幾種生物活性物質體外抗氧化能力評價技術的研究_圖文

1、第38卷第3期2802009年5月衛(wèi)生研究JO U R N A L O F H Y G I E N E R ES EA R C HV01.38N o.3M ay2009文章編號:1000-8020(200903.02.04幾種生物活性物質體外抗氧化能力評價技術的研究劉小兵樸建華1田園中國疾病預防控制中心營養(yǎng)與食品安全所,北京100050論著摘要:目的研究生物活性物質體外抗氧化能力評價方法,應用體外理化環(huán)境下建立起來的評價方法對受試物進行初步抗氧化能力評估。方法聯(lián)合應用2,2.連氮.雙.(3.乙基苯并噻唑.6.磺酸二銨鹽(AB T S法與鐵離子還原/抗氧化能力測定法(r aA P法用于生物活性物

2、質體外抗氧化能力研究。在A B T S法中。使用紫外可見分光光度計734nm波長下測定以槲皮素、姜黃素、D L-a.生育酚和原花青素等為代表的生物活性物質;在FR A P法中,運用酶標儀,595nm波長處測定同樣受試物的抗氧化能力。結果A B TS法:槲皮素和姜黃素的抗氧化活性T E A C值分別約為2.02和0.50;而l g D L-a.生育酚、原花青素清除自由基的能力相當于2.06m m ol、2.897m m ol的Trol ox清除自由基的能力;F RA P法:抗氧化活性以1.O m m ol/L FeS04為參考標準,槲皮素、姜黃素和Tr ol ox摩爾當量約為5.73、1.18和

3、2.09;而D L-a.生育酚和原花青素抗氧化活性分別是207.7m g、156.36r ag。結論A B TS法與FR A P法聯(lián)合應用,操作簡便、結果可靠,尤其適宜作為生物活性物質體外抗氧化能力的評價方法。關鍵詞:生物活性物質氧化應激中圖分類號:R151.2Q591A B T S法FR A P法抗氧化能力文獻標識碼:AR ese a r ch on t he eval uat i on m et hods f or ant i oxi dant capaci t yof s ever al bi oact i ve s ubs t ances/n vi t r oLI U X i aobi

4、 ng,P I A O Ji anhua,TI A N Y ua nI nst i t ut e of N u t r i ti on a nd F oo d Saf et y,C hi nes e C ent er f or D i seas e C ont r ol a nd Pr event i on,B eij i ng100050,C h i naA bst r act:O bj ect t ve T o s t udy t he eval u at i on m e t h ods f or ant ioxi dant capaci t y of bioacti ve s ubs

5、tB nce i n礎陽,an d t O appl y t he m e t h ods w h i ch i s es t abl i s hed i n physi eochem i ea l envi r onm ent i n or der t o g i v e t he pr eli m i nar y as se韶,m ent of t e st subj e ct s.M et hods7r he co m bi ne d appli cat i on of A B T S and F R A P m e t h ods i n t he as s es s m ent s.

6、us i ng t he U VV I Ss pect r ophot om e t er a nd t he aut oau al yzer r es pecti vel y t e at t he ant ioxi dant capaci t y of quer cet i n,cur cum i n,D L-a-t ocop her ol and pr ocyani di ne at734砌i n A B T S and at595nm i n F RA P.R es ul t s A B'I S:n地TEA C value8of quer cet i n and eur cu

7、m i n w e r e abou t2.02and0.50.19D L-a-t oeopher o l and an t hoc yani m w er e equi val ent t o2.06m m01.2.897m m ol of Tr o l ox i n s caven gi ngfr e e r adi cals ca pa ci t y.nu憎:U se d1.O m m ol/L FeS04粕t he r ef er ence st and ar d,qu er cet i n,eur cum i n and Tr olox equi v al ent m o l ar

8、about5.73,1.18a nd2.09.D L-a-t ocopher o l,ant i oxi dan t a ct i vi t y of pm an t hocyani di ns w e m 207.7m g and156.36r ag.C oncl us i on I t W a S s uppor t e d s upp or t t ha t co m bi ne d A B T S and F R A P m et hods.becau se of t hei r conv eni ent l y,and t h ei r r el ia ble r es u l t

