實驗診斷學教學資料實驗診斷學--三細菌耐藥性檢測

1、第一部分第一部分 細菌真菌涂片檢測細菌真菌涂片檢測第二部分第二部分 細菌真菌培養(yǎng)鑒定細菌真菌培養(yǎng)鑒定第三部分第三部分 細菌耐藥性檢測細菌耐藥性檢測一、一、MIC法、法、K-B法、法、E-test法藥敏試驗法藥敏試驗二、藥敏試驗抗生素選取及藥敏結果解讀二、藥敏試驗抗生素選取及藥敏結果解讀三、三、2014年南方醫(yī)院細菌種類及耐藥性年南方醫(yī)院細菌種類及耐藥性第三部分第三部分 細菌耐藥性檢測細菌耐藥性檢測一、一、MIC法、法、K-B法、法、E-test法藥敏試驗法藥敏試驗（一）（一）MIC法藥敏試驗法藥敏試驗 MIC稀釋法稀釋法一般在瓊脂或肉湯中將抗菌藥物系列對倍一般在瓊脂或肉湯中將抗菌藥物系列對倍稀

2、釋，定量接種待檢菌，稀釋，定量接種待檢菌， 35培養(yǎng)培養(yǎng)18至至24小時后觀小時后觀察結果；察結果； 抑制檢測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度，即最小抑抑制檢測菌肉眼可見生長的最低藥物濃度，即最小抑菌濃度；菌濃度； MIC稀釋法稀釋法結果以結果以MIC（g/ml）數值報告，數值越）數值報告，數值越小越敏感，與小越敏感，與K-B法相反；法相反；MIC稀釋法藥敏檢測稀釋法藥敏檢測BD Phoenix 100 細菌自動鑒定及藥敏分析儀細菌自動鑒定及藥敏分析儀MICMIC稀釋法稀釋法藥敏試驗孔藥敏試驗孔生化試驗生化試驗細菌鑒定孔細菌鑒定孔 MIC稀釋法藥物濃度主要包括折點濃度，可以判斷敏稀釋法藥物濃度主要

3、包括折點濃度，可以判斷敏感、中介、耐藥，感、中介、耐藥， 少數藥物如亞胺培南、美羅培南、頭孢他啶，萬古霉少數藥物如亞胺培南、美羅培南、頭孢他啶，萬古霉素、替考拉寧、利奈唑胺等在判斷敏感的基礎上，又素、替考拉寧、利奈唑胺等在判斷敏感的基礎上，又增加了一些低濃度，以利于合理選用藥量，增加了一些低濃度，以利于合理選用藥量， 不同抗生素判斷的折點濃度不同，故不同抗生素之間不同抗生素判斷的折點濃度不同，故不同抗生素之間的的MIC值沒有可比性。值沒有可比性。MIC稀釋法藥敏檢測稀釋法藥敏檢測（二）（二）K-B法藥敏試驗法藥敏試驗KB法藥敏試驗基本原理法藥敏試驗基本原理l 補充藥敏板沒有的抗生素，如頭孢哌酮

4、補充藥敏板沒有的抗生素，如頭孢哌酮/ /舒巴坦。舒巴坦。l 含有定量抗菌藥物的紙片，貼在已接種待檢菌的含有定量抗菌藥物的紙片，貼在已接種待檢菌的MHMH平板上，平板上，l 紙片中所含的藥物，吸取瓊脂中的水分溶解后，紙片中所含的藥物，吸取瓊脂中的水分溶解后，不斷地向紙片周圍區(qū)域擴散，形成遞減的藥物梯不斷地向紙片周圍區(qū)域擴散，形成遞減的藥物梯度濃度。度濃度。KB法藥敏試驗基本原理法藥敏試驗基本原理l 在紙片周圍抑菌濃度范圍內，細菌的生長被抑制，在紙片周圍抑菌濃度范圍內，細菌的生長被抑制，形成透明的抑菌圈。形成透明的抑菌圈。l 抑菌圈大小，反映待檢菌對測定藥物敏感程度。抑菌圈大小，反映待檢菌對測定藥

5、物敏感程度。l 不同抗生素有不同的判斷標準，不同抗生素的抑不同抗生素有不同的判斷標準，不同抗生素的抑菌圈大小沒有可比性。菌圈大小沒有可比性。（三）（三）E-test法藥敏試驗法藥敏試驗E-testE-test藥敏檢測藥敏檢測 結合結合K-BK-B法和稀釋法的優(yōu)點；法和稀釋法的優(yōu)點； 原理同稀釋法檢測，操作同原理同稀釋法檢測，操作同K-BK-B法簡單；法簡單； 試紙條上含干化、穩(wěn)定、濃度由高到低呈指數梯試紙條上含干化、穩(wěn)定、濃度由高到低呈指數梯度分布的某種抗菌藥物。度分布的某種抗菌藥物。 補充鑒定藥敏板沒有的抗生素，如替加環(huán)素（老補充鑒定藥敏板沒有的抗生素，如替加環(huán)素（老虎素）?；⑺兀Ｌ婕迎h(huán)素

