小鼠卵巢癌標志物CA125試劑盒使用方法

1、小鼠卵巢癌標志物CA125試劑盒使用方法檢測范圍：96T200 U/L -6000 U/L使用目的：本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中卵巢癌標志物CA125 含量。實驗原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠卵巢癌標志物CA125 水平。用純化的小鼠卵巢癌標志物 CA125 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入卵巢 癌標志物CA125，再與 HRP 標記的卵巢癌標志物 CA125 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗 體復(fù)合物，經(jīng)過徹底洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的卵巢癌標志

2、物CA125 呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中小鼠卵巢癌標志物 CA125 濃度。試劑盒組成130 倍濃縮洗滌液20mlX1 瓶7終止液6mlX1 瓶2酶標試劑6mlX1 瓶8標準品(12000 U/L )0.5mlX1 瓶3酶標包被板12 孔X8 條9標準品稀釋液1.5mlX1 瓶4樣品稀釋液6mlX1 瓶10說明書1 份5顯色劑 A 液6mlX1 瓶11圭寸板膜張6顯色劑 B 液6mlX1/瓶12密封袋1 個標本要求1 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗，可將標本放于 -20C保存，但

3、應(yīng)避免反復(fù)凍融2.不能檢測含 NaN3 的樣品，因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。6000U/L5 號標準品150d的原倍標準品加入 150d標準品稀釋液3000U/L4 號標準品150d的 5 號標準品加入 150d標準品稀釋液1500U/L3 號標準品150d的 4 號標準品加入 150d標準品稀釋液750U/L2 號標準品150d的 3 號標準品加入 150d標準品稀釋液375U/L1 號標準品150d的 2 號標準品加入 150d標準品稀釋液2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加

4、樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50 山,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40 山,然后再加待測樣品 10d（樣品最終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡 量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3.溫育用封板膜封板后置37C溫育 30 分鐘。4.配液將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用5.洗滌小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復(fù) 5 次，拍干。6.加酶每孔加入酶標試劑504，空白孔除外。7.溫育操作同 3。8.洗滌操作同 5。9.顯色每孔先加入顯色劑A504，再加入顯色劑 B504，輕輕震

5、蕩混勻，37C避光顯色15 分鐘.10.終止每孔加終止液 504,1終止反應(yīng)（此時監(jiān)色立轉(zhuǎn)黃色）。11.測定以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（ OD 值）。測疋應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進行。操作程序總結(jié):準備試劑，樣品和標準品洗板5次，加入顯色液爪B, 37匸顯色10分鐘4/計算計算加入準備好的樣品和標準品，37C反應(yīng)30分鐘洗板5次，加入酶標試劑，37匸反應(yīng)30分鐘加入終止液15分鐘之內(nèi)讀0D值以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD 值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD 值計算出標準曲線的直線回歸

6、方程式， 將樣品的 OD 值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)， 即為樣品的實際濃度。注意事項1 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。3各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好 控制在 5 分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4.請每次測定的同時做標準曲線，最好做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本0D 值大于標準品孔第一孔的 0D 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數(shù)（XnX5）。5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6.底物請避光保存。7嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準&am