9、s,es peci al l y i n appr o pr i at el y be us ed a s t he eval uat ion m e t h ods for an t i ox i dan t capaci t y of bi oact i ve s ubst ance訊v/l r o.K e y w ords:li i oact i ve f act or s,oxidat ive st r ess,A B TS,FR A P,ant i oxi dant eapaci t y人類和動物持續(xù)暴露在活性氧與促氧化劑中,很容易引起機體組織發(fā)生氧化應激,導致機體的代謝性功能紊亂以

10、及一系列的慢性疾病,如:癌癥、血脂異常等。大量的流行病學與臨床研究顯示。人群在消費富含天然生物活性物質的蔬菜和水果后,其所患有心血管疾病、糖尿病、癌癥等非傳染性疾病的風險將明顯降低乜J】。因此,食用一些富含具有抗氧化生物活性物質的功能性食品,以延緩或預防機體組織氧化應基金項目:國家科技支撐計劃項目(N o.2006BA D27801作者簡介:劉小兵,男,碩士研究生1通訊作者:樸建華,男。研究員激損傷的這種做法,已經得到了消費者和科學家們的廣泛認同H J】。然而,面對如此眾多的生物活性物質,如何才能準確、快速地做出辨別,這個問題已經擺在了科學家面前。最近20年,篩選評價生物活性物質抗氧化活性的方

11、法層出不窮,尤其是體外篩選評價方法,盡管其問還存在著由體外到體內研究的可行性爭議,但是圍繞著如何更好的篩選評價生物活性物質體外抗氧化能力的諸多方法均已得到了很好的建立與長足的發(fā)展。在目前,體外抗氧化能力評價實驗中,生物源性的紅細胞氧化溶血實驗與低密度脂蛋白(LD L氧化實驗等均被認為是研究自由基誘使細胞膜損傷與評價植物多酚類物質抗氧化能第3期劉小兵,等.幾種生物活性物質體外抗氧化能力評價技術的研究28l力的良好模型。同時,許多理化環(huán)境下建立起來的評價方法也越來越受到重視,已經建立起的方法。如:2,2.連氮.雙.(3.乙基苯并噻唑.6.磺酸二銨鹽法2,2-azi nobi s-(3. ethyl

12、 b enzo t hiazoli ne-6-sul f o ni c aci d一di am m oni um s al t,A BTS、l,1.二苯代苦基苯肼法2,2-di phenyl.1.pi cr yl hydr azyl,D PPH、鐵離子還原/抗氧化能力測定法Fer r i c r educi ng anti oxidant po w er, FB A P、氧自由基吸收能力測定法O xygen r adi ca l absor pt ion capaci t y,O R A C、化學發(fā)光法P hot oehem i hm i nes cence as sa y, PLC等;這些方

13、法特別適合進行大量生物活性物質體外抗氧化能力的快速篩選。但是,由于每種評價方法本身存在的缺陷,僅僅單獨使用種方法難以得出令人信服的結論。因此,本實驗在總結眾多文獻結論的基礎上,決定采用兩種基于不同原理的體外抗氧化能力評價方法對槲皮素、姜黃素、D L廿生育酚和原花青索等幾種生物活性物質進行體外抗氧化能力評價,應用的評價方法為A B TS法和FR A P法。l材料與方法1.1材料A B幅2,2.azi nobi s-(3-et hylbenzot hi azol ine.6.sul f oni c aci d-di am m on i u m sal t(Si gm a-A l dr i ch公司

14、;Tr ol ox6-hydr oxy一2,5,7, 8-t et ram ethyl chr om an-2-car boxyl i c ac i d(S i gm a.A l dr i c h公司;唧2,4,6-tripyridyl.s-triazine(Sigma-Aldr ich公司;DL廣口.生育酚(Al fa A e sa r公司;過硫酸鉀、硫酸亞鐵、冰醋酸、鹽酸、無水乙醇(北京化工廠;槲皮素、姜黃素(國藥集團化學試劑有限公司;原花青索(西安小草植物科技有限公司;六水合三氯化鐵、醋酸鈉(廣東汕頭西隴化工廠。以上所有試劑均為分析純,超純水用來配制試劑。U V-9100型紫外可見分光光

