牛結(jié)核病提純結(jié)核菌素變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)

1、牛結(jié)核病提純結(jié)核菌素變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)1. 原理 機(jī)體受到結(jié)核桿菌刺激時(shí)，導(dǎo)致 T 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)?淋巴母細(xì)胞， 并進(jìn)而增殖分化為致敏淋巴細(xì)胞， 使機(jī)體致敏； 以后如再次接觸結(jié)核菌時(shí)（結(jié)核菌素），致敏淋巴細(xì)胞即釋 放出各種淋巴因子，一方面使機(jī)體表現(xiàn)特異性的細(xì)胞免疫， 而另一方面則發(fā)生遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)，出現(xiàn)以單核細(xì)胞浸潤， 以及由于巨噬細(xì)胞釋出溶酶體酶（水解酶）和淋巴細(xì)胞釋出 淋巴毒素所引起的組織環(huán)死為特征的病理現(xiàn)象。皮內(nèi)注射提純結(jié)核菌素（PPD于正常動(dòng)物，不出現(xiàn)顯著的局部炎癥反應(yīng)。相反，如果將其注入曾感染結(jié)核病而致敏的 動(dòng)物，便發(fā)生遲發(fā)型超敏感性應(yīng)答，在幾小時(shí)之內(nèi)注射局部 不出現(xiàn)肉眼的或組織學(xué)的變化，

2、但以后血管擴(kuò)張，通透性增 加，因而出現(xiàn)紅斑和水腫，腫脹硬固。組織檢查，這種病變 和典型的急性炎癥反應(yīng)不同的是，浸潤細(xì)胞主要是單核細(xì) 胞，即巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞，雖然反應(yīng)初期也出現(xiàn)短暫的嗜 中性白細(xì)胞的積聚。注射后 24-72 小時(shí)反應(yīng)程度最強(qiáng)，以后 逐漸消退。非常嚴(yán)重的反應(yīng)，在注射局部可發(fā)生壞死。2. 器材與試劑 酒精棉、卡尺、 1-2.5ml 注射器、針頭、牛型 提純結(jié)核菌素。3. 操作方法3.1 注射部位及術(shù)前處理：在頸側(cè)中部上 1/3 處剪毛（或提 前一天剃毛），三個(gè)月以內(nèi)的犢牛，也可在肩胛部進(jìn)行，直 徑約10cm,用卡尺測量術(shù)部中央皮皺厚度，作好記錄。如術(shù) 部有變化時(shí)，應(yīng)另選部位或在對側(cè)

3、進(jìn)行。3.2 注射劑量： 不論大小牛只， 一律皮內(nèi)注射 1 萬國際單位。 即將牛型提純結(jié)核菌素稀釋成每毫升含 1 0萬國際單位后， 皮內(nèi)注射 0.1ml 。如用 2.5ml 注射器，應(yīng)再加等量注射用水 皮內(nèi)注射 0.2ml 。凍干菌素稀釋后應(yīng)當(dāng)天用完。3.3 注射方法：先以 75%酒精消毒術(shù)部，然后皮內(nèi)注入定量 的牛型提純結(jié)核菌素，注射后局部應(yīng)出現(xiàn)小泡，如注射有疑 問時(shí)，應(yīng)另選 15cm 以外的部位或?qū)?cè)重作。3.4 注射次數(shù)和觀察反應(yīng)： 皮內(nèi)注射后經(jīng) 72 小時(shí)判定， 仔細(xì) 觀察局部有無熱痛、腫脹等炎性反應(yīng)，并以卡尺測量皮皺厚 度，作好記錄。對疑似反應(yīng)牛應(yīng)即在另一側(cè)以同一批菌素同 一劑量進(jìn)行

4、第二回皮內(nèi)注射，再經(jīng) 72 小時(shí)后觀察反應(yīng)。如 有可能，對陰性和疑似反應(yīng)牛，于注射后 96和 120 小時(shí)再 分別觀察一次，以防個(gè)別牛出現(xiàn)較晚的遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。3.5 結(jié)果判定：3.5.1 陽性反應(yīng)：局部有明顯的炎性反應(yīng)。皮厚差等于或大于4mm以上者，其記錄符號為（+）。對進(jìn)出口牛的檢疫， 凡皮厚差大于2mm者，均判為陽性。3.5.2 疑似反應(yīng)：局部炎性反應(yīng)不明顯， 皮厚差在 2.1-3.9mm 間，其記錄符號為（）。3.5.3陰性反應(yīng)：無炎性反應(yīng)。皮厚差在2mm以下，其記錄符號為（ - ）。3.6 凡判為疑似反應(yīng)的牛只， 于第一次檢疫 30天后進(jìn)行復(fù)檢， 其結(jié)果仍為可疑反應(yīng)時(shí)， 經(jīng) 30-4

