煎煮時刻及甘草配伍劑量對附子中酯型生物堿含量的阻礙

1、煎煮時刻及甘草配伍劑量對附子中酯型生物堿含量的阻礙【摘要】目的研究煎煮時刻及甘草劑量對附子中酯型生物堿含量的阻礙。方式采納紫外分光光度法測定附子中的酯型生物總堿含量；采納高效液相法比較烏頭堿和次烏頭堿的含量。結果酯型生物堿含量的降低，與煎煮時刻和甘草劑量有較高的相關性；煎煮時刻超過30min,100g制附子煎煮液所含的烏頭堿和次烏頭堿含量低于2mg/mlo結論大劑量附子用藥必需通過合理煎煮和配伍以降低毒性，發(fā)揮其特長?！娟P鍵詞】附子煎煮時刻甘草生物堿Abstract:ObjectiveTostudytheeffectonester-typealkaloidsinRadixAconitiLate

2、rlisPreparatabydifferentdecoctingtimeandcompatibilitydosageofRadixdeterminethecontentofester-typealkaloidswithultravioletspectrophotometry(UV).TodeterminethecontentsofaconitineandhypaconitineHighPerformanceLiquidChromatogram(HPLC).ResultsTherewashighercorrelationbetweenthecontentsofester-typealkaloi

3、dsanddecoctingtime,orcompatibilitydosageofRadixGlycyrrhizae.Whenthedecoctingtimewasover30min,thecontentsofaconitineandhypaconitinewerelowerthan2mg/mlinthedecoctionwithadosageof100g.Conclusioninordertodecreasethetoxic,andreducethespecialtyofRadixaconitilaterlispreparatawithalargedosage,thereasonabled

4、ecoctingtimeandcompatibilityareimperative.Keywords:RadixAconitiLaterlisPreparata;Decoctingtime;RadixGlycyrrhizae;Compatibility；Alkaloids附子為毛葭科植物烏頭AconitumcarmichaeliDebz的子根加工品1,是中藥首選的溫里藥，具有溫經(jīng)止痛、溫中散寒、回陽救逆、溫陽扶正等功效，適用于陽虛陰盛，急危厥脫癥，與其它中藥靈活配伍利用，可醫(yī)治多種疾病。中國藥典附子飲片規(guī)定劑量為315go但附子之大劑量應用古己有之，唐朝千金要方就有記載用附子達4二者（合今約1

5、30g）,現(xiàn)代一些名老中醫(yī)也擅長用大劑量附子在臨床取得顯著療效2。但同時，很多醫(yī)家因畏其毒性不敢應用,或用之不妥反致中毒。現(xiàn)代研究說明3附子含多種化學成份，其要緊有效成份為生物堿類，毒性成份要緊為二葩類雙酯型生物堿，如烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿。經(jīng)炮制加工后其中酯型生物堿被部份除去或水解，而毒性低的烏頭原堿含量那么增加。因附子為毒性中藥，即便通過炮制,大劑量應用仍存在必然風險。臨床用藥一樣通太長時刻煎煮和配伍用藥減低附子毒性，其中與甘草配伍較為普遍，但隨著毒性減低，藥理活性亦隨之遞減。因此，如何通過合理煎煮和配伍以降低毒性，并最大限度地發(fā)揮其特長，有重要的臨床意義。本研究通過采納紫外分光光度法

6、測定附子中的酯型生物堿含量，研究煎煮時刻及甘草劑量與附子中酯型生物堿含量的相關性。同時，參照中國藥典1（I部）正文附子項下烏頭堿限量檢測方式,采納高效液相法比較不同煎煮時刻大劑量附子提取液中烏頭堿和次烏頭堿含量，從附子大劑量用藥的平安和有效角度，初步為臨床用藥提供依據(jù)。1儀器與材料儀器Waters高效液相色譜儀（996二極管陣列檢測器、600泵、2020數(shù)據(jù)處置軟件）；紫外-可見光分光光度儀（美國發(fā)瑪西亞公司,B20-RADUV/V4000型）；薄膜旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申科儀器設備廠）。材料和試劑制附子、甘草購自本院藥學部，為中國藥典（I部）收載品種。烏頭堿（批號0720-9807）、次烏頭堿（批

7、號798-9403）購自北京生物制品檢定所。所用試劑為色譜純或分析純。2方式與結果酯型生物總堿的含量測定4標準曲線的制備標準溶液配制：周密稱取烏頭堿標準品mg,加ImolL-lHCl溶液4滴溶解，加純水稀釋，加1mol-L-lNaOH水溶液4滴，混勻,定容至10ml,備用。測定波長選擇：周密量取烏頭堿標準品溶液ml,置于60nli分液漏斗中，加水ml,再加入醋酸-醋酸鈉緩沖液（pH二）ml,浪麝香草酚藍指示液ml,最后周密加入ml氯仿，振搖3min,靜置1h,氯仿層用脫脂棉過濾，棄初濾液，搜集續(xù)濾液。以不含烏頭堿的試劑空白同法操作作參比，于400700nm波長之間進行掃描，測得最大吸收波長為4

