檢疫10-生物毒素及生物胺檢測

1、2022-2-81水產(chǎn)品中生物毒素及生物胺的水產(chǎn)品中生物毒素及生物胺的檢測檢測海產(chǎn)品衛(wèi)生檢疫2022-2-82（一）河豚毒素（一）河豚毒素（TTX）毒素的濃度由高到低依次為：卵巢、肝臟、腎臟、眼睛和皮膚，肌肉和血液中含量較少。2022-2-832022-2-84毒性毒性 河豚毒素屬于小分子量、非蛋白質(zhì)的神經(jīng)性毒素， 毒性比劇毒的氰化鈉還要高1000多倍， 最低0. 5mg即可致人于死命，一般致死劑量為1-4mg。2022-2-85中毒癥狀：中毒癥狀： 發(fā)病急劇而劇烈，潛伏期10min-3h，最初口感覺渴，唇、舌、手指發(fā)麻，繼之以末端神經(jīng)麻木，胃腸道癥狀，四肢無力，發(fā)冷以及口、舌、指端等處麻痹，

2、言語不清、血壓、體溫下降，呼吸困難，最后死于呼吸衰竭窒息，其死亡率較高，并沒有特別的解藥。2022-2-86一、河豚毒素含量的檢測一、河豚毒素含量的檢測 （一）定量法GB/T23217-2008水產(chǎn)品中河豚毒素的測定 液相色譜-熒光檢測法適用對象：河豚魚、織紋螺、蝦、牡蠣、花蛤、魷魚2022-2-87（二）定性法（二）定性法1試樣的制備 取樣剪碎、磨碎取10g放入燒杯加25 ml 0.1%醋酸沸水浴10min（不斷攪拌）冷卻減壓過濾殘渣用0.1%醋酸溶液反復(fù)洗凈濾液和洗液合在一起定容50mL。 該提取液稱作原試液 1mL相當于內(nèi)臟組織0.2g。2022-2-88（二）定性法（二）定性法試驗動物

3、為：小白鼠年齡出生后4周體重1921g健康狀況健康種系ICR系性別雄性對小白鼠的有哪些要求？2022-2-89(1)預(yù)備試驗預(yù)備試驗 腹腔注射原試液各1mL，以s為單位測定致死時間的平均值。 根據(jù)河豚毒素致死-小白鼠單位換算表換算原試液1mL中的毒量，再以該值配制稀釋到小白鼠在10min左右死亡的濃度 （在本試驗中使用0.1%醋酸水溶液作為稀釋液，記錄稀釋度。）2022-2-810(2)正式試驗正式試驗 腹腔注射稀釋后的試液各1mL，測定致死的時間。 用0.1%醋酸溶液1.0mL注射兩只20g左右的小白鼠作陰性對照， 取1只不注射任何液體的正常小白鼠作空白觀察。2022-2-811(2)正式試

4、驗正式試驗1 2 3 4 5 6 7 8 9 1011121314151617181920-0.1%醋酸溶液1.0mL2122232425262728293031323334353637383940稀釋后的試液各1mL2022-2-812 (3)毒力計算和表示毒力計算和表示 求中間致死時間 在該試驗取得的3-5只小白鼠的致死時間也包括生存小白鼠從短時間開始排列，求中間致死時間2022-2-813 (3)毒力計算和表示毒力計算和表示 求原檢樣1g的小白鼠單位MU（1MU表示對一只ICR系體重20g的雄性小白鼠腹腔注射后30min內(nèi)死亡的毒素劑量） 10g內(nèi)臟組織研磨物制成50mL毒素提取原試液，

5、提取比是5。 原檢樣1g的毒力（MU/g)中間致死時間試液的毒力 x 提取比 x 稀釋倍數(shù)2022-2-814 二、組胺的檢測2022-2-815二、組胺的檢測 當組胺含量積蓄至4mg/g時，人體攝入組胺100mg以上時，易發(fā)生中毒。 組胺中毒是由于組胺使毛細血管擴張和支氣管收縮所致，中毒癥狀輕，主要是臉紅，胸部以及全身皮膚潮紅和眼結(jié)膜充血，同時還有頭痛、頭暈、胸悶等現(xiàn)象。 部分病人出現(xiàn)口、舌、四肢發(fā)麻以及惡心、嘔吐、腹痛、腹瀉、蕁麻疹等。有的可出現(xiàn)支氣管哮喘、呼吸困難、血壓下降。病程大多為1-2天。愈后良好。2022-2-816有色化合物 480nm一、原理:呈色反應(yīng)重氮鹽比色法2022-2

6、-817重氮鹽的形成：甲：對硝基苯胺0.5g，加濃鹽酸5mL，溶解后，加水至200mL，冰箱儲存。乙：亞硝酸鈉0.5g，加水溶解至100mL（現(xiàn)用現(xiàn)配）2022-2-818二、儀器與試劑二、儀器與試劑 10%三氯乙酸: 25%氫氧化鈉 重氮鹽試劑： 組胺標準儲備液:準確稱取在硫酸干燥器中干燥24h的磷酸組胺27.67mg(分析純)，用水溶解并定容至100mL容量瓶中。該溶液每毫升含組胺1mg。 組胺標準使用液:準確吸取組胺標準儲備液 l.0mL于500mL容量瓶中，用水定容至刻度，該溶液每毫升含組胺為10ug。2022-2-819三、試驗方法三、試驗方法 1、樣品處理 除去樣品中的非可食部分，

7、將樣品搗碎、混勻，準確稱取15g于50mL具塞三角瓶中，加入20mL三氯醋酸(10%)，在60水浴中浸提30min，過濾。 殘渣用水洗2次(每次加水10mL )并過濾，合并濾液。用氫氧化鈉溶液(250g/L)中和濾液至pH5.0，再用水定容至100mL.2022-2-820 2.抽提： （1）正戊醇抽提：取濾液1mL于分液漏斗中，加入25NaOH使其呈堿性。再加入3mL正戊醇，振搖分層提取，然后取正戊醇層。（2）酸液提取：取正戊醇液1mL，至于另一個漏斗中，加入3mLHCl（1mol/L），混合均勻，靜止5分鐘，分層，取下層鹽酸溶液。重復(fù)提取3次，合并提取液。水層：堿液正戊醇層：組胺酸液層：組胺的鹽酸鹽正戊醇層2022-2-821取1.0-5.0mL鹽酸提取液于10ml比色管，加入3mLNa2CO3 (5%)，偶氮試劑3mL，混勻，用水稀釋至10mL，混合后放置10分鐘，在480nm測光密度。3、呈色反應(yīng)、呈色反應(yīng)2022-2-8224、標準曲線的繪制：、標準曲線的繪制：取組胺標準使用液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，各加1mL HCl (1mol/L )、3mL Na2CO3 (5%)、偶氮試劑 3mL。同樣操作，測定吸光值。確定組胺濃度