半夏外用的抗炎鎮(zhèn)痛作用

1、瘤發(fā)生和生長(zhǎng)中起著重要作用。許多惡性腫瘤是因其細(xì)胞在凋亡過(guò)程嚴(yán)重受阻,使腫瘤細(xì)胞快速惡性增生,這種增殖與死亡的平衡失調(diào),是由細(xì)胞凋亡的調(diào)節(jié)紊亂引起的。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示,TCS 能誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞LoVo 凋亡,并與TCS 劑量成正相關(guān)。有研究提示5:TCS 具有核酸內(nèi)切酶功能,能夠切割破壞細(xì)胞DNA 超螺旋結(jié)構(gòu),導(dǎo)致細(xì)胞損傷,但對(duì)腫瘤細(xì)胞的DNA 的作用未見(jiàn)報(bào)道。TCS 誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,是通過(guò)核酸內(nèi)切酶功能直接介導(dǎo),還是通過(guò)膜受體的介導(dǎo);是與TCS 誘導(dǎo)的凋亡與核酸體失活,所導(dǎo)致的細(xì)胞壞死相關(guān),還是細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因和信號(hào)分子在TCS 誘導(dǎo)凋亡過(guò)程中的作用,這些問(wèn)題還需要進(jìn)一步探索。TCS 是傳統(tǒng)

2、中藥天花粉的主要成分,其在對(duì)瘤細(xì)胞和癌細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡與核酸體失活過(guò)程中,正常造血細(xì)胞和組織細(xì)胞幾乎無(wú)損傷作用67,這是TCS 區(qū)別其它抗腫瘤藥物的明顯優(yōu)勢(shì)。TCS 能夠誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞LoVo 凋亡,有直接抗腫瘤的作用,其與化療藥物相比,其優(yōu)點(diǎn)顯著,臨床上可望成為治療胃癌的新手段。本研究對(duì)TCS 治療胃癌機(jī)制的闡明,有助于開(kāi)發(fā)TCS 的應(yīng)用范圍,為胃癌治療提供一種新途徑。參考文獻(xiàn):1Shaw PC ,Chan WL ,Yeung HW ,Ng TBMini review trtchosan-thinum protein with multiple pharmacological properties

3、 J Life Sci ,1994,55(4:2532622Wong YF ,Wong WSF ,Chen XGEvaluation of trtchosanthinumagainstxeno grafts of human horiocarcinoma cells J Med Sci Res ,1990,18(1:95963Artin SJ ,Lennon SV ,Bonham AMInduction of apoptosis (pro-grammed cell death in human leukemicHL 60cells by inhibitionof RNA or protein

4、synthesis J J Immunol ,1990,145(6:185918674Martin SJ ,Lennon SV ,Bonham AMInduction of apoptosis (pro-grammed cell death In human leuke micHL 60cells by inhibi-tion of RNA or protein synthesis J J Im2munol ,1990,145(6:185918675Darzynkiewicz Z ,Bruno S ,Del Bino G ,Gorczyca W ,Hotz MA ,Lassota P ,Tra

5、ganos FFeatures of apoptotic cells measured by flow cytometry J Cytometry ,1992,13(8:7958086Li MX ,Yeung HW ,Pan LP ,Chan SITrichosanthin ,a potentHIV 1inhibitor ,can cleave supercoiled DNA in vitro J Nucle-ic Acids Res ,1991,19(22:63097Vaux DL ,Strasser AThe molecular biology of apoptosis J ProcNat

