植物細胞染色體標本的制作與觀察(共7頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上普通生物學(xué)實驗課須知1.新生進實驗室之前要認真閱讀實驗室基本知識。 2.每次進入實驗室的時間為以課表為準，提前10分鐘進入實驗室。3.應(yīng)嚴格按照實驗平臺上預(yù)約時間進入實驗室進行實驗，不來者，視為曠課。如因特殊情況請假，需在實驗開始前至少三天向指導(dǎo)教師說明，在選課平臺系統(tǒng)中取消原預(yù)約時間，重新預(yù)約，一次不做實驗或一次不交報告，即按不及格論處。4.預(yù)習實驗內(nèi)容和有關(guān)知識，寫好預(yù)習報告（手寫）,前四部分內(nèi)容（一、實驗?zāi)康?，二、實驗原理，三、實驗器材與試劑，四、實驗步驟與操作方法），無預(yù)習報告者扣10分。5. 實驗過程中應(yīng)認真操作，仔細觀察實驗現(xiàn)象，做好原始記錄(三個實驗需要

2、用相機或手機拍照，DNA指紋圖譜實驗需用U盤拷貝實驗結(jié)果，請自備拍照工具和U盤)。6. 預(yù)習、課堂操作、課堂紀律、善后處理、實驗報告是評分的依據(jù)。7. 實驗完畢，要將自己使用的儀器刷洗干凈，藥品按序恢復(fù)原位，臺面擦凈，把自己做實驗的一套東西找齊，經(jīng)指導(dǎo)老師檢查合格并簽字后方可離開。8. 值日生要認真清掃地面、水槽、臺面，檢查水、電、門窗是否關(guān)好。9. 實驗講義：實驗預(yù)約系統(tǒng)中可以下載，也可到生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院網(wǎng)站下載。10. 實驗報告模板見附件，需注明姓名、學(xué)號、組號、做實驗具體時間。植物細胞染色體標本的制作與觀察上課地點：化學(xué)樓120 上課時間：選課時任課教師：陳麗杰 辦公地點：生化樓215

3、 電話：課程要求：預(yù)習實驗內(nèi)容，掌握實驗?zāi)康募霸怼x器和試劑、實驗步驟；手寫完成預(yù)習報告（實驗名稱、實驗?zāi)康?、實驗原理、實驗器材與試劑、實驗方法與步驟），課堂檢查預(yù)習報告情況。實驗注意事項： 1、實驗臺上物品按實驗室管理老師要求擺放整齊；2、實驗廢物按實驗室管理老師要求收集；3、實驗結(jié)束后，經(jīng)老師檢查后方可離開。實驗紀律： 1、按時上課 2、穿實驗服（白大衣） 3、不許吃東西，課堂嚴禁大聲喧嘩 4、手機靜音 實驗成績： 預(yù)習報告： 20分 實驗操作： 40分 報告內(nèi)容：結(jié)果和討論 40分 植物細胞染色體標本的制作與觀察1. 實驗背景與原理染色體的研究在生物進化、發(fā)育、遺傳和變異中都有十分重要

4、的作用。因此，染色體標本的制備技術(shù)是遺傳學(xué)、細胞生物學(xué)、染色體工程、分類學(xué)等眾多學(xué)科的基本實驗技術(shù)。物種細胞內(nèi)染色體數(shù)目、形態(tài)、長度等信息的總和根據(jù)實驗的觀察和測量繪制成的模式圖稱為核型（karyotype）。核型分析在物種親緣鑒定，染色體變異分析，雜種分析，細胞分裂過程分析，孤雌生殖等研究中均有重要的作用。染色體標本的常規(guī)制片方法有切片法、涂片法、壓片法、滴片法（空氣干燥法）等。壓片法操作簡單，是常用的植物染色體標本制備的方法。不過，該法在制備中要注意避免壓片所造成的染色體的扭曲、變形和丟失的現(xiàn)象。染色體制備的重要環(huán)節(jié)如下：（1）取材：應(yīng)取分生旺盛的組織或細胞。在植物中通常取根尖，在分裂高峰

5、時取材，可得到大量分裂相細胞。而在動物細胞中通常選取骨髓等分裂活躍的細胞，或是植物血球凝集素等刺激下的淋巴細胞，也可選取分裂旺盛的體外培養(yǎng)的癌細胞或轉(zhuǎn)化細胞等。（2）預(yù)處理：使用秋水仙胺等藥品破壞紡錘體形成，不但可得到大量分裂相細胞，而且可使染色體縮短變粗，有利于觀察。（3）固定：滲透力強的固定液將細胞迅速殺死，蛋白質(zhì)沉淀，并可盡量保持細胞原有狀態(tài)。（4）解離或低滲：植物細胞要除去細胞間的果膠層，并使細胞壁軟化，從而使細胞得以膨脹，為染色體的分散提供了空間。常用解離方法有酸解法和酶解法。動物細胞無細胞壁，通常不需解離，而是用低滲液使細胞膨脹。（5）染色體分散：通過壓片、滴片等機械力量使染色體分

