蠶豆病的設(shè)計性實驗ppt課件

1、2021年設(shè)計性實驗?zāi)暝O(shè)計性實驗組員：吳怡蓉、付世錦、 楊有穩(wěn)、梁燕 患兒，男性，3歲，因面色慘白伴血尿1天入院。1天前食用新穎蠶豆后，今日出現(xiàn)惡心、嘔吐、排尿呈醬油樣色，面色慘白。據(jù)家長反映，患者的姐姐也曾發(fā)生過類似情況。 體格檢查：體溫38，脈搏150次/分，呼吸40次/分，血壓80/60mmHg，呼吸急促，神清，萎靡，面色慘白，皮膚及鞏膜黃染，體型較同齡人瘦小。心、肺未及異常，肝、脾未觸及，雙腎區(qū)無叩擊痛，神經(jīng)系統(tǒng)檢查未及異常。實驗室檢查：紅細胞 1.981012/L，血紅蛋白53g/L，血清總膽紅素85.5mol/L，結(jié)合膽紅素13.7mol/L，未結(jié)合膽紅素71.8mol/L，尿蛋白

2、+，潛血(+)，尿膽紅素()，尿膽素原(+)，尿液鏡下未見紅細胞。 實際根據(jù)實際根據(jù) 溶血性黃疸 ：由于紅細胞的大量破壞，使膽紅素產(chǎn)生過多，超越了肝細胞攝取結(jié)合的才干，使得尿中尿膽原和尿膽素含量增多。葡糖-6-磷酸脫氫酶缺乏，輸血不當均會引起病癥 蠶豆?。浩咸?6-磷酸脫氫酶缺乏?；颊叽蠖嘣谑秤眯Q豆后發(fā)生急性溶血性貧血。典型病人常出現(xiàn)由于大量紅細胞破壞釋放出膽紅素二導(dǎo)致的溶血性黃疸 ，惡心嘔吐，尿液呈醬油樣等病癥 誘因：一天前食用蠶豆 既往史：姐姐也曾出現(xiàn)過此病癥蠶豆病發(fā)病機制 食用蠶豆 產(chǎn)生大量過氧化氫，不被去除 紅細胞膜脂質(zhì)被氧化破壞 急性血管內(nèi)溶血，產(chǎn)生過多膽紅素 導(dǎo)致溶血性黃疸，惡心，

3、嘔吐，尿液呈醬油樣 6-磷酸葡萄糖脫氫酶缺乏使磷酸戊糖途徑受阻。NADPH+H+缺乏致血復(fù)原型谷胱甘肽生成缺乏。 紅細胞被破壞，那么可被肝等單核吞噬細胞識別并吞噬，釋放血紅蛋白，進一步分解為珠蛋白和血紅素，而血紅素被吞噬細胞降解為膽紅素。 膽紅素是人體內(nèi)原型抗氧化劑，可以清楚超氧化劑和過氧化物自在基，因患兒體內(nèi)有大量過氧化氫，氧化應(yīng)激可誘導(dǎo)HO-1的表達，從而添加膽紅素的量升高來抵御氧化應(yīng)激形狀。患兒正常兒童紅細胞1.981012/L 4.010125.310 12/L血紅蛋白53g/L 120-140g/L 血清總膽紅素85.5mol/L 1.7117.1mol/L 結(jié)合膽紅素13.7mol

4、/L 03.42mol/L 未結(jié)合膽紅素71.8mol/L 013.68mol/L 尿蛋白(+)潛血(+)尿膽紅素() 尿膽素原(+)從生化代謝解釋患兒的臨床表現(xiàn)和實驗室檢查結(jié)果 主要臨床表現(xiàn)：1. 血尿、排醬油色尿、面 色慘白 2. 皮膚及鞏膜黃染 3. 體溫升高 4. 呼吸急促1. 血尿、排醬油色尿、面色慘白G6PDGSH的主要作用：的主要作用： 維護紅細胞內(nèi)的含硫氫基維護紅細胞內(nèi)的含硫氫基 -SH血紅蛋白、酶蛋白和膜血紅蛋白、酶蛋白和膜 蛋白的完好性，免遭氧化蛋白的完好性，免遭氧化 與谷胱甘肽過氧化酶共同使與谷胱甘肽過氧化酶共同使 H2O2復(fù)原成復(fù)原成H2ONADPH+H+紅細胞的抗氧化

5、才干紅細胞的抗氧化才干GSH紅細胞紅細胞 膜破裂膜破裂溶血性貧血溶血性貧血面色慘白面色慘白游離游離Hb腎腎 吸收閾值吸收閾值血紅蛋白尿血紅蛋白尿/ 含鐵血黃素含鐵血黃素尿尿2. 皮膚及鞏膜黃染3. 體溫升高機理： 紅細胞破裂 血紅蛋白暴露 免疫系統(tǒng)攻擊單核-吞噬細胞系統(tǒng) 體溫升高4. 呼吸急促溶血性貧血 具有載O2才干的Hb含量下降機體缺O(jiān)2呼吸急促實驗設(shè)計高鐵血紅蛋白復(fù)原法實驗思緒 患者姐姐出現(xiàn)過此類情況推患者姐姐出現(xiàn)過此類情況推測屬于家族性遺傳，且患者測屬于家族性遺傳，且患者在食用蠶豆后出現(xiàn)病癥，故在食用蠶豆后出現(xiàn)病癥，故即有能夠為蠶豆病。即有能夠為蠶豆病。6-磷酸磷酸葡萄糖脫氫酶缺乏影響