6、l Acad Sci USA ,1996,93(6:22392244(編輯:孫錚收稿日期:20110608基金項(xiàng)目:“十一五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(編號(hào):2008BAI53B09作者簡(jiǎn)介:史晶晶(1984,女,河南開(kāi)封人,碩士學(xué)位,助教。通訊作者:時(shí)博,E mail :shiboshibo2003yahoocomcn 半夏外用的抗炎鎮(zhèn)痛作用史晶晶,苗明三,時(shí)博(河南中醫(yī)學(xué)院,河南鄭州450008摘要:目的:通過(guò)對(duì)半夏的外用實(shí)驗(yàn)研究,總結(jié)規(guī)范出其外用功能,同時(shí)揭示中藥外用的特點(diǎn)及可能的機(jī)理,進(jìn)而豐富中藥外用理論,指導(dǎo)中藥臨床外用。方法:根據(jù)半夏的臨床外用特點(diǎn)設(shè)計(jì)相應(yīng)的外用藥理實(shí)驗(yàn),主要觀察半夏酒

7、糊外用對(duì)小鼠耳廓二甲苯致腫脹的影響、對(duì)熱板法致小鼠疼痛的影響、對(duì)甲醛致小鼠疼痛模型的影響、對(duì)大鼠蛋清性足跖腫脹的影響。結(jié)果:半夏酒糊能夠顯著顯著抑制大鼠蛋清性足跖腫脹和二甲苯所致小鼠耳廓腫脹,顯著提高小鼠痛閾,明顯延長(zhǎng)甲醛法致小鼠足跖疼痛的潛伏期,顯著減少5min 和10min 內(nèi)小鼠舔咬右后足跖的次數(shù)。結(jié)論:半夏外用有活血化瘀的功能,可以改善由于軟組織損傷、瘀斑、跌打瘀腫、外傷導(dǎo)致的腫脹疼痛。關(guān)鍵詞:半夏;抗炎;鎮(zhèn)痛;活血化瘀;大鼠;小鼠中圖分類(lèi)號(hào):R2855文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A文章編號(hào):10035028(201109099103中藥外用治療疾病,方法眾多、副作用小、療效突出,是祖國(guó)醫(yī)學(xué)的重要組成

8、部分,也是最具特色的中醫(yī)療法之一。隨著中藥臨床外用的發(fā)展,中藥外用功能也應(yīng)隨著豐富和發(fā)展,但目前中藥缺少相應(yīng)的外用功能的表述和理論指導(dǎo),也較少開(kāi)展相應(yīng)的研究,以至于現(xiàn)在中藥外用功能的發(fā)展明顯落后于中藥的臨床外用,因此我們選定幾位藥物對(duì)其外用功能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證,以期對(duì)其外用治療功能進(jìn)行增補(bǔ)。近年來(lái)的研究報(bào)道顯示,半夏在治療軟組織損傷、瘀斑、跌打瘀腫、外傷等癥上有公認(rèn)臨床外用療效,但卻未在藥典上有相應(yīng)外用功能的體現(xiàn),因此我們選擇抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)初步驗(yàn)證半夏外用治療軟組織損傷、瘀斑、跌打瘀腫、外傷等的功能。1實(shí)驗(yàn)材料11動(dòng)物清潔級(jí)昆明種小鼠,體質(zhì)量1821g ,雌雄各半或雌性,由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合

9、格證號(hào)909152;清潔級(jí)SD 大鼠,體質(zhì)量180200g ,雄性,由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,合格證號(hào)911134。12儀器大鼠足跖測(cè)定儀,成都泰盛科技有限公司生產(chǎn),PV 200;熱板測(cè)定儀,山東醫(yī)學(xué)科學(xué)設(shè)備站生產(chǎn),YLS 6A 型;FA (N /JA (N 系列電子天平,上海民橋精密儀器有限公司。·199·13藥品及試劑半夏,購(gòu)自安徽省亳州市藥材交易公司,經(jīng)河南中醫(yī)學(xué)院生藥教研室陳隨清老師鑒定為蓼天南星科植物半夏Pinellia ternata(ThunbBreit的干燥塊莖;半夏粉的制備:將半夏干燥塊莖除去雜質(zhì)打粉后過(guò)120目篩;半夏糊的制備:半夏糊小劑量(015g/m

