醫(yī)學課件血凝和血凝抑制試驗

1、一、試驗?zāi)康难囼灒旱味ú《镜难r(病毒的凝集價)，采用一定的病毒量，通常采用4個血凝單位。血凝抑制試驗： 應(yīng)用標準病毒液測定血清中的相應(yīng)抗體或應(yīng)用特異性抗體鑒定新分離的血凝性病毒檢測雞群有無病毒感染和監(jiān)測雞的免疫狀態(tài)。掌握血凝和血凝抑制試驗的原理和操作方法，能夠正確判定試驗結(jié)果二、血凝試驗(hemagglutination test) 原理 病毒粒子上的血凝素蛋白與紅細胞特定表面受體相結(jié)合，引起特異性凝集。血凝現(xiàn)象：有些病毒可凝集某些動物（如雞、鵝、豚鼠、綿羊）和人的紅細胞。HA試驗的原理示意圖用途：1確定病毒的存在； 2測定病毒的血凝價血凝價：能使一定量紅細胞發(fā)生50%凝集的 病毒最

2、高稀釋度實驗材料實驗材料器材：96孔V型微量反應(yīng)板、微量移液器、槍頭試劑：1%雞紅細胞(采集健康雞血液，以阿氏液抗凝， 用PBS洗滌3-5次，用PBS配成1%紅細胞懸液備 用)。 試驗抗原、PBS緩沖液血凝實驗步驟血凝實驗步驟1.取96孔V型反應(yīng)板1塊置于水平實驗臺上，在第1排 1-10孔內(nèi)加入25ulPBS緩沖液，第11孔不加。第12孔 加25ulPBS緩沖液2.在第1孔內(nèi)加入血凝素25ul，混勻后吸出25ul加入第 2孔內(nèi)，再混勻后吸出25ul加入第3孔內(nèi)，依次類推 至第10孔時棄掉25ul。第12孔不加作陰性對照孔。3.在1-12孔均加入25ul的生理鹽水。4.在每孔內(nèi)加入25ul1%的

3、雞紅細胞懸液，震蕩，室溫靜止感 作15-30min，每5min觀察一次結(jié)果。5.計算血凝效價，稀釋使成為四價備用結(jié)果判定結(jié)果判定1.在各組對照均正確的情況下，按下列標準判定 血凝反應(yīng)強度示意圖“4” 紅細胞呈片狀凝集，均勻布滿孔底，邊緣有時不整齊或皺縮。“3” 紅細胞呈片狀凝集，但面積略小于“4+”?！?” 紅細胞呈片狀凝集，但有少許沉積孔底中部呈小圓點狀?！啊?紅細胞大部分沉于孔底中央，周圍有少量散在凝集顆粒?！啊?紅細胞均沉于孔底呈小圓點狀，邊緣整齊。2.對照孔正常的情況下，紅細胞凝集100%的稀釋度為判定血凝價的終點。凡能使雞紅細胞完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)為病毒的凝集價。血凝抑制試驗步驟血凝抑制試驗步驟1.取96孔V型反應(yīng)板1塊置于水平實驗臺上， 在第1排1-10孔內(nèi)加入25ul PBS緩沖液，第11孔不加。第12孔加25ul PBS緩沖液。2.在第1孔內(nèi)加入被檢血清25ul，混勻后吸出25ul加入第2孔內(nèi)，再混勻后吸出25ul加入第3孔內(nèi)，依次類推至第10孔時棄掉25ul。第12孔不加作陰性對照孔。3.在1-12孔內(nèi)均加入“四價”血凝素25ul，震蕩后，室溫靜止作用40min。4.在1-12 孔內(nèi)均加入1%的雞紅細胞懸液25ul，震蕩，室溫30min。5.觀測結(jié)果，記錄實驗數(shù)據(jù)血凝抑制試驗結(jié)果判定血凝抑制試驗結(jié)果判定 測定孔 RBC沉于孔底中心，呈