雙黃燒燙傷噴霧劑對大鼠燙傷治療作用的研究

1、雙黃燒燙傷噴霧劑對大鼠燙傷治療作用的研究    2011-12-20 14:31:21   論文代寫   作者：王東風李寧張波       摘要 目的：考察雙黃燒燙傷噴霧劑的主要藥效。方法：采用大鼠深度燙傷模型，創(chuàng)面應用低、中、高3個不同濃度的雙黃燒燙傷噴霧劑，通過傷后不同的時間點取材，檢測燒傷創(chuàng)面羥脯氨酸（OHP）含量、創(chuàng)面含水量、創(chuàng)面愈合率、愈合天數(shù)和組織病理變化，以燒傷噴劑為陽性對照藥，觀察低、中、高3個不同濃度的雙黃燒

2、燙傷噴霧劑對大鼠深度燒傷創(chuàng)面愈合的影響。結果：創(chuàng)面外用雙黃燒燙傷噴霧劑中、高濃度可以降低燒傷創(chuàng)面水腫，增加創(chuàng)面OHP含量、促進肉芽組織生長，縮短愈合天數(shù)。結論：中高濃度雙黃燒燙傷噴霧劑可增強膠原合成，促進上皮細胞增殖，減輕創(chuàng)面早期水腫，加速燒傷創(chuàng)面愈合。關鍵詞 雙黃燒燙傷噴霧劑；大鼠；治療作用中圖分類號 R284 文獻標識碼B文章編號1673-7211（2009）01（b）-069-02雙黃燒燙傷噴霧劑是新開發(fā)的應用于燒燙傷的中藥復方制劑，其主要成分為大黃、黃柏、麝香、血竭等，本實驗在大鼠深度燙傷的創(chuàng)面應用該藥，通過對創(chuàng)面皮膚的羥脯氨酸含量、創(chuàng)面的含水量的檢測和創(chuàng)面愈合率、愈合天數(shù)、病理形態(tài)學

3、的觀察，研究雙黃燒燙傷噴霧劑對燒燙傷創(chuàng)面愈合的治療作用。1 材料與方法1.1 材料1.1.1藥品雙黃燒燙傷噴霧劑：由錦州醫(yī)學院藥物研究所研制，規(guī)格為40 ml/瓶（批號：060301；060304）；燒傷噴霧劑：由華北藥業(yè)集團制劑有限公司生產(chǎn)，國藥準字Z13020275， 規(guī)格為40 ml/瓶（批號：060101）。1.1.2試劑羥脯氨酸試劑盒（南京建成生物技術研究所）。1.1.3 儀器751紫外分光光度計：日本島津，UV-1601；顯微鏡：日本奧林巴斯；臺式高速冷凍離心機：美國雅培；電熱恒溫水浴箱：重慶實驗設備廠。1.1.4 實驗動物一級SD大鼠，體重220250 g，來源：錦州醫(yī)學院實驗動

4、物中心提供。1.2 方法1.2.1動物模型及分組SD大鼠，體重220250 g，10%水合氯醛腹腔麻醉（3 ml/kg），脫毛。次日，同樣方法麻醉，背部置于80水溫中燙15 s，面積約10% TBSA，制成深度燙傷模型，經(jīng)病理證實1。傷后立即腹腔注射4 ml乳酸林格液。大鼠致傷后分籠飼養(yǎng)，自由飲食。燙傷后大鼠隨機分成：模型組(80只)：創(chuàng)面使用0.9%生理鹽水。陽性對照組(80只)：燒傷噴霧劑，6 ml/（kg·d）。低劑量組(80只)：6 ml/（kg·d）相當于98.1 mg/（kg·d）生藥。中劑量組(80只)：6 ml/（kg·d）相當于196.

