(shí)間/minTime00.51.01.52.02.5峰面積AUC6 143.46 142.46 156.66 163.26 159.96 149.92.4空白試驗(yàn)結(jié)果 結(jié)果無吸收,不干擾測(cè)定,符合要求。2.5回收試驗(yàn)結(jié)果按下式計(jì)算含量,并求出回收率,平均回收率為99.58%,RSD為0.38%,結(jié)果見表3。式中A為測(cè)得的峰面積

12、,N為稀釋倍數(shù),V為量取樣品的體積(mL),P為樣品規(guī)格(10 mL0.2 g);134.15為標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距,15.68×103為標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的倒數(shù)。含量%=15.68×10-3×(A-134.15)×NV×P表3鹽酸環(huán)丙沙星注射液回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 3The recovery rate of ciprofloxacin hydrochloride injection序號(hào) No.稱樣量/mg Added quantity測(cè)得量/mg Determined quantity回收率/% Recovery rate平均回收率/% Averag

13、erecovery rate變異系數(shù)/% RSD150.0349.6199.16250.0649.9899.84350.0249.6299.204100.08100.0499.965100.0199.5399.5299.580.386100.05100.10100.057200.07198.7599.348200.11200.0199.959200.05198.3999.17結(jié)果表明,鹽酸環(huán)丙沙星注射液回收率試驗(yàn)符合要求。 2.6精密度試驗(yàn)結(jié)果鹽酸環(huán)丙沙星注射液含量的RSD為0.18%,結(jié)果見表4。結(jié)果表明,本法具有良好的精密度。2.7幾種測(cè)定方法結(jié)果的比較結(jié)果見表5。表4精密度試驗(yàn)結(jié)果Tab

14、le 4Precision test of ciprofloxacin hydrochloride injection測(cè)定次數(shù)Test times123456含量/%Content100.15100.2199.8799.7399.94100.01變異系數(shù)RSD/%0.18表5測(cè)得鹽酸環(huán)丙沙星注射液中鹽酸環(huán)丙沙星的含量Table 5Determination of ciprofloxacin hydrochloride content ininjection批號(hào) Lot number含量/%Content高效液相色譜法HPLC紫外分光光度法1UV1紫外分光光度法2UV22008060199.9599.9299.8920080602100.1299.9699.942008060399.9199.98100.05結(jié)果表明,高效液相色譜法與紫

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