新生兒溶血病檢測(cè)操作SOP

1、新生兒溶血病檢測(cè)操作SOP一、產(chǎn)前診斷1夫婦血型檢測(cè)（微柱凝膠檢測(cè)法：ABO、Rh（D）血型定型檢測(cè)卡）1.1將紅細(xì)胞稀釋至1%紅細(xì)胞生理鹽水懸液；1. 2撕開(kāi)微膠卡的封膜，于正立管藍(lán)A、黃B、灰D.Control微柱管反應(yīng)腔中加入氓待檢RBC 生理鹽水懸液務(wù)50ul：于反定管白色A、B、0、自身管分別對(duì)應(yīng)加入1.0% Al. B、0型試 劑紅細(xì)胞和待檢紅細(xì)胞生理鹽水懸液50 ul,再分別加入待檢血漿（血清）50 ul：1. 3將檢測(cè)卡室溫反應(yīng)M10 min,取出，置離心機(jī)lOOOr/min 2min» 1800r/min 3 min離心;1.4取岀，判泄結(jié)果（凝集強(qiáng)度判斷詳見(jiàn)結(jié)果判

2、立示圖）。按下表檢驗(yàn)結(jié)果判定ABO、RhD血型：檢驗(yàn)結(jié)果ABO. RhD血型判定二 A黃B灰DControl（待檢RBC）A1B0Control（血漿與自身RBC+一+或一一+一一A 型 RhD （+或一十+或-一-一-B 型 RhD （+或一-+或-一+-一0 型 RhD （+或+或-一-AB 型 RhD （+或-）2. 孕婦抗體效價(jià)的測(cè)定（微柱凝膠檢測(cè)法：抗人球蛋白檢測(cè)卡）21孕婦IgG （抗A/抗B）效價(jià)2. 1.1取待檢血淸和2-Me（二兢基乙醇）應(yīng)用液各0.2ml,充分混勻，37°C水浴2小時(shí)（以充 分破壞血淸中的IgM類(lèi)抗體）。2. 1. 2取4支干凈試管排于試管架上：將

3、第一管加入50微升中和血淸和1. 6亳升低離子介 質(zhì)（原液為1:1稀釋?zhuān)藭r(shí)稀釋倍數(shù)為原液的64倍）。第24管中分別加入400微升低離子介質(zhì)；從第一管中吸出400微升的液體加入第 二管，混勻，在從第二管吸岀400微升加入第三管混勻，依次倍比稀釋。取抗人球蛋白檢測(cè)卡，撕去鋁箔，在4管中個(gè)依次加入倍比稀釋好的火活血淸50微 升和1%的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（或父親紅細(xì)胞）低離子介質(zhì)（LIM）懸液50微升。2. 1. 5將加好樣的檢測(cè)卡入生科孵育器中孵冇15分鐘。2. 1. 6將孵育好的檢測(cè)卡放入生科離心機(jī)中離心5分鐘（1000r/min 2 min, 1800r/min 3 min）, （離心必須在加樣后30

4、分鐘內(nèi)進(jìn)行）2. 1.7取岀，判左結(jié)果（凝集強(qiáng)度判斷詳見(jiàn)結(jié)果判定示圖）臨床參考值：孕婦IgG （抗A/抗B）效價(jià)W64。2.2孕婦1或（抗。）效價(jià)測(cè)定2. 2.1確泄孕婦為RhD陰性，丈夫?yàn)镽hD陽(yáng)性。2. 2.2取待檢血淸和2-Me（二兢基乙醇）應(yīng)用液各0.2ml,充分混勻，37°C水浴2小時(shí)（孕婦 血淸與0型RhD陽(yáng)性紅細(xì)胞反應(yīng)鹽水法為陽(yáng)性需要火活，陰性不需要火活）。2. 2. 3取4支干凈試管排于試管架上：將第一管加入50微升中和血淸和400毫升低離子介 質(zhì)（火活血淸為1:1稀釋?zhuān)藭r(shí)稀釋倍數(shù)為原液的16倍；如不火活為8倍）。2. 2. 4第2-4管中分別加入400微升低離子介

5、質(zhì)；從第一管中吸岀400微升的液體加入第 二管，混勻，在從第二管吸岀400微升加入第三管混勻，依次倍比稀釋。2. 2. 5取抗人球蛋白檢測(cè)卡，撕去鋁箔，在4管中個(gè)依次加入倍比稀釋好的血淸50微升和1% 的標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞（或父親紅細(xì)胞）低離子介質(zhì)（LIM）懸液50微升。2. 2. 6將加好樣的檢測(cè)卡入生科孵育器中孵冇15分鐘。2. 2. 7將孵育好的檢測(cè)卡放入生科離心機(jī)中離心5分鐘（1000r/min 2 min» 1800r/min 3 min）,（離心必須在加樣后30分鐘內(nèi)進(jìn)行）2. 2.8取岀，判左結(jié)果（凝集強(qiáng)度判斷詳見(jiàn)結(jié)果判泄示圖）臨床參考值：孕婦IgG（抗D）效價(jià)W16,其血型不