5、2 mg/（kg·d）生藥。高劑量組(80只)：6 ml/（kg·d）相當于392.4 mg/（Kg·d）生藥。各組1 d給藥4次，每次噴3次。各組創(chuàng)面用藥期間如有感染，均給予抗生素治療。1.2.2 取材于傷后6 h、1、2、3 d取材創(chuàng)面組織標本測定創(chuàng)面皮膚的含水量，每個組每個時間相取10只大鼠，于傷后7、14、21 d觀察并描繪記錄創(chuàng)面皮膚的愈合率，于傷后1、3、5、7、14、21 d取創(chuàng)面組織標本測量皮膚組織的羥脯氨酸含量，創(chuàng)面皮膚標本放在-80下保存，病理標本固定于10%甲醛溶液中。每組每個時間相取10只大鼠。1.2.3 檢測指標及方法創(chuàng)面愈合時間和創(chuàng)面愈

6、合率：每組10只大鼠，每天觀察創(chuàng)面愈合情況，以完全上皮覆蓋作為創(chuàng)面愈合時間的依據(jù)。每組于傷后7、14、21 d采用透明膠片描記加稱重法測定局部創(chuàng)面面積2，按下列公式計算:創(chuàng)面愈合率=(原始創(chuàng)面面積-未愈合創(chuàng)面面積)/原始創(chuàng)面面積×100%。創(chuàng)面含水量測定：采用干濕比法3。取創(chuàng)面組織，去除痂皮及皮下組織，精確稱重后，剪碎，80烤箱中烘烤72 h后稱量組織干重。燒傷創(chuàng)面含水量=(濕重-干重)÷濕重×100%。病理組織學檢查：標本常規(guī)石蠟包埋切片,行HE染色,進行光鏡組織學觀察。燒傷創(chuàng)面OHP含量檢測：應用化學比色法測定OHP含量，具體操作按測試盒說明書進行。1.2.4

7、統(tǒng)計學分析實驗所得數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差（x±s）表示，用t檢驗比較組間差異。2結果2.1 燒傷創(chuàng)面組織含水量的變化實驗結果提示，雙黃燒燙傷噴霧劑有明顯抑制創(chuàng)面水腫的作用，在傷后的早期（水腫高峰階段），起減輕水腫的作用尤為明顯（P0.05），見表1。表1 燒傷創(chuàng)面組織含水量百分比變化(%)（x±s，n=10）與模型組相比，*P0.01，#P0.052.2 燒傷創(chuàng)面愈合率的變化（表2）表2 傷后不同時間創(chuàng)面愈合率的比較(%)（x±s，n=10）與模型組相比，*P0.01，#P0.052.3 燒傷創(chuàng)面愈合時間變化（表3）表3 燒傷創(chuàng)面愈合時間的變化（x

8、7;s，n=10）與模型組相比，*P0.01，#P0.052.4 燒傷創(chuàng)面羥脯氨酸含量的變化傷后創(chuàng)面的變化顯示，實驗組羥脯氨酸含量在傷后7、14 d均顯著高于模型組（表4）。提示實驗組成纖維細胞增生，膠原合成增加，創(chuàng)面愈合加強。表4 燒傷創(chuàng)面羥脯氨酸含量變化（g/mg）（x±s，n=10）與模型組相比，#P0.05，*P0.012.5 創(chuàng)面病理形態(tài)學觀察病理切片見傷后35 d組織生長不明顯，大量組織變性壞死,胞漿濃縮,核固縮,真皮層可見大量炎性細胞浸潤。實驗組傷后714 d成纖維細胞，纖維細胞及毛細管數(shù)量均呈增加趨勢，至傷后21 d成纖維細胞及毛細血管數(shù)量開始下降，纖維細胞數(shù)量則繼續(xù)

9、增加, 可見鱗狀上皮爬生，對照組傷后7 d及14 d成纖維細胞、纖維細胞及毛細血管數(shù)量也呈增加趨勢,但數(shù)量明顯少于實驗組。3 討論深度燒傷創(chuàng)面修復過程中所形成的結締組織主要成分是成纖維細胞及其產(chǎn)生的膠原蛋白，膠原蛋白構成燒傷創(chuàng)面基質(zhì)，為創(chuàng)面上皮化提供一個支架4。創(chuàng)面愈合過程中膠原代謝的狀況可反映創(chuàng)面愈合的情況，羥脯氨酸在膠原中所占比例相對恒定(大約12.15%)5。測定羥脯氨酸含量可間接反映膠原的含量。本實驗檢測結果表明，實驗組及模型組羥脯氨酸含量傷后第3天開始升高，至第14天達到峰值，隨后降低。在傷后第7天和第14天實驗組的羥脯氨酸含量明顯高于模型組。提示雙黃燒燙傷噴霧劑可以促進燒傷創(chuàng)面的膠