15、度計(北京瑞利分析儀器公司;M uli t i s k an M K3酶標儀;96孔微量滴定板等。1.2方法1.2.1A B T S法A B TS+自由基的制備"小1按照原始方法并略有改動,將5m l的7m m ol/L A B T S和88m的140m m ol/L過硫酸鉀混合,于室溫、避光的條件下反應,靜置過夜,最終形成A B T S+自由基儲備液。A B T S與過硫酸鉀的化學反應劑量是2:1,在反應體系中,A B TS氧化不完全使得體系更加趨于穩(wěn)定。儲備液在使用前,為了取得最佳反應條件,要求至少停留1216h;在使用時需用無水乙醇將其稀釋成A B TS+自由基工作液,兩工作液

16、的要求是30,734nm波長下,吸光度為(0。70±0.02。Tr ol ox系列濃度溶液配制準確稱取Tr ol ox0.01259,然后使用無水乙醇依次將其配制成80、120、200、300、400、500、600、700和800pm ol/L的系列濃度溶液備用。受試物系列濃度溶液配制槲皮素、姜黃素、D L廿生育酚和原花青素按照預實驗結果,將其配成濃度在101000nol/L和0.25l i ng范圍內的適宜系列濃度溶液,并要求在各濃度下具有20%一80%清除自由基的效能?？寡趸钚缘臏y定取A B T S+自由基工作液4m l置于10m l具塞比色管中,分別加入80出的Tr ol

17、ox或其它受試物溶液。均勻振蕩10s,300C水浴反應6ra i n,測定其各自吸光度值,平行樣3支,取平均值計算。測定結果以受試物清除自由基的能力與Trol ox清除自由基的能力相對比得到,單位為Tm l ox 抗氧化活性當量(Tr ol ox equ i val ent anti oxidant capaci t y,TEA C,即I m r aol/L或1m S/nd受試物清除自由基的能力相當于T r ol ox 自由基清除能力的微摩爾數。受試物清除自由基能力=100×(1-A。/A。;TE A C=受試物清除自由基能力/T r ol ox清除自由基能力;A。是水浴反應6m i

18、 n后,測定反應混合液的吸光度;A o是A B TS+自由基工作液的吸光度值。1.2.2F R A P法FR A P工作液的配制睜1:按照原始文獻并略有改動,300m m ol/L醋酸鹽緩沖液(0.319三水合醋酸鈉+ 1.6m l冰醋酸+超純水至100m l,pH3.6,l O m m ol/L1PTZ的40m m ol/L鹽酸溶液。20m m ol/L FeCl3溶液。以10:l:1的體積比(300m m ol/L醋酸鹽溶液25m l+lO m m oi/L珊溶液40m m ol/L鹽酸溶液2.5m l+20m m oV L FeC h溶液2.5m1混合,加熱至37備用。FeSO.系列濃度

19、溶液的配制:準確稱取F e S O,0,01399,然后使用超純水將其依次配制成50、100、150、200、300、400、800、1600肛m ol/L的系列濃度溶液備用。受試物系列濃度溶液配制:槲皮素、姜黃索、D L廿生育酚和原花青素按照預實驗結果。配成50.1200/um ol/L和0.2. 1l ng范圍內的適宜系列濃度溶液,并要求在各濃度下具有20%一80%清除自由基的效能?？寡趸钚缘臏y定:在96孔的酶標板每孔中,依次加入300va的FR A P工作液,20一配制的FeS04或受試物溶液,20m 的超純水用以調勻孔中溶液,然后放置于37水浴鍋中加熱反應8m i n后,酶標儀595

20、nm下測定吸光度,平行樣3支,取平均值計算。測定結果以1.0m m ol/L FeS04為參考標準,受試物抗氧化活性則以達到同樣吸光度所對應的FeS04的毫摩爾數表示。1.3統(tǒng)計分析采用統(tǒng)計學軟件SPSS13.0對數據進行處理,計算平行樣吸光度,并得到回歸方程。2結果2.1A B T S法測定受試物抗氧化活性本實驗應用A B TS法分別測定槲皮素、姜黃素、D L儼生育酚和原花青素,實驗進行了三次,實驗結果穩(wěn)定,變化不具有統(tǒng)計學意義(P<0.05。從實驗得出T r ol ox抗氧化能力測定標準曲線,曲線方程是:y=92.661|f+2.29,R2=0.999。(見表1裹1受試物體外總抗氧化

21、能力A B TS法測定情況T abl e1T h e t ot al ant t oxi dl t c a p a dt te s o f pr epar edbi oac t i v e s l lbs t all O日m eas ured i n A B T S m et h od結果顯示:槲皮素、姜黃素的抗氧化活性TE A C值分別約為2.02、0.50;而l g D L廣*生育酚清除自由基的能力相當于2.06r et ool的T r ol ox清除自由基的能力、l g原花青素清除自由基的能力相當于2.897m m ol的Trol ox 清除清除自由基的能力。282衛(wèi)生研究第38卷2.2

