關(guān)于腰痛寧膠囊的毒理學(xué)的分析策略

1、關(guān)于腰痛寧膠囊的毒理學(xué)的分析策略    內(nèi)容摘要：摘要以SD大鼠為受試對象，使用Bliss法測定口服腰痛寧膠囊的LD50 ;采用4個劑量（300，150，75，35.5mg/kg）iq SD大鼠，連續(xù)180d，觀察給藥90，180d時大鼠的生.摘要以SD大鼠為受試對象，使用Bliss法測定口服腰痛寧膠囊的LD50 ;采用4個劑量（300，150，75，35.5mg/kg）iq SD大鼠，連續(xù)180d，觀察給藥90，180d時大鼠的生長發(fā)育、血液學(xué)、血液生化學(xué)、組織病理變化及停藥30d時上述指標的變化。大鼠口服腰痛寧膠囊的急性毒性和長期毒性作用。長期大劑量

2、服用腰痛寧膠囊，對腎功能有一定影響并且恢復(fù)較慢，建議腎功能不好的患者慎用。通過對腰痛寧膠囊180d用藥過程中各項指標反應(yīng)的觀察，未見性別差異。綜合分析認為，腰痛寧膠囊在規(guī)定劑量下服用是安全可靠的。  關(guān)鍵字：  腰痛寧膠囊    急性毒性    馬錢子    士的寧    大鼠    長期毒性 腰痛寧膠囊為常用中成藥，是國家中藥保護品種。具有消腫止痛、疏散寒邪、通經(jīng)活絡(luò)的作用，在治療腰椎間盤凸起、腰椎增生、坐骨神經(jīng)痛、腰肌纖維

3、炎、慢性風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等疾病時具有獨特的療效 1 。因處方中含有馬錢子等毒性中藥，為給臨床用藥提供安全的實驗依據(jù)，本文對腰痛寧膠囊進行了毒理學(xué)研究。  1 材料和方法  1.1 實驗材料 SD大鼠120150g，180220g由河北省實驗動物中央提供，合格證號:第04036。 腰痛寧膠囊，由承德中藥團體提供，批號:20000920。實驗前用蒸餾水配成不同濃度的混懸液灌胃使用。  1.2 實驗方法 1.2.1 大鼠LD50 的測定  選用SD大鼠，經(jīng)由預(yù)實驗發(fā)現(xiàn)雌、雄大鼠口服腰痛寧膠囊的急性毒性反應(yīng)差異很大，因此將雌、雄大鼠分別分組實驗。將雌性SD大鼠分11

4、50.00，977.50，830.90，706.20，600.30，510.03及433.707個組，組間劑量比為10.85;將雄性SD大鼠分成8290.00，6800.00，5580.00和4570.00mg/kg4組，組間劑量比為10.82，每組10只，體重180220g;禁食不禁水12h，根據(jù)預(yù)先設(shè)計的劑量，按體重灌胃給藥1次，給藥體積為20ml/kg，給藥后觀察即刻及逐日動物存活情況及一般表現(xiàn)，連續(xù)2周。記實動物死亡數(shù)，死亡動物立刻尸檢，如發(fā)現(xiàn)有肉眼可見的病理改變時，做病理檢查。用DAS軟件，按Bliss法計算LD50 。 1.2.2 SD大鼠的長期毒性實驗  將大鼠按性別和

5、體重隨機分成5組，空缺對照組和A、B、C、D腰痛寧膠囊組，A組（300mg/kg）和B組（150mg/kg）每組40只大鼠，C組（75mg/kg）和D組（37.5mg/kg）每組30只大鼠，雌雄各半，給藥體積為l ml/100g體重，各組均灌胃給藥，每周灌胃6d，對照組灌胃等體積蒸餾水，連續(xù)給藥180d，給藥前及給藥期間每周稱動物體重1次，并按均勻體重調(diào)整給藥劑量。實驗期間天天觀察大鼠一般狀態(tài)、體征、攝食量、飲水及糞便狀況。每周稱體重、攝食量1次，了解對動物體重和進食的影響。給藥90d，于末次給藥后24h，空缺對照組、A組和B組各抽取大鼠10只（雌、雄各5只）、給藥180d，于末次給藥后24h