6、散, 有利于觀察。2. 實驗?zāi)康模?）掌握常規(guī)壓片技術(shù)制作植物染色體標本的一般方法。（2）了解顯微鏡下常規(guī)顯色的植物細胞染色體的形態(tài)特點, 熟練掌握顯微鏡的使用。（3）理解染色體與生命遺傳的意義及染色體核型檢查的應(yīng)用。3. 實驗材料與試劑（1）材料：市售大蒜。 （2）設(shè)備與用品：普通光學(xué)顯微鏡，水浴鍋，蓋玻片，載玻片，異物針，鑷子，平皿，濾紙等。（3）藥品與試劑：秋水仙胺，甲醇，鹽酸等。 l 改良石炭酸品紅染液：是近年來觀察植物染色體時使用的比較理想的染色劑，染色背景清晰，反差好，使用方便。配制方法如下：原液A：取3 g堿性品紅溶于100 mL 70%的酒精中，此液可以長期保存。原液B：取A液

7、10 mL加入90 mL 體積分數(shù)為0.05的苯酚（即石炭酸）水溶液中（2周內(nèi)使用）。原液C：取B液55 mL加入6 mL的冰醋酸和6 mL 37%的甲醛（可長期保存）。染色液：取C液10 mL，加入90 mL 體積分數(shù)為0.45的醋酸和1.8 g山梨醇。放置2周后使用，染色效果顯著，可普遍用于植物組織的壓片法和涂片法，使用23年不變質(zhì)。山梨醇為助滲劑，兼有穩(wěn)定染色液的作用。如果沒有山梨醇，也能染色，但效果稍差。l 卡諾固定液：甲醇-冰醋酸（體積比3：1），現(xiàn)用現(xiàn)配。4. 實驗方法與步驟l 實驗內(nèi)容： 壓片法制備大蒜根尖細胞的染色體標本； 觀察男人和女人染色體、洋蔥細胞有絲分裂的永久標本。l

8、實驗學(xué)時：3學(xué)時。（1）取材：保持大蒜根部濕潤，使根發(fā)約11.5 cm即可，不能過長。取大蒜0.51 cm的根尖。（2）預(yù)處理：0.52 gL-1（用純水配制）秋水仙胺處理34 h。（3）固定：卡諾固定液4 下固定30 min后，用蒸餾水洗凈。（4）解離：60 水浴下1 mol/L HCl（濃鹽酸稀釋大約10倍）解離10 min。（5）洗滌：用蒸餾水清洗根尖組織。若洗不凈，會影響染色。（6）用改良的石炭酸品紅染色5 min，可直接在載玻片上進行，染色前可用異物針去掉分生區(qū)以后部分，保留根尖0.20.3 cm即可。染色時用針把組織撥散。（7）壓片，敲片：蓋上蓋玻片，上面墊上一張濾紙，先用手指輕輕

9、均勻地按壓蓋玻片，使組織初步壓散，并且可使蓋玻片壓牢，防止敲片時蓋玻片移動。再用異物針的針柄一端垂直輕輕落下（為防敲碎玻片，可再在蓋玻片上墊一張濾紙），進一步敲散組織，使染色體充分散開。敲至組織在玻片上呈現(xiàn)霧狀。（8）觀察結(jié)果：細胞核著色，而細胞質(zhì)不著色。大蒜有8對16條染色體（2n=16）。好的染色體標本染色體應(yīng)該分散較好，不重疊，不缺失，染色體形態(tài)清晰。大蒜根尖細胞的染色體制片（×400，箭頭示染色體）5. 實驗注意事項（1）若材料不易生根，可把材料在4 低溫處理促使其生根，不過注意低溫有時也會誘導(dǎo)染色體數(shù)目加倍。過長的根尖分裂相會大大減少，所以不要取長度超過1.5 cm的根尖。（2）秋水仙胺，又名脫甲酰秋水仙堿，毒性比秋水仙堿（秋水仙素）小，作用卻比秋水仙堿強約10倍。（3）壓片、敲片時力量要均勻合適，避免弄碎玻片；載玻片和蓋玻片之間也不要移動。（4）可隨時鏡檢判斷敲片進行的程度，但要注意整個過程要保持標本的濕潤。6. 思考題若染色體標本結(jié)果不理想，請分析一下可能的原因有哪些？附件2：大連理工大學(xué)實驗報告封皮范本大連理工大學(xué)本科實驗報告課程名稱： 普通生物學(xué)實驗 學(xué)院（系）： 專 業(yè)： 班 級： 學(xué) 號： 學(xué)生姓名： 年 月 日附件3：大連理工大學(xué)實驗報告范本