22、FR A P法測定受試物抗氯化活性在本實驗中,FB A P法依次測定槲皮素、姜黃素、D【,a-生育酚、原花青索和Tr ol ox的總抗氧化能力,實驗進行了3次,實驗結果穩(wěn)定,變化無統(tǒng)計學意義(P>0.05。實驗首先得出FeS04抗氧化能力標準曲線,曲線方程是:Y=I.095X+0. 002。R2=0.999。結果由表2顯示:槲皮素、姜黃素和T r ol ox的抗氧化活性以1.O m m o/L FeS04為參考標準,槲皮素摩爾當量約為5.73、姜黃素1.18、T r ol ox2.09;而D I廣a-生育酚以及原花青素的抗氧化活性分別是207.7m g、156.36m g相當于1.O m

23、 m ol/L FeS04。裹2受試物體外總抗氯化能力FR A P法測定情況T abk2T h e t o t a l t m fl o'd dt m t c apac i t i es o f pr epar edbi oac fl v e s u b$lBnc皓m es s ii/-e d I n FR A P m e t ho d3討論A B TS法由于操作簡便、快捷、結果重復性較好,比較適合大批量樣本的體外抗氧化能力測定,所以已經成為一種廣為應用于體外抗氧化能力評價的方法。但是,該法也有其不足, T E A C值有時略有變異,而個中原因又是多樣的H“”J。M A R I K E

24、 N等的研究認為T EA C值很大程度上依賴其反應條件,即:待測物質濃度既不可以過高,也不可以過低,過高可以造成反應吸光度值增加,過低又可使得反應吸光度降減低,并且指出反應時間對于測定結果的重要性,這些都會影響實驗結果的穩(wěn)定性n引。在本實驗中,由于待測的生物活性物質個別濃度相對較高、使得反應時間不足,結果造成了反應進行不完全,進而引起吸光度值不穩(wěn)定,抑制率計算過低。這似乎與原始文獻"1記載略有出入,其推薦的反應時問4m i n過短。由于經典的A B T S法主要關注標準曲線的底部變化趨勢,而該部分一般不是很穩(wěn)定。因此,SA N C H E Z.M O R E N O等在同時考慮抗氧;

25、l:能力和反應時間后提出運用反應的動力學參數表示物質抗氧化能力【I“。即:E D。(清除50%自由基需要的Troi ox 濃度、t E C。(清除50%自由基需要的時問和A E自由基清除率=1/(ED s o x t E C。對于A B TS結果的測定,據R eber t a R E 最初的文獻記載,還有一種通過抑制率,濃度與反應時間所形成面積大小來計算抗氧化能力的方法n】。該法考慮了時間、濃度的因素,比較全面,但由于計算方法稍顯復雜,所以至今應用甚少。FR A P法,也是一種操作簡便、分析快捷,而且經濟的體外物質抗氧化能力評價方法。它的特點是,待測樣本不需要前處理,化學反應劑量恒定,而且實驗

26、的重復性和靈敏度很高。應用的范圍也很廣,既可以測定單純生物活性物質的抗氧化活性,又可以測定復雜物質,如血漿制品、植物提取物¨副以及飲料¨酬的抗氧化活性。生物活性物質的抗氧化活性在適宜濃度范圍內,呈現特定的劑量一反應線性關系,而且不同的生物活性物質體現不同的抗氧化活性。從B enzi e和St r ai n的研究發(fā)現歸J,FB A P法具有很好的化學劑量反應關系和實驗結果良好的穩(wěn)定性;其中在100、200和900pm ol/L濃度下,得出的FR A P值組內變異系數(C y<0.01,而在960扯m ol/L濃度下其組間V<0.03。但是,有關文獻顯示,該法美中不