10、原蛋白的合成，促進創(chuàng)面愈合，與形態(tài)學的變化相一致。燒傷后微循環(huán)通透性增加可導致體液滲出和組織水腫。淤滯帶微循環(huán)障礙的轉(zhuǎn)歸，決定著燒傷局部損傷程度。如果微循環(huán)淤滯加重，血栓形成增多，造成局部組織缺血缺氧，影響細胞代謝，加重組織損害，使創(chuàng)面加深；如果微循環(huán)改善，阻止血栓形成，則可局部損傷減輕，范圍縮小6。故減輕燙傷后局部組織水腫，對促進創(chuàng)面早期愈合有重要意義。本實驗中我們發(fā)現(xiàn)在燒傷后1 d和2 d，實驗組燒傷創(chuàng)面組織含水量顯著低于燒傷模型組，提示雙黃燒燙傷噴霧劑在燒傷早期可以減輕燒傷創(chuàng)面的組織水腫程度。燒傷創(chuàng)面修復以創(chuàng)面完全上皮化作為創(chuàng)面愈合的終點，因此表皮細胞分化、增殖和遷移是燒傷創(chuàng)面愈合過程中

11、最重要的環(huán)節(jié)。本實驗在病理切片中觀察到傷后實驗組燒傷創(chuàng)面表皮細胞增殖和遷移非?；钴S，明顯早于對照組，說明雙黃燒燙傷噴霧劑可加速創(chuàng)面上皮化,促進創(chuàng)面愈合。燒傷后創(chuàng)面愈合時間和創(chuàng)面愈合面積百分比是評價創(chuàng)面愈合的一個綜合性指標。燒傷創(chuàng)面愈合過程包括炎癥反應、細胞增殖、結締組織形成、創(chuàng)面收縮和創(chuàng)面重新塑造；且這些過程相互交叉，不可分割，共同參與創(chuàng)面愈合，其中細胞增殖起著最重要的作用。在本實驗中雙黃燒燙傷噴霧劑可明顯提高創(chuàng)面愈合率，縮短創(chuàng)面愈合時間，加速創(chuàng)面愈合。本實驗所采用的OHP測定、病理形態(tài)學觀察等客觀可靠的檢測指標均提示雙黃燒燙傷噴霧劑具有良好的促進創(chuàng)面愈合的作用，因此復方中藥制劑雙黃燒燙傷噴霧

12、劑是個具有廣闊應用價值的燒傷創(chuàng)面外用藥。參考文獻1馮世杰,花蘭女,金曙雯,等.大鼠燙傷模型的制作J.上海第二醫(yī)科大學學報,1995,15(3):195-1971.2孫同柱,付小兵,顧小曼,等.重組人表皮生長因子促進兔燙傷創(chuàng)面愈合的實驗研究J.實驗動物科學與管理,2000,10:218-2251.3Neuman RE,Logan MA.Thedeermination of hydroxyproline J.Biol Chem,1950,184:2991.4Lidblad WJ,Kormos AI.Collagen:a multifunctional family of proteinsJ.Rec

13、onstruct microsurgery,1991,7:37-431.5Dimicco MA,Waters SN, Akeson WH, et al. Interative articular cartilage repair:dependence on developmental stage and collagen metabolism J.Osteoarthritis and Cartilage,2002,10:218-2251.6Dmeling RH, Mazess RB, Witt RM, et al. The study of burn wound edema using dichromatic adsorptiometry J. J Trauma,1978,18(2):1241.（收稿日期：2008-09-17）   &