5、5 天后再復(fù)檢， 如仍為疑似， 應(yīng)判為陽性。附：感染禽型結(jié)核菌或副結(jié)核菌牛群的診斷方法 如果牛群有感染禽型結(jié)核、副結(jié)核菌病可疑、或免疫過副結(jié) 核苗時(shí)，可以應(yīng)用牛、禽兩型提純結(jié)核菌素的比較試驗(yàn)進(jìn)行 診斷（副結(jié)核分枝桿菌與禽結(jié)核分枝桿菌有共同抗原）。其 方法和判定如下：1. 注射部位及術(shù)前處理：將牛只編號后在同一頸側(cè)的中部選兩個(gè)注射點(diǎn)，一點(diǎn)在上 1/3 處，一點(diǎn)在下 1/3 處。剪毛（或 提前一天剃毛）直徑約10cm,用卡尺測量術(shù)部中央皮皺厚度， 作好記錄。兩個(gè)注射點(diǎn)之間的距離不得少于10cm,注射點(diǎn)距離頸項(xiàng)頂端和頸靜脈溝也不得少于10cmo如術(shù)部皮膚有變化時(shí),選對側(cè)頸部進(jìn)行。2. 注射劑量：在上

6、1/3處皮內(nèi)注射禽提純結(jié)核菌素0.1ml （每毫升含 25000 國際單位）,在下 1/3 處皮內(nèi)注射牛型提純結(jié) 核菌素 0.1ml （每毫升含 10 萬國際單位）。不論大小牛只, 注射劑量相同。如用 2.5ml 注射器注射劑量（ 0.1ml ）不易 掌握,應(yīng)加等量生理鹽水或注射用水稀釋后皮內(nèi)注射 0.2ml , 凍干菌素稀釋后應(yīng)當(dāng)天用完。3. 注射方法： 以 75%酒精消毒術(shù)部， 然后皮內(nèi)注射定量的牛、 禽兩種提純結(jié)核菌素，注射后局部應(yīng)出現(xiàn)小包，如注射有疑 問時(shí)，可另選 15cm 以外的部位或?qū)?cè)頸部重作。4. 觀察反應(yīng)：注射后經(jīng) 72小時(shí)判定（可于 48和96 小時(shí)各 進(jìn)行一次判定） 。詳

7、細(xì)觀察和比較兩種菌素炎性反應(yīng)的程度。 并用卡尺測量其皮厚，分別計(jì)算出牛、禽兩種菌素皮內(nèi)變態(tài) 反應(yīng)的皮厚差，然后比較二者之間的皮差（如果增加了 48 和 96 小時(shí)的判定時(shí)間，即可比較出兩種菌素反應(yīng)消失的快 慢）。5. 判定結(jié)果：5.1 牛型提純結(jié)核菌素反應(yīng)大于禽型提純結(jié)核菌素反應(yīng)，兩者皮差在2mm以上,判為牛型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)陽 性牛。記錄符號為（M+。對已經(jīng)定性的結(jié)核牛群。少數(shù)牛 即使牛、禽兩型之間的皮差在2mm以下，或牛型提純結(jié)核菌素反應(yīng)略小于禽型提純菌素的反應(yīng)（不超過2mm，也應(yīng)判定牛結(jié)核菌素反應(yīng)牛（但牛型提純結(jié)核菌素本身反應(yīng)的皮厚 差應(yīng)在2mm以上）。5.2 禽型提純結(jié)核菌素反應(yīng)大于牛型提純結(jié)核菌素的反應(yīng)， 兩者的皮差在2mm以上,判為禽型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反 應(yīng)陽性牛。其記錄符號為（A+）。對已經(jīng)定性的副結(jié)核菌或 禽結(jié)核菌感染的牛群，即使禽、牛兩型提純結(jié)核菌素之間的反應(yīng)皮差小于2mm或禽型提純結(jié)核菌素反應(yīng)