10、L,取15g半夏粉溶于100mL白酒,半夏糊大劑量(025g/mL,取25g半夏粉溶于100mL白酒;田七跌打風(fēng)濕膏,廣州白云山制藥股份有限公司,批號(hào)N1001;紅星二鍋頭,北京紅星股份有限公司,批號(hào)20090405;甲醛,煙臺(tái)市雙雙化工有限公司,批號(hào)20090326;二甲苯,天津科密歐化學(xué)試劑開(kāi)發(fā)中心,批號(hào)2008071028;氯化鈉注射液,鄭州永和制藥廠有限公司,批號(hào)09073105。2實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果21半夏酒糊對(duì)各組小鼠耳廓二甲苯致腫脹的影響取健康小鼠50只,雄性,1821g。隨機(jī)分成5組,每組10只。分別為半夏大劑量組、半夏小劑量組、白酒組、陽(yáng)性組、模型對(duì)照組,分別給小鼠右耳涂藥,半夏

11、大、小劑量組均涂抹相應(yīng)藥物(大劑量025g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于084g/耳;小劑量為015g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于048g/耳;陽(yáng)性組給以田七跌打風(fēng)濕膏(厚度2mm,相當(dāng)于03g/耳;白酒組給以淀粉糊(025g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于048g/耳;模型對(duì)照組涂抹生理鹽水,均正反兩面用藥;10min涂抹1次,涂藥1h,用生理鹽水擦靜右耳后再用干藥棉擦干。10min后涂二甲苯004mL/耳,于致炎后10min、2h各組小鼠右耳再次分別涂以相應(yīng)量藥物。于涂二甲苯4h后處死小鼠,處死前取用生理鹽水擦靜右耳后再用干藥棉擦干。剪下雙耳,對(duì)齊,用8mm打孔器取下圓型耳片,迅速分析天平稱(chēng)量,雙耳重

12、量之差為腫脹度12,腫脹度=右耳重左耳重。結(jié)果見(jiàn)表1。表1半夏酒糊對(duì)各組小鼠耳廓二甲苯致腫脹的影響(mg,珋xs組別動(dòng)物數(shù)(只腫脹度(兩耳重量差模型對(duì)照組109807陽(yáng)性組104105*白酒組108710*半夏大劑量組104305*半夏小劑量組105805*注:與模型對(duì)照組比較,*P005,*P001。從表1可以看出,與模型對(duì)照組比較,半夏大劑量組、半夏小劑量組和陽(yáng)性組兩耳片重量差均顯著降低(P001,白酒組兩耳片重量差稍降低(P005。22半夏酒糊對(duì)各組小鼠熱板法致疼痛閾值的影響取健康小鼠60只,雌性,1821g。實(shí)驗(yàn)前先在熱板儀上(5605篩選小鼠正常痛閾,以小鼠舔(咬后足趾為疼痛出現(xiàn)指示

13、,凡痛閾大于30s或小于3s,均棄不用,選痛閾合格小鼠50只,按小鼠痛閾值大小隨機(jī)分為5組,半夏大劑量組、半夏小劑量組、白酒組、陽(yáng)性組、模型對(duì)照組。分別給以相應(yīng)藥物。半夏大劑量組、半夏小劑量組均涂抹相應(yīng)藥物(大劑量025g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于056g/足;小劑量為015g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于032g/足;陽(yáng)性組給以田七跌打風(fēng)濕膏(厚度2mm,相當(dāng)于02g/足;白酒組給以淀粉糊(025g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于056g/足;模型對(duì)照組以藥棉蘸生理鹽水濕敷,給藥后均以保鮮膜覆蓋膠布固定30min后,以生理鹽水洗凈藥物,再用干藥棉擦干后足,于給藥后30min、60min、90min在熱

14、板儀中再次測(cè)定小鼠痛閾34。結(jié)果見(jiàn)表2。如小鼠在熱板上停留60s后仍無(wú)痛反應(yīng),按60s計(jì)算。表2半夏酒糊對(duì)各組小鼠熱板法致疼痛閾值的影響(s,珋xs組別動(dòng)物數(shù)(只給藥前30min60min90min 模型對(duì)照組1012115130111331013809陽(yáng)性組101271124824*25021*23218*白酒組101261314111*14310*14711*半夏大劑量組101200924137*24235*22631*半夏小劑量組101221622629*23029*22049*注:與模型對(duì)照組比較,*P005,*P001。從表2可以看出,與模型對(duì)照組比較,半夏大劑量組、半夏小劑量組和陽(yáng)