6、替加環(huán)素MIC Test Stripl 從從28冰箱中取出瓊脂平板（江門市凱林貿易冰箱中取出瓊脂平板（江門市凱林貿易公司）。公司）。l 從從20冰箱中取出冰箱中取出MTS測試條（替加環(huán)素測試條（替加環(huán)素MIC Test Strip ，0.016256g/ml，意大利，意大利liofilchem公司），美國輝瑞公司惠贈。公司），美國輝瑞公司惠贈。l 平衡至室溫，半小時至平衡至室溫，半小時至1小時。小時。二、藥敏試驗抗生素選取及藥敏結果解讀二、藥敏試驗抗生素選取及藥敏結果解讀（一）（一）CLSI要求藥敏試驗選取及報告抗生素要求藥敏試驗選取及報告抗生素（二）南方醫(yī)院藥敏試驗中選取抗生素（二）南方醫(yī)院

7、藥敏試驗中選取抗生素（三）（三）CLSI藥敏試驗結果報告要求藥敏試驗結果報告要求（一）（一）CLSI要求藥敏試驗選取及報告抗生素要求藥敏試驗選取及報告抗生素（二）南方醫(yī)院藥敏試驗中選取抗生素（二）南方醫(yī)院藥敏試驗中選取抗生素氨基糖甙類：氨基糖甙類：阿米卡星阿米卡星AmikacinAmikacin、慶大霉素、慶大霉素GentamicinGentamicin1 1代頭孢：代頭孢：頭孢唑啉頭孢唑啉CefazolinCefazolin2 2代頭孢：代頭孢：頭孢呋辛鈉頭孢呋辛鈉Cefuroxime sodiumCefuroxime sodium3 3代頭孢：代頭孢：頭孢他啶頭孢他啶Ceftazidime

8、Ceftazidime、頭孢噻肟、頭孢噻肟CefotaximeCefotaxime4 4代頭孢：代頭孢：頭孢吡肟（馬斯平）頭孢吡肟（馬斯平）CefepimeCefepime單環(huán)單環(huán)-內酰胺類：內酰胺類：氨曲南氨曲南AztreonamAztreonam廣譜青霉素類：廣譜青霉素類：氨芐西林氨芐西林AmpicilinAmpicilin、青霉素、青霉素G G PenicillinPenicillin、苯唑西林、苯唑西林Oxacillin Oxacillin 抗假單胞菌廣譜青霉素：抗假單胞菌廣譜青霉素：哌拉西林哌拉西林PiperacillinPiperacillin復方復方-內酰胺類：內酰胺類：阿莫西林

9、阿莫西林- -克拉維酸（奧格門?。┛死S酸（奧格門丁）Amoxicilin/clavelanateAmoxicilin/clavelanate、氨芐西林氨芐西林- -舒巴坦（優(yōu)力新）舒巴坦（優(yōu)力新）Ampicillin/SulbactamAmpicillin/Sulbactam、哌拉西林哌拉西林- -他唑巴坦（特治星）他唑巴坦（特治星）Piperacillin/TazobactamPiperacillin/Tazobactam、頭孢哌酮頭孢哌酮- -舒巴坦（舒普深）舒巴坦（舒普深）cefoperazone/Sulbactamcefoperazone/Sulbactam碳青霉烯類：碳青霉烯類：亞

10、胺培南亞胺培南ImipenemImipenem、美羅培南、美羅培南MeropenemMeropenem多肽類：多肽類：多粘菌素多粘菌素E Colistin EE Colistin E、替考拉寧、替考拉寧TeicoplaninTeicoplanin、萬古霉素、萬古霉素VancomicinVancomicin唑烷酮類：唑烷酮類：利奈唑胺（斯沃利奈唑胺（斯沃 ）LinezolidLinezolid林可霉素類：林可霉素類：克林霉素克林霉素ClindamycinClindamycin大環(huán)內脂類：大環(huán)內脂類：紅霉素紅霉素ErythromycinErythromycin氯霉素：氯霉素：氯霉素氯霉素Chlor

11、amphenicolChloramphenicol三代喹諾酮：三代喹諾酮：環(huán)丙沙星環(huán)丙沙星Ciprofloxaxin Ciprofloxaxin 、氧氟沙星、氧氟沙星Ofloxaxin Ofloxaxin 、左旋氧氟沙星、左旋氧氟沙星Levofloxacin Levofloxacin 四環(huán)素類：四環(huán)素類：四環(huán)素四環(huán)素TetracyclineTetracycline磺胺類：磺胺類：復方新諾明（甲氧芐唑復方新諾明（甲氧芐唑- -磺胺甲唑）磺胺甲唑）Timethoprim/SulfamethoxazoleTimethoprim/Sulfamethoxazole利福平利福平Rifampin Rifam