6、空缺對照組和各給藥組各抽取14只大鼠（雌、雄各7只）、停藥后30d各組抽取6只大鼠（雌、雄各3只），用烏拉坦麻醉，從腹主動脈取血，檢查血液學(xué)和血液生化學(xué)指標。血液學(xué)檢查項目為:血色素（Hb）、血小板（PLT）、紅細胞計數(shù)（RBC）、網(wǎng)織紅細胞計數(shù)、白細胞計數(shù)（WBC）、白細胞分類（DC）、凝血時間。血液生化學(xué)檢查項目為:天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)換酶（ALT）、堿性磷酸酶（ALP）、尿素氮（BUN）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、血糖（GLU）、總膽紅素（T-BIL）、肌酐（Crea）、總膽固醇（T-CHO）。取血后，將各組動物正法，立刻剖取動物腦、心、肝、脾、肺、腎、胸

7、腺、甲狀腺、腎上腺、子宮卵巢、睪丸、前列腺稱重，根據(jù)體重計算器官重量系數(shù)。并取心、肝、腎、脾、肺、腦、腎上腺、甲狀腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮、前列腺等臟器進行肉眼觀察后用10%的甲醛溶液浸泡固定，作組織切片，H-E染色，光鏡下檢查組織病理學(xué)變化。  2 實驗結(jié)果 2.1 大鼠的急性毒性  SD大鼠口服腰痛寧膠囊后幾分鐘內(nèi)泛起激惹現(xiàn)象，隨后呼吸急促，流涎，全身抽搐，四肢強直，驚厥，雌性大鼠在灌胃后5145min之間死亡，均勻死亡時間為（38.28±43.47）min，LD50 為803.85mg/kg，95%置信限為726.05889.99mg/kg。雄性大鼠

8、在灌胃后5135min內(nèi)死亡，均勻死亡時間為（52.45±37.36）min，LD50 為6158.95mg/kg，95%置信限為5669.256690.94mg/kg。死亡大鼠立刻尸檢，未發(fā)現(xiàn)肉眼可見顯著病理改變，結(jié)果見表1。表1 雌性SD大鼠經(jīng)口急性毒性實驗。2.2 SD大鼠的長期毒性實驗 2.2.1 腰痛寧膠囊對大鼠一般情況的影響 在腰痛寧膠囊連續(xù)給藥期間，給藥開始3周內(nèi)，各給藥組大鼠泛起激惹反應(yīng)，神經(jīng)高度緊張，只要有小的刺激，即可產(chǎn)生豎立反應(yīng)。3周后此現(xiàn)象消失。各給藥組與對照組比較動物的流動、體重、攝食量、大便和毛發(fā)光澤等相似，未發(fā)現(xiàn)異常情況。A組給藥第一周死亡3只大鼠，給藥

9、全程共死亡8只大鼠（死亡率20%），B組給藥第1，2周大鼠各死亡1只，全程共死亡6只（死亡率15%），C組死亡1只（死亡率3.3%），D組死亡2只（死亡率6.6%），空缺對照組死亡0只，肉眼尸檢未見臟器異常。  表2 雄性SD大鼠經(jīng)口急性毒性實驗（略） 2.2.2 腰痛寧膠囊對大鼠體重增長的影響 實驗結(jié)果見表36。表3 腰痛寧膠囊對大鼠體重的影響（略）表4 腰痛寧膠囊對大鼠體重的影響（略） 表5 腰痛寧膠囊對大鼠體重的影響（略）表6 腰痛寧膠囊對大鼠體重的影響（略） 從表2表5可見，腰痛寧膠囊4個劑量對大鼠連續(xù)給藥不同時間的體重，與空缺對照組比較，其差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P值均>0