6、高鐵葡萄糖脫氫酶缺乏影響高鐵血紅蛋白的復(fù)原，故可以根血紅蛋白的復(fù)原，故可以根據(jù)如下反響機制設(shè)計實驗。據(jù)如下反響機制設(shè)計實驗。亞鐵血紅蛋白亞鐵血紅蛋白 高鐵血紅蛋白高鐵血紅蛋白高鐵血紅蛋白復(fù)原酶高鐵血紅蛋白復(fù)原酶 NADPH(輔酶輔酶) 亞甲藍亞甲藍(遞氫體遞氫體)亞硝酸鈉亞硝酸鈉實驗反響方向 一、實驗?zāi)康?1、檢測患者體內(nèi)6-磷酸葡萄糖脫氫酶活性以及發(fā)病緣由 2、掌握高鐵血紅蛋白復(fù)原法測6-磷酸葡萄糖脫氫酶的實驗原理及方法 3、了解蠶豆病的發(fā)病機制及緣由 二、實驗原理二、實驗原理 在全血中參與亞硝酸鈉，使紅細胞中的亞在全血中參與亞硝酸鈉，使紅細胞中的亞鐵血紅蛋白氧化為高鐵血紅蛋白鐵血紅蛋白氧化

7、為高鐵血紅蛋白MHb,高鐵血紅蛋白在高鐵血紅蛋白復(fù)原酶的作高鐵血紅蛋白在高鐵血紅蛋白復(fù)原酶的作用下又被復(fù)原為亞鐵血紅蛋白。在這過程用下又被復(fù)原為亞鐵血紅蛋白。在這過程中，高鐵血紅蛋白復(fù)原酶不僅需求亞甲藍中，高鐵血紅蛋白復(fù)原酶不僅需求亞甲藍作為遞氫體，還需求由作為遞氫體，還需求由G6PD參與磷酸戊糖參與磷酸戊糖途徑構(gòu)成途徑構(gòu)成NADPH作為輔酶才完成上述反響。作為輔酶才完成上述反響。所以，所以，G6PD缺陷癥的患者其缺陷癥的患者其MHb復(fù)原率下復(fù)原率下降分光光度技術(shù)。降分光光度技術(shù)。 三、實驗器材及試劑 器材：離心機、分光光度計、微量移液器 水浴箱、1.5mlEP管、抗凝管，試管 試劑： 0.1

8、8mol/L亞硝酸鈉-葡萄糖溶液、 0.4mmol/L亞甲藍溶液 、 0. 28 mol/ L 葡萄糖溶液、混合液 等量+、生理鹽水、抗凝劑、患者靜脈血、 蒸餾水 四、實驗步驟 1、取靜脈血1. 8mL 于抗凝管(含0. 2 mL109 mmol/ L抗凝劑+葡萄糖20 mg，混勻 2、離心沉淀 1000 r/ min 15 min 3、調(diào)整 血細胞 血漿=1 1 ，混勻 ，調(diào)整后全血 4、1ml 0. 18 mol/ L 亞硝酸鈉、1ml 0. 28 mol/ L 葡萄糖溶液 、0.14 mmol/ L 亞甲基藍液，混勻 ，得到混合試劑1ml 5、取試管3 支,標上A、B、S ,按下表參與試

9、劑高鐵血紅蛋白復(fù)原實驗操作步驟混合試劑/ mL 0. 01 / /生理鹽水/ mL / 0. 01 /0. 18 mol/ L 亞硝酸鈉- / / 0. 010. 28 mol/ L葡萄糖溶液/ mL 經(jīng)調(diào)整的全血/ mL 0. 1 0. 1 0. 1來回搖動1520 次,置37 水浴箱靜置3 h蒸餾水 10. 00ml 10. 00ml 10. 00ml 試劑 A B SB管為空白管, 在波長635 nm處，測定“A管及“S管吸光度 六、實驗結(jié)果 實驗結(jié)果計算：計算高鐵血紅蛋白復(fù)原率公式：MHb % = (1 - A/ S) 100 % 計算出其復(fù)原率與正常值比較 七、實驗分析 該患者能夠患有先天性鐮刀貧血癥或蠶豆病。 正常的高鐵血紅蛋白復(fù)原率75%，假設(shè)計算所得復(fù)原率低于75%，且患者姐姐也有類似病癥，患者吃過蠶豆后發(fā)病，故可推斷患者患有蠶豆病 八、本卷須知1、血細胞比容比值過低，高鐵血紅蛋白復(fù)原率降低。應(yīng)將血細胞比容調(diào)整到0.35-0.4