15、性組可顯著提高小鼠痛閾(P001,白酒組明顯提高小鼠痛閾(P005。23半夏酒糊對(duì)各組小鼠甲醛法致痛作用的影響取健康小鼠50只,雌雄各半,1821g。隨機(jī)分成半夏大劑量組、半夏小劑量組、陽(yáng)性組、白酒組、模型對(duì)照組,每組10只。分別給于小鼠右后足相應(yīng)藥物,半夏大劑量組、半夏小劑量組均涂抹相應(yīng)藥物(大劑量025g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于056g/足;小劑量為015g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于032g/足;陽(yáng)性組給以田七跌打風(fēng)濕膏(厚度2mm,相當(dāng)于02g/足;白酒組給以淀粉糊(025g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于056g/足;模型對(duì)照組以藥棉蘸生理鹽水濕敷,給藥后均以保鮮膜覆蓋膠布固定30min后

16、,以生理鹽水洗凈藥物,再用干藥棉擦干,立即給小鼠右后足背皮下注射新配制的25%甲醛溶液30L5。實(shí)驗(yàn)指標(biāo):立即記錄每只小鼠首次舔咬右后足的潛伏期及5min內(nèi)舔咬右后足的次數(shù)和10min內(nèi)舔咬右后足的次數(shù)。結(jié)果見(jiàn)表3。表3半夏酒糊對(duì)各組小鼠甲醛法致痛作用的影響(珋xs組別動(dòng)物數(shù)(只首次舔咬足跖潛伏期(S5min內(nèi)舔咬足跖數(shù)(次10min內(nèi)舔咬足跖數(shù)(次模型對(duì)照組1071242572728030陽(yáng)性組1011131*13133*14436*白酒組1078232472825927半夏大劑量組109523*12930*14327*半夏小劑量組10892519836*21335*注:與模型對(duì)照組比較,*

17、P005,*P001。從表3可以看出,與模型對(duì)照組比較,大劑量半夏可明顯延長(zhǎng)甲醛法致小鼠足跖疼痛的潛伏期(P005,陽(yáng)性組可顯著延長(zhǎng)甲醛法致小鼠足跖疼痛的潛伏期(P001;小劑量半夏對(duì)甲醛致小鼠足跖疼痛的潛伏期無(wú)明顯影響(P005。大、小劑量半夏,陽(yáng)性組均可顯著減少5min和10min內(nèi)小鼠舔咬右后足跖的次數(shù)(P001,白酒組對(duì)甲醛致小鼠足跖疼痛無(wú)明顯影響(P005。·299·第31卷第9期史晶晶,等:半夏外用的抗炎鎮(zhèn)痛作用Vol31No924半夏酒糊對(duì)各組大鼠蛋清性足跖腫脹的影響取健康大鼠40只,雄性,180200g。隨機(jī)分成半夏大劑量組、半夏小劑量組、白酒組、陽(yáng)性組、模

18、型對(duì)照組,每組8只。先用足跖測(cè)定儀測(cè)大鼠正常左右后足跖體積,并調(diào)節(jié)在大鼠踝關(guān)節(jié)的劃線位置,使大鼠正常足跖體積在1mL左右。半夏大、小劑量組均涂抹相應(yīng)藥物(大劑量025g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于14g/足;小劑量為015g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于08g/足;陽(yáng)性組給以田七跌打風(fēng)濕膏(厚度2mm,相當(dāng)于05g/足;白酒組給以淀粉糊(025g/mL,厚度2mm,相當(dāng)于14g/足;模型對(duì)照組以藥棉蘸生理鹽水濕敷,給藥后均以保鮮膜覆蓋膠布固定30min后,以生理鹽水洗凈藥物,再用干藥棉擦干,于每鼠左右后足跖均皮下各注射新配制的10%新鮮雞蛋清液01mL/足6。實(shí)驗(yàn)指標(biāo):分別于給蛋清后30min、60