10、.05）。表明，腰痛寧膠囊連續(xù)用藥180d，對大鼠的生長發(fā)育（體重增長）無毒性影響。 2.2.3 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥對大鼠血象的影響 實驗結(jié)果見表7，表8。表7 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥3個月對大鼠血象的影響（略）表8 腰痛寧膠囊連續(xù)給藥6個月對大鼠血象的影響（略） 2.2.4腰痛寧膠囊對大鼠重要器官組織病理形態(tài)的影響  腰痛寧膠囊連續(xù)給藥90d、180d和恢復(fù)期各殺取大鼠10，14和6只，雌雄各半，將各給藥劑量組和空缺對照組大鼠的心、肝、腎、脾、肺、腎上腺、甲狀腺、胸腺、睪丸、附睪、卵巢、子宮、腦、前列腺在相同部位取材，用10%甲醛溶液固定。切片，HE染色，進行病理學(xué)檢查。檢查結(jié)論如下:

11、給藥90d時，A組5只大鼠肝細胞脂肪變性;2只大鼠腎臟近曲小管上皮細胞高度水腫，輕度脂肪變性，管腔變大，腎小管內(nèi)可見紅細胞管型，腎間質(zhì)少量炎細胞浸潤。B組3只大鼠肝細胞脂肪變性，1只大鼠腎濁腫，其余各臟器未見顯著異常改變。給藥180d時，A組、B組和D組各臟器均正常，未見顯著病理改變;C組2只大鼠肝細胞輕度脂肪變性，其余臟器未見顯著病理改變，恢復(fù)期時大鼠體重、攝食量、流動、外周血象、重要器官臟器系數(shù)均正常，生化指標檢查，各給藥組同空缺對照組比較肌酐升高，P值均<0.001。病理學(xué)檢查，空缺對照組和各給藥劑量組大鼠各臟器未發(fā)現(xiàn)病理改變。  3 討論 3.1  本實驗選用

12、SD大鼠對腰痛寧膠囊進行了急性毒性實驗，測定了口服該藥的LD50 值。實驗發(fā)現(xiàn)，大鼠急性毒性表現(xiàn)非常顯著的性別差異，雄性大鼠口服腰痛寧膠囊的LD50 比雌性高7.66倍。大鼠在代謝和毒性反應(yīng)上與人類較為接近3 ，臨床使用中應(yīng)留意該藥急性毒性的性別差異。腰痛寧膠囊是由馬錢子、土鱉蟲、全蝎、川牛膝等十幾味中藥組成的復(fù)方制劑。其中馬錢子中的有效成分之一士的寧既是腰痛寧膠囊的有效成分，也是其有毒成分4 。據(jù)文獻5 報道，士的寧對大鼠的急性毒性有顯著的性別差異，雄性大鼠的LD50 大于雌性大鼠。大鼠口服腰痛寧膠囊表現(xiàn)出的性別差異有可能是所含士的寧所致，進一步的根占有待研究。一般來講，動物毒性的性別差異機

13、理可能是性激素影響藥物代謝轉(zhuǎn)化的結(jié)果。至于腰痛寧膠囊對大鼠泛起的這種現(xiàn)象的原因和機理也有待于進一步探討。 3.2  SD大鼠口服腰痛寧膠囊的長期毒性試驗中，以300，150，75，37.5mg/kg4個劑量（分別為臨床成人用量的10，5，2.5，1.25倍），對大鼠灌胃給藥，與灌胃蒸餾水的空缺對照組比較，開始給藥前3周各給藥組大鼠產(chǎn)生激惹現(xiàn)象，以后激惹現(xiàn)象逐漸消失，泛起適應(yīng)耐受增強作用。長期大劑量服用腰痛寧膠囊，對動物的一般狀況、體重、攝食量、流動、外周血象、主要臟器的重量系數(shù)檢查無非常顯著影響，對腎功能有一定的影響并且恢復(fù)較慢，但對腎臟組織結(jié)構(gòu)無顯著改變。建議腎功能不好的患者慎用。通過對腰痛寧膠囊180d用藥過程中各項指標的觀察，未發(fā)現(xiàn)長期毒性實驗觀察指標有性別差異的毒性表現(xiàn)，綜