12、pin （三）（三）CLSI藥敏試驗結果報告要求藥敏試驗結果報告要求 臨床和實驗室標準化委員會標準（臨床和實驗室標準化委員會標準（clinical and laboratory standards of institute, CLSI） 敏感敏感（susceptiblesusceptible，S S） 是指菌株能被使用推薦劑量治療感染部位可達到的是指菌株能被使用推薦劑量治療感染部位可達到的抗菌藥物濃度所抑制，推薦使用?？咕幬餄舛人种?，推薦使用。 中介中介（intermediateintermediate，I I） 指抗菌藥物指抗菌藥物MICMIC接近血液和組織中通?？蛇_到的濃度，接近血液和

13、組織中通?？蛇_到的濃度，療效低于敏感菌株。療效低于敏感菌株。 還表示藥物在生理濃集的部位具有臨床效力（如尿還表示藥物在生理濃集的部位具有臨床效力（如尿液中的喹諾酮類和液中的喹諾酮類和- -內酰胺類），或者可用高于正內酰胺類），或者可用高于正常劑量的藥物進行治療（如常劑量的藥物進行治療（如- -內酰胺類）。內酰胺類）。 另外，中介還作為緩沖區(qū)，以防止微小的、未受控另外，中介還作為緩沖區(qū)，以防止微小的、未受控制的技術因素導致較大的錯誤結果，特別是對那些制的技術因素導致較大的錯誤結果，特別是對那些藥物毒性范圍窄的藥物。藥物毒性范圍窄的藥物。 耐藥耐藥（resistantresistant，R R）

14、指菌株不能被常規(guī)劑量抗菌藥物達到的濃度指菌株不能被常規(guī)劑量抗菌藥物達到的濃度所抑制，所抑制， 和和/ /或證明或證明MICMIC或抑菌圈直徑落在某些特殊的或抑菌圈直徑落在某些特殊的微生物耐藥機制范圍（如微生物耐藥機制范圍（如- -內酰胺酶），內酰胺酶）， 在治療研究中表現抗菌藥物對菌株的臨床療在治療研究中表現抗菌藥物對菌株的臨床療效不可靠。效不可靠。抗菌藥物的作用靶位抗菌藥物的作用靶位 耐甲氧西林葡萄球菌（耐甲氧西林葡萄球菌（methecillin resistance methecillin resistance staphylococcusstaphylococcus，MRSMRS） CL

15、SICLSI規(guī)定，葡萄球菌如對苯唑西林（或甲氧西林）規(guī)定，葡萄球菌如對苯唑西林（或甲氧西林）耐藥：耐藥：對青霉素類、頭孢菌素類、碳青霉烯類和含酶對青霉素類、頭孢菌素類、碳青霉烯類和含酶抑制劑的復方制劑均應報告耐藥，而不考慮體外藥敏抑制劑的復方制劑均應報告耐藥，而不考慮體外藥敏結果。結果。 產超廣譜產超廣譜-內酰胺酶內酰胺酶G-G-桿菌桿菌(extended (extended spectrum-lactamase G- bacillusspectrum-lactamase G- bacillus，ESBLs)ESBLs) 該酶水解青霉素、頭孢菌素及單胺類的超廣該酶水解青霉素、頭孢菌素及單胺類的

16、超廣譜譜-酶，主要由肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌、酶，主要由肺炎克雷伯菌和大腸埃希菌、腸桿菌等細菌產生。腸桿菌等細菌產生。 耐萬古霉素腸球菌（耐萬古霉素腸球菌（VREVRE） 再用再用E-testE-test法驗證；法驗證； 如發(fā)現如發(fā)現VREVRE，則應注意對相應病人做好隔離，以，則應注意對相應病人做好隔離，以防醫(yī)院感染擴散。防醫(yī)院感染擴散。 耐碳青霉烯類耐碳青霉烯類G-G-桿菌桿菌 耐碳青霉烯腸桿菌科，超級細菌；耐碳青霉烯腸桿菌科，超級細菌； 耐碳青霉烯不動桿菌和銅綠假單胞菌。耐碳青霉烯不動桿菌和銅綠假單胞菌。三、三、2014年南方醫(yī)院細菌種類及耐藥性年南方醫(yī)院細菌種類及耐藥性 耐碳青霉烯酶腸桿菌科，超級細菌耐碳青霉烯酶腸桿菌科，超級細菌 菌株鑒定及藥敏試驗，均用兩種不同方法復核；菌株鑒定及藥敏試驗，均用兩種不同方法復核； 應對相應病人做好隔離，以防醫(yī)院感染擴散；應對相應病人做好隔離，以防醫(yī)院感染擴散； 耐藥機制主要是產碳青霉烯酶引起。耐藥機制主要是產碳青霉烯酶引起。50株耐碳青霉烯不動桿菌替加環(huán)素株耐碳青霉烯不動桿菌替加環(huán)素MTS藥敏結果藥敏結果g/ml株數株數百分比百分比0.7536%11224%1.5255