27、足之處在于其不能測定一些帶有巰基(,O H的具有抗氧化活性物質,如:谷胱甘肽等¨”。而且在本實驗中發(fā)現:待測生物活性物質濃度較大的時候,反應曲線呈現對數變化趨勢,甚至出現在某一點后曲線開始呈現遞減趨勢。A B T S法與FR A P法都是評價生物活性物質總抗氧化能力的方法,雖然二者基于原理不同。但是,有研究發(fā)現二者在結果上具有很好的相關性與一致性¨8“引;尤其是在成本和耗時上更是相比于其他方法優(yōu)勢明顯,A B TS法與FR A P法僅需要分光光度計或者酶標儀,A B TS法全程僅需2h,而FR A P法需要時間更少,30rai n即可完成分析。目前,國內已有相近方法的探討與

28、研究,但是多是應用一種方法進行評價性研究,因此本研究在權衡了各種實驗方案與方法后,認為A B TS法與FR A P法是結合的比較完備而又可靠的組合。聯(lián)合使用A B T S 法與FR A P法用于篩選與評價生物活性物質的抗氧化能力,完全可以得出令人信服的結論;為進一步開展體內實驗,即動物實驗與人體試食實驗提供有效充實的依據。參考文獻l H E R M A N S N,C O S P,M A E S L。et a1.C hal l enges a n d pi t f al l s i n an t i ox i d an t r es ear chJ.C ur t M e d C hem。200

29、7,14(4:417-430.2D U T H I E G G,D I f T HS J,K Y L E J A M.Pl ant po l y ph e n ol s i n caucr and he ar t di s ea s e:i m pl i c at i o nsn ut r i t i o nal ant i oxi dant sJ.N utr R es R e v,2000,13:79-106.3H E RI t o G M G L.Epi d em i otngi cal e v i d e nce O i l l h e pot ent i al he al t h pr

30、 op ert i e s o f f l avonoidsJ.Ptoc N utr So e,1996,55:385397.4E L MS T A S A M,圈LD A K A O,T U R K E K U L B I。既a I.D e t e rm i na t i o n0f an t l ox i d an t act i vi t y a n d an t i ox i d an t com pounds i n w i l d ed i bl e m us hroom s J.J Food C om p os t A n a l.2007,20:337.345.5N A B A

31、 S R E E D,B R A T A T I D E.A nt i o xi dant act i v i t y of$o l ne l西v e g et a b l es o f I n di a:A c o m par at i v e st udyJ.Food C he m,2006,101: 471474.6K E R R Y N L,A B B EY M.R ed w i n e a n d fr act i on at e d p h en o l i c com po unds p12p蒯f rom re d w i n e i nhi bi t l o w de ns i

32、 t y l i pop rot ei n ox i da t i o n i n vi t r o J.A theroscl er osi s,1997,135:93102.7R O B ER l-A R E,PE U正C I U N I A。PR淝G GEN TE A,et a1.A n f i ox i d a n t ac t i vi t y a p pl y i ng"i m p r ov e d AB T s ra di ca l ca t i o nde col orit i on as s ayJ.Fr ee Redi ca l B i ol M ed,1999,2

33、6:123l-1237. 8PE U正G m N I N。R E R,Y A N G M i n。d a1.Scr een i ng0f di et ar y ea ro t e no i d8a n d ca rot enoi d.ri c h f r ui t ext r ac t s f or an t i o xi dan t act i vi t i es applyi ng2,2-az inobis(3-e thyl ene be nz ot hi az oi ine-6-sulf onic a ci d re di c el ca t i o n de col oni z at

34、i on assayJ.M et hods En z y m ol,1999,299:379389. 9B E N Zl E F。S T R A I N J J.711l e f er r i c r educi n g abi l i t y of pl as m a(Ff認Pa Ef l目w ul'e0f“ant i oxi da n t po w er"”:t h e F R A P a88町J.A na lB i o c he m.1996.239:70-76.10B EN Z I E F.ST R A I N J J.Fer r i c re duci ng/ant

35、 i oxi da nt pow e r S/le4y: di rec t mof t ot al an t i ox i d an t ac t i vi t y of bi ol o gi ca l f l u i ds and m o di fi ed ve rs i o n f or si m ul t aneous托am um刪of t ot al ant i oxi da nt pow er anda sco rb ic a cid concent r at i on【J.M et hods E nzym ol,1999,299:15.27.第38卷第3期衛(wèi)生研究V01.38N o

