子宮內(nèi)膜異位癥和子宮腺肌癥脆性組氨酸三聯(lián)體表達(dá)的意義

1、子宮內(nèi)膜異位癥和子宮腺肌癥脆性組氨酸三聯(lián)體表達(dá)的意義    【摘要】  目的： 觀察脆性組氨酸三聯(lián)體(Fhit)蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥(EM)和子宮腺肌癥(AM)中表達(dá)的作用. 方法： 應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)36例子宮內(nèi)膜異位癥(EM組)異位內(nèi)膜、22例子宮腺肌癥(AM組)在位內(nèi)膜及15例子宮肌瘤患者子宮內(nèi)膜(對(duì)照組)中Fhit蛋白的表達(dá)情況. 結(jié)果： Fhit主要表達(dá)在腺體上皮細(xì)胞的胞質(zhì)和胞膜；EM組和AM組的Fhit表達(dá)無(wú)顯著性差異，明顯低于對(duì)照組；各組子宮內(nèi)膜Fhit表達(dá)在增生期和分泌期均無(wú)顯著性差異(P>0.05)；EM組在位內(nèi)膜的

2、Fhit表達(dá)在臨床r?AFS不同期別中無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但異位內(nèi)膜的 Fhit表達(dá)在不同r?AFS分期中差異顯著(P<0.05)，F(xiàn)hit表達(dá)的陽(yáng)性強(qiáng)度與r?AFS分期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.40，P< 0.05). 結(jié)論： Fhit可能在子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中起重要作用.【關(guān)鍵詞】  子宮內(nèi)膜異位癥 子宮腺肌癥 脆性組氨酸三聯(lián)體    0引言    子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis, EM)和子宮腺肌癥(adenomyosis, AM) 均是育齡婦女常見病，確切發(fā)病機(jī)制目前仍不

3、清楚，該病在組織學(xué)上雖為良性，但其侵襲、種植的生物學(xué)行為與惡性腫瘤極其相似. 脆性組氨酸三聯(lián)體(fragile histidine triad, Fhit)是一種抑癌基因1，主要通過(guò)參與細(xì)胞周期調(diào)控和凋亡發(fā)揮抑癌作用，目前有關(guān)該基因的研究多集中于腫瘤方面，而在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制中的作用少見報(bào)道. 我們采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)Fhit蛋白在異位子宮內(nèi)膜、在位子宮內(nèi)膜和正常子宮內(nèi)膜中的表達(dá)，探討其在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生、發(fā)展中的作用.    1材料和方法    1.1材料2006?09/2007?05在我院行手術(shù)治療的子宮內(nèi)膜異位癥36例

4、(EM組)，取其異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜標(biāo)本，其中增生期25例，分泌期11例；按r?AFS分期法，期8例，期17例，期 11例. 同期子宮腺肌癥22例(AM組)，亦取其異位內(nèi)膜和在位內(nèi)膜標(biāo)本，其中增生期15例，分泌期7例. 同期單純子宮肌瘤患者15例(對(duì)照組)，取其子宮內(nèi)膜標(biāo)本，其中增生期10例，分泌期5例. 所有患者年齡2150（平均35.0±5.3)歲，術(shù)前半年均未使用激素類藥物治療或使用過(guò)宮內(nèi)節(jié)育器(IUD)，月經(jīng)均規(guī)律，無(wú)不規(guī)則陰道流血. 所有診斷均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)，內(nèi)膜分期依據(jù)月經(jīng)周期的時(shí)間結(jié)合HE染色組織切片確定. 兔抗人Fhit多克隆抗體、免疫組化SP試劑盒和DAB顯色劑均購(gòu)自

5、北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司.    1.2方法標(biāo)本經(jīng)100 g/L甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋，做5 m厚連續(xù)切片，采用免疫組化SP法，F(xiàn)hit抗體的稀釋濃度為175，染色步驟嚴(yán)格按試劑盒要求進(jìn)行，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為空白對(duì)照，以乳腺癌為陽(yáng)性對(duì)照，DAB顯色劑顯色. Fhit蛋白陽(yáng)性信號(hào)呈棕黃色或棕褐色，主要定位于胞質(zhì)和胞膜. Fhit陽(yáng)性強(qiáng)度采用文獻(xiàn)2綜合評(píng)分法判定，先按染色深度評(píng)分：無(wú)色0分，淺黃色1分，棕黃色2分，棕褐色3分；再按陽(yáng)性細(xì)胞所占百分比評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞<5%為0分，5%25%為1分，25%50%為2分，50%75%為3分，>