8、10nm0標準曲線制備：別禺量取，ml烏頭堿標準品溶液，加純水至ml,按前“測定波長選擇”項下方式操作，于410nm處測定吸收度，計算回歸方程為：Y=5,5,線性范圍mgo供試樣品的制備制附子原藥（不煎煮）供試樣品的制備:按中國藥典（I部）正文附子項下烏頭堿限量檢查供試品制備方式同法操作制備：取制附子粗粉g,置具塞錐形瓶中，加乙醛150ml,振搖30min,放置12h,分取醛層，蒸干，殘渣加1molL-1HC1溶液4滴溶解，加純水稀釋，再加1mol-L-lNaOH水溶液4滴，混勻,定容至10ml,備用。制附子單煎供試樣品的制備：取制附子粗粉100g共4份，別離加水煎煮30,60,90,100,

9、120min,煎煮液用脫脂棉過濾,濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于75左右在水浴上濃縮至100ml。量取煎煮液ml,用氯仿萃取5次，10ml/次，歸并氯仿液，蒸干后按前“制附子原藥（不煎煮）供試樣品的制備”項下方式操作，得供試樣品。附子與甘草合煎供試樣品的制備：取制附子粗粉120g共6份，別離與甘草12,20,40,60,80,120g配伍，合煎60min,煎煮液按前“制附子單煎供試樣品的制備”項下方式濃縮至120ml,并同法操作，得供試樣品。供試樣品的測定與相關性分析供試樣品含量測定:別離量取各供試樣品ml,加純水至ml,按前“測定波長選擇”項下方式操作，于410nm處測定吸收度，并計算生物堿含量。結果見

10、表12。表1煎煮時刻對制附子中酯型生物堿含量的阻礙（略）表2甘草配伍劑量對制附子中酯型生物堿含量的阻礙（略）相關性分析：別離以時亥卜生物堿含量（制附子：甘草）配比-生物堿含量數(shù)據(jù)進行線性回歸數(shù)據(jù)分析。結果見圖1-2。由圖12可見，隨著煎煮時刻延長和甘草劑量增加，附子中酯型生物總堿呈下降趨勢，且酯型生物總堿含量與煎煮時刻和甘草劑量有較高的相關性，r>（圖1,r=9；圖2,r=8）?；厥章蕦嶒炄⊥环N附子單煎提取液，量取ml共5份，各加入濃度為mg/ml烏頭堿標準品液ml,按前“制附子單煎供試樣品的制備”項下同法操作制備回收率供試樣品并同法測定含量，計算加樣回收率。結果見表3。表3附

11、子中烏頭堿類生物堿含量測定回收率實驗（略）樣品中烏頭堿與次烏頭堿含量的比較高效液相色譜條件色譜柱為gemini-C18-110A柱（250mmXmm,5Um）,流動相為甲醇-水-氯仿-三乙胺（70：30：2：,pH=±,檢測波長為235nm,流速為ml/min,柱溫為35。進樣量10樣品制備標準品溶液配制:取烏頭堿、次烏頭堿標準品，用10%甲醇溶解并定容為2mg/ml的溶液，備用。供試品溶液制備:制附子原藥供試品溶液按中國藥典1（I部）正文附子項下烏頭堿限量檢查供試品制備方式操作制備：取制附子粗粉g,置具塞錐形瓶中，加乙醛150ml,振搖30min,放置12h,分取酸層，蒸干，用10

12、%甲醇溶解并定容至2ml,備用。另取制附子單煎30,60min的藥液100ml（相當于100g飲片），60濃縮至50ml,用乙醛萃取4次，50ml/次，分取酸層，蒸干用10%甲醇溶解并定容至2ml,備用。樣品測定按“項下色譜條件，樣品各進樣10U1,記錄保留時刻和峰面積。結果見表4。表4供試樣品與標準品溶液中烏頭堿、次烏頭堿含量（峰而積）比較（略）由表4可見，100g制附子煎煮230min,其煎煮液所含的烏頭堿和次烏頭堿含量低于2mg/ml,也低于20g制附子飲片原藥的烏頭堿和次烏頭堿含量。3結論以上研究說明，增加制附子煎煮時刻或增加甘草的配伍劑量,可水解或除去具有毒副作用的烏頭堿、次烏頭堿等二菇類雙酯型生物堿，降低毒性。酯型生物堿總含量的降低，與煎煮時刻和甘草劑量有較高的相關性。由于酯型生物堿同時為藥效成份，因此，在降低毒性保證平安的同時，應注意減少有效成份的損失，保證藥效。木實驗結果說明，100g制附子煎煮230min,其煎煮液所含的烏頭堿和次烏頭堿含量低于2mg/ml,也低于20g制附子飲片原藥的烏頭堿和次烏頭堿含量(目前中國藥典I部正文中附子烏頭堿限量檢查中烏頭堿對照品濃度為2mg/ml,附子飲片檢測取樣量為20g)。從臨床用藥的平安和有效角度考慮，在附子飲片質(zhì)量符合中國藥典質(zhì)量檢測規(guī)定的前提下，附子大劑量用藥劑量不超過100g時，建議