19、min、90min、120min、150min用足跖測(cè)定儀再次測(cè)大鼠左右后足跖體積,并計(jì)算足跖腫脹率。結(jié)果見(jiàn)表4。表4半夏酒糊對(duì)各組大鼠蛋清性足跖腫脹的影響(珋xs組別動(dòng)物數(shù)(只正常體積(mL給蛋清后不同時(shí)間足跖腫脹體積(mL(腫脹率30min60min90min120min150min模型對(duì)照組8097004171009(077008167008(072010160008(066009157008(06100915009(055010陽(yáng)性組8096004160009*(068011157009*(064012151009*(059011148009*(055011141009*(048010

20、白酒組8097004170009(076012165008(071010160009(066010156008(061009152008(057009半夏大劑量組8096004159005*(066011155005*(061010151006*(057010147005*(053009142006*(048010半夏小劑量組8097006162005*(069012159004*(065011155004*(061010152004*(057011146003*(052010注:與模型對(duì)照組比較,*P005,*P001。從表4可以看出,給藥前各組大鼠正常足跖體積之間差異不明顯(P005,說(shuō)明

21、分組均勻;與模型對(duì)照組比較,半夏大劑量組在給藥后30150min均可顯著抑制大鼠蛋清性足跖腫脹(P001,半夏小劑量組在給藥后30min、60min 和150min可顯著抑制大鼠蛋清性足跖腫脹(P001,在給藥后90min和120min可明顯抑制大鼠蛋清性足跖腫脹(P005,白酒組對(duì)抑制大鼠蛋清性足跖腫脹無(wú)明顯作用(P005。3討論2005版藥典記載:半夏辛,溫,有毒。歸脾、胃、肺經(jīng)。為天南星科植物半夏的干燥葉塊莖,功能燥濕化痰,降逆止嘔,消痞散結(jié)7。且文獻(xiàn)上有記載該藥臨床外用功能:取生半夏研極細(xì)末,密貯,外用治外傷出血、跌打瘀腫、雞眼胼胝、瘢痕疙瘩,其止血、生肌、祛瘀、消瘢之效卓然。肘后方中

22、記載“治療癰疽、乳癰腫毒,用半夏末、雞子白調(diào)涂;或半夏用水磨敷,有散結(jié)、消腫、止痛之效”。外科小品中記載“治外傷性出血:生半夏、烏賊骨等分,研細(xì)末,撒患處。”8半夏臨床外用對(duì)治療軟組織損傷、瘀斑、跌打瘀腫、外傷有較好療效,主要的藥理作用是抗炎、鎮(zhèn)痛。藥理實(shí)驗(yàn)的設(shè)計(jì),原則上以建立中藥外用所治疾病的動(dòng)物模型為主。據(jù)此,我們選做了幾種抗炎鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn):半夏對(duì)二甲苯致小鼠耳廓腫脹模型的影響、半夏對(duì)熱板法致小鼠疼痛模型的影響、半夏對(duì)大鼠蛋清性足跖腫脹模型的影響、半夏對(duì)甲醛致小鼠疼痛模型的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,在半夏外用藥理研究中,半夏能顯著減輕二甲苯導(dǎo)致耳廓腫脹;顯著提高小鼠痛閾;顯著延長(zhǎng)甲醛法致小鼠足跖疼痛的潛伏期,顯著減少5min和10min內(nèi)小鼠舔咬右后足跖的次數(shù);在給藥后30150min均可顯著抑制大鼠蛋清性足跖腫脹。說(shuō)明半夏可以改善由于軟組織損傷、瘀斑、跌打瘀腫、外傷導(dǎo)致的腫脹疼痛。應(yīng)