6、合的胎兒溶血病一般較；IgG（抗D）效價(jià)W 64時(shí)，其血型不合胎兒死胎率增高。3. 孕婦不規(guī)則抗體篩査（微柱凝膠檢測(cè)法：抗人球蛋白檢測(cè)卡）3.1取抗人球蛋白檢測(cè)卡，撕去鋁箔，在3管中個(gè)依次加入孕婦血淸（血漿）50微升和1% 的篩選細(xì)胞低離子介質(zhì)（LIM）懸液50微升。3. 2將加好樣的檢測(cè)卡入生科孵冇器中孵育15分鐘。3. 3將孵育好的檢測(cè)卡放入生科離心機(jī)中離心5分鐘（1000r/min 2 min, 1800r/min 3 min）,（離心必須在加樣后30分鐘內(nèi)進(jìn)行）3.4取出.判上結(jié)果（凝集強(qiáng)度判斷詳見(jiàn)結(jié)果判立示圖）二、新生兒溶血病血型血清學(xué)診斷（三項(xiàng)）1. 患兒紅細(xì)胞直接抗人球蛋白試驗(yàn)（

7、微柱凝膠檢測(cè)法：抗人球蛋白檢測(cè)卡）1.1取患兒血液，離心，洗滌，取壓積紅細(xì)胞用生理鹽水配制成1%的紅細(xì)胞懸液。1.2在抗人球蛋白檢測(cè)卡上標(biāo)注患兒的姓名或者編號(hào)，撕開(kāi)卡上的鋁箔。1. 3將50微升1 %紅細(xì)胞懸液加入到相應(yīng)的孔中。1. 4 離心 5 分鐘（1000r/min 2 min, 1800r/min 3 min）。15取出.判泄結(jié)果（凝集強(qiáng)度判斷詳見(jiàn)結(jié)果判立示圖）。2. 患兒紅細(xì)胞的放散試驗(yàn)（微柱凝膠檢測(cè)法：抗人球蛋白檢測(cè)卡）采集患兒的血液標(biāo)本，按照所檢抗體的不同，使用不同的方法的到放散液（具體操作見(jiàn)附件）。2. 1取出試劑卡，檢測(cè)前確保試劑卡及樣品完全平衡至室溫并標(biāo)記，撕開(kāi)試劑卡上的鋁

8、箔帶, 僅無(wú)露試驗(yàn)所需使用的反應(yīng)腔2.2將50 ML 1% A、B、0紅細(xì)胞LIH懸液加入相應(yīng)的反應(yīng)腔中。2. 3向相應(yīng)的反應(yīng)腔中加入100 PL的放散液。2.4觀察反應(yīng)腔內(nèi)的反應(yīng)物是否混勻，如需要，輕禪微柱。2.5將加好樣的檢測(cè)卡入生科孵育器中孵育15分鐘。2. 6將孵冇好的檢測(cè)卡放入生科離心機(jī)中離心5分鐘（lOOOr/'min 2 min, 1800r/min 3 min）。2. 7取岀，判泄結(jié)果（凝集強(qiáng)度判斷詳見(jiàn)結(jié)果判定示圖）熱放散法：取1ML體積的壓積血用鹽水至少洗滌三次，最后一次盡量取凈，然后和等量或半 量的生理鹽水混勻，置于56°C孵育10分鐘，期間搖動(dòng)數(shù)次，迅速

9、取出3500r/min離心2-3 分鐘，立即取上淸。即熱放散液。酸放散：詳細(xì)見(jiàn)酸放散試劑盒說(shuō)明書(shū)。結(jié)果判讀AcBeOc指示細(xì)胞+游離的抗A抗體+游離的抗B抗體+游離的抗A抗B抗體00+游離的ABO以外抗體無(wú)游離抗體3. 游離抗體試驗(yàn)（微柱凝膠檢測(cè)法：抗人球蛋白檢測(cè)卡）。游離試驗(yàn)是新生兒出生后7天內(nèi)，輔助診斷新生兒溶血病的試驗(yàn)。單純游離試驗(yàn)陽(yáng)性, 不能診斷IgG抗體已經(jīng)致敏新生兒紅細(xì)胞。3. 1取出試劑卡，使用前確保試劑卡完全平衡到室溫。3.2分別向反應(yīng)柱內(nèi)加入50ul 1%A、B、0紅細(xì)胞LIM懸液。3.3最后向反應(yīng)柱內(nèi)加入100 ul嬰兒血淸或血漿。注，加樣時(shí)，槍頭請(qǐng)勿觸碰微柱管壁。3.4觀察柱中的反應(yīng)物各組分是否混勻，必要時(shí)輕彈幾下微柱充分，使反應(yīng)物混勻。3. 5將加好樣的檢測(cè)卡入生科孵育器中孵育15分鐘。3. 6將孵ff好的檢測(cè)卡放入生科離心機(jī)中離心5分鐘(lOOOr/'min 2 min, 1800r/min 3 min)。2. 7取出，判泄結(jié)果(凝集強(qiáng)度判斷詳見(jiàn)結(jié)果判立示圖)。結(jié)果判讀AcBeOc指示細(xì)胞游離的抗A抗體+游離的抗B抗體+游離的抗A抗B抗體00+游離的ABO以外抗體無(wú)游離抗體4. 新生兒