6、75%為4分；再計(jì)算染色深度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比的乘積用以表達(dá)陽(yáng)性強(qiáng)度：912分為強(qiáng)陽(yáng)性(+)，58分為弱陽(yáng)性(+)，04分為陰性(-).    統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0建立數(shù)據(jù)庫(kù)，組間Fhit陽(yáng)性率的比較采用2檢驗(yàn)和Fisher確切概率法，陽(yáng)性強(qiáng)度的比較采用秩和檢驗(yàn)(Wilcoxon兩樣本比較法)，F(xiàn)hit陽(yáng)性強(qiáng)度與r?AFS分期的關(guān)系用Spearman等級(jí)相關(guān)分析. P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義.    2結(jié)果    2.1各組子宮內(nèi)膜Fhit蛋白表達(dá)各組Fhit主要表

7、達(dá)在腺體上皮細(xì)胞的胞質(zhì)和胞膜，在位內(nèi)膜間質(zhì)亦有表達(dá)，腺體Fhit表達(dá)強(qiáng)于間質(zhì)，異位內(nèi)膜間質(zhì)無(wú)表達(dá). 正常內(nèi)膜Fhit表達(dá)陽(yáng)性率為100%(15/15)；EM和AM在位內(nèi)膜陽(yáng)性率分別為86.1%(31/36)和86.4%(19/22)，二者間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，EM和AM在位內(nèi)膜陽(yáng)性率均低于正常內(nèi)膜陽(yáng)性率，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；EM和AM異位內(nèi)膜 Fhit表達(dá)陽(yáng)性率分別為66.7%(24/36)和63.6%(14/22)，二者無(wú)顯著性差異，但均明顯低于正常內(nèi)膜陽(yáng)性率 (2=4.82，P=0.03和P=0.01). 對(duì)照組子宮內(nèi)膜>EM/AM組在位內(nèi)膜&g

8、t;EM/AM組異位內(nèi)膜(表1，圖1). 各組子宮內(nèi)膜的Fhit蛋白表達(dá)陽(yáng)性率和陽(yáng)性強(qiáng)度在增生期與分泌期均無(wú)顯著性差異(表1). 表1子宮內(nèi)膜中Fhit的表達(dá)情況    2.2Fhit表達(dá)與r?AFS分期的關(guān)系EM組在位內(nèi)膜的Fhit表達(dá)在臨床r?AFS分期的不同期別中均無(wú)顯著性差異(P>0.05)，但異位內(nèi)膜的Fhit表達(dá)在不同期別中有顯著性差異(P=0.03)，期Fhit表達(dá)的陽(yáng)性率高于期(P=0.04)，期Fhit表達(dá)的陽(yáng)性強(qiáng)度高于期和期(P值分別為0.026和0.032)；Fhit表達(dá)的陽(yáng)性強(qiáng)度與r?AFS分期呈負(fù)相關(guān)(r=-0.40，P<0.

9、05，表2). 表2Fhit在不同r?AFS分期的異位子宮內(nèi)膜腺體中的表達(dá)    3討論    Fhit基因是一種與細(xì)胞生長(zhǎng)、凋亡、增殖及黏附等多種細(xì)胞生物學(xué)行為相關(guān)的抑癌基因，存在于所有上皮性組織和大多數(shù)正常組織中，該基因位于3P14.2 區(qū)域，涵蓋了t(38)異位斷裂點(diǎn)，同時(shí)也見于大多數(shù)人類的共同脆性位點(diǎn)FRA3B. Fhit有一個(gè)專門與微球蛋白結(jié)合的位點(diǎn)，可促使微管集中，限制微管動(dòng)態(tài)活動(dòng)或干擾微管分散而阻止細(xì)胞的有絲分裂過(guò)程，抑制細(xì)胞過(guò)度增殖，使細(xì)胞受阻于增殖周期的S期，并激活caspase28, caspase29，引起cas