36、.3 2009年5月J O U R N A L O F H Y G I E N E R ES E A R C H M ay2009283文章編號:1000-8020(200903.0283.04烏雞天麻營養(yǎng)液對小鼠免疫功能的調節(jié)作用肖蓉田洋1劉烈剛2徐昆龍孫永科云南農業(yè)大學動物科學技術學院,昆明650201論著摘要:目的研究鳥雞天麻營養(yǎng)液對小鼠機體免疫調節(jié)的作用。方法以小鼠為動物模型,現察低、中、高劑量(16.7、33.4和50.O m l I kg bw的鳥雞天麻營養(yǎng)液對小鼠體重、免疫器官相對重量、細胞免疫功能、體液免疫功能、單核巨噬細胞功能、N K細胞活性的影響。結果鳥雞天麻營養(yǎng)液可明顯提

37、高小鼠胸腺,體重比值(P<0.05;各劑量組與對照組相比,極顯著的增加小鼠脾細胞溶血空斑數(P<0.01,且劑量越高,作用效果越顯著;低、中劑量組均能顯著增強小鼠N K細胞活性(P<0.05。結論鳥雞天麻營養(yǎng)液具有增強機體免疫功能的作用。關鍵詞:鳥雞天麻免疫功能營養(yǎng)液中圖分類號:R977.9R391$831.89S567文獻標識碼:AA ct i on of Si l ky C hi cken-G as t r odi a E l at aB l um e nut r i ent s ol ut i onon i m m unor egul at or y f unct i

38、on i n m i ceX I A O R ong,T I A N Y a ng,L I U L i ega ng,X U K unl on g,et a1.C ol l ege of A ni m al Sci enc e and T e chn ol o gy,Y u nna n A gri cu l t ur al U ni ver si t y,K u nm i ng650201,Chi naA bst r act:O bj ect i ve To s t udy t he i m m unor eg ul at or y f un ct ion of Si l ky C hiche

39、nG as t rod/a E l at aB l um e nu t r i e n ts o l uti o n i n m i ce.M et hods B o dy w ei ght8,r el at i ve w ei ght s of i n l nl un e ove n8,c el l u ar i nm l une f unct i ons,hum or ali m m u ni t y f unct i ons,m ononucl ear m ac r opha ge a ct i vi t i e d and N Kce l l ac t i v i t i es w e

40、r e t es t ed i n m i ce t r eat ed at t he dose s of16.7,33.4and50.0m l/ks hw of Sil ky C M chen-G ast r ed/a E/at a B/um e nu t ri e n t s ol ut ion.R es ul t s Si lky C hi chen.G a s t rod/a E l at a B l um e nu t ri e n t s o l u t i o n coul d r em ar kabl y i n c r e a se t he ra t i o of t hy

41、 m us t O w ei ght(P<0.05and t he num be rof pl a guef or m i ng ce l l s ofm ou ge s pl een ce l l s(P<0.01.N K c el l s act ivi t i es w er e si gni f i can t l yi n cr e ased(P<0.05und ert he c o ndi ti on s of t w e n t y fol d o r t h i rt y f ol d dos age of t he t he nu t ri e n t s

42、ol ut i on.C oncl us i on I t w a f t s ugges t ed t hat Sil kyC hi ch en-G as t r o d/a E l at a B l um e nu t r i e n t s o l uti o n coul d have s t r on g s t r en gt heni ng f u nct i o n oni m m une s y s t em.K e y w or ds:Si l ky C hi ck en,G ast r odi a E l at a B l u m e,i m m u nor e gul

43、a t i onl l W I U L J A M SO N G,P LU M B G W,G A R C I A.C O N E SA M T.G l y ces ylaf i on,as t er i?cat i on a n d p o l y m eri z at i o n of?a vo no i d s a n dh"I rox yc i nn a m at es:e ff ec t s o n an t i ox i d an t propert i esJ.Bas ic L i fe$ci, 19勞.66:4834舛.12V A N D E N B E R G R。

44、H A E N E N G R MM,V A N D E N B E R G H,e t a1.A p pl i ca bi l i t y0f al l i m pr oved T m l o x e q u i v al e n t an t i ox i d an t ca pa ci t y(T EA Ca ss ay f or ev al uat i o n0f an t i ox i d an t ca pa ci t y m e a sur e m e nt s0f 耐xt ures【J.Foo d C h,1999,66,511-517.13A R TS M A R I K E N J T J,D A UN G A J,S E BA S r n A A N,et a1.A n e wa p pr o a cht o朋6嘲t he t ot al ant i oxi dant capaci t y商ng t h e T E A C a ssa y sJ.Food C h e m,200