10、pase酶介導(dǎo)的凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)1. Fhit基因失活與人類多種腫瘤有關(guān)，主要表現(xiàn)為基因的重排、插入、缺失，點(diǎn)突變少見，F(xiàn)hit蛋白則主要表現(xiàn)為表達(dá)降低或表達(dá)缺失，F(xiàn)hit基因缺失后，其抑癌功能喪失，異型細(xì)胞逃逸G0/G1檢測(cè)關(guān)卡而無(wú)限增殖，凋亡減少. 子宮內(nèi)膜異位癥侵襲、種植的生物學(xué)行為與惡性腫瘤極其相似，其在位內(nèi)膜在增殖增強(qiáng)和凋亡減弱的雙重作用下，使經(jīng)期脫落內(nèi)膜中保留較多仍有較強(qiáng)活性的細(xì)胞，這些細(xì)胞可以象惡性腫瘤一樣，隨血液、淋巴或直接播散到全身其他部位，形成異位病灶，在腹腔內(nèi)環(huán)境中多種因子復(fù)雜作用下，其抗凋亡能力進(jìn)一步加強(qiáng)，繼續(xù)生長(zhǎng)、浸潤(rùn)等，促進(jìn)了子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)生發(fā)展2. 劉玉琴等3報(bào)道

11、的12例正常子宮內(nèi)膜Fhit陽(yáng)性表達(dá)率亦均為100%. 本組正常子宮內(nèi)膜中，F(xiàn)hit在增生期和分泌期陽(yáng)性表達(dá)率亦為100%；EM和AM在位內(nèi)膜的Fhit表達(dá)較正常內(nèi)膜有下降趨勢(shì)，表明在位內(nèi)膜可能已具有不同于正常內(nèi)膜的生物學(xué)特性，在位內(nèi)膜Fhit的低表達(dá)導(dǎo)致其凋亡減少，此結(jié)果支持“在位內(nèi)膜決定論”的觀點(diǎn)4-5. 本組EM和AM異位內(nèi)膜的Fhit表達(dá)均明顯低于正常內(nèi)膜，提示Fhit表達(dá)的改變可能是子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生的機(jī)制之一.    EM和AM雖然統(tǒng)稱為子宮內(nèi)膜異位性疾病，但是兩者的發(fā)病機(jī)制存在一定的差異. 然而我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在EM和AM的異位及在位內(nèi)膜之間Fh

12、it表達(dá)的差異無(wú)顯著性，說(shuō)明在EM和AM的發(fā)生過(guò)程中具有某些相似性，在Fhit水平上尚無(wú)法區(qū)分二者. 本研究中 EM組異位內(nèi)膜Fhit表達(dá)在不同的r?AFS分期中有顯著性差異，臨床分期越高，F(xiàn)hit表達(dá)越低，表明Fhit表達(dá)程度與EM嚴(yán)重程度相關(guān)，這點(diǎn)與惡性腫瘤相似，研究結(jié)果表明5，多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與抑癌基因Fhit的突變或缺失有關(guān)，其Fhit表達(dá)強(qiáng)度亦與腫瘤分級(jí)、分期相關(guān). EM屬于良性病變，但也可以發(fā)生惡變，其惡變直接與某些抑癌基因如PTEN的突變與缺失相關(guān). Opalka等6通過(guò)轉(zhuǎn)基因研究證明了Fhit基因可抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)活性，提出了Fhit基因在腫瘤治療方面具有遠(yuǎn)大前景. 但E

13、M惡變是否與Fhit缺失相關(guān)以及Fhit基因可否抑制異位子宮內(nèi)膜細(xì)胞的生長(zhǎng)并應(yīng)用于治療子宮內(nèi)膜異位癥均需進(jìn)一步的研究來(lái)證實(shí).【參考文獻(xiàn)】  1 Ishii H, Dumon KR, Vecchione A, et al. Effect of adenovival transduction of the fragile histidine triad gene in the esophageal cancer cellsJ. Cancer Res, 2001,61(4):1578-1584.2 Harada T, Kaponis A, Iwabe T, et al. Apoptosis

14、 in human endometrium and endometriosisJ. Hum Reprod Update, 2004,10(1):29-38.3 劉玉琴,高英敏,王秀華. 子宮內(nèi)膜癌組織中FHIT，MMP?2的表達(dá)與臨床病理的相關(guān)性研究J.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2005,21(4):223-225.4 郎景和. 子宮內(nèi)膜異位癥的研究與設(shè)想J.中華婦產(chǎn)科雜志,2003,38(8):478-480.5 Sillem M, Prifti S, Koch A, et al. Regulation of matrix metalloproteinases and their inhibitors in uterine endom