BJS201703豆芽中植物生長調(diào)節(jié)劑的測定

1、附件3豆芽中植物生長調(diào)節(jié)劑的測定BJS 2017031范圍本方法規(guī)定了豆芽中11種植物生長調(diào)節(jié)劑白高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定方法。本方法適用于豆芽中6-芳基腺喋吟、4-氯苯氧 乙酸、赤霉素、口引味乙酸、口引味丁酸、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、異戊烯腺喋吟、氯口比月尿、多效吵和曝苯隆的檢測。2原理試樣經(jīng)含1%甲酸的乙睛溶液勻漿提取，脫水，離心后，上清液經(jīng)分散固相萃取凈化，用 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定，外標(biāo)法定量。3試劑和材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的一級水。3.1 試劑3.1.1 甲醇：色譜純。3.1.2 乙睛：色譜純。3.1.3 甲酸：色譜

2、純。3.1.4 乙酸鏤：色譜純。3.1.5 無水硫酸鎂。3.1.6 無水乙酸鈉。3.1.7 十八烷基鍵合硅膠吸附劑（018）:粒徑范圍為40科L603.2 試劑配制3.2.1 含1%甲酸的乙睛溶液：量取 10 mL甲酸，加乙睛稀釋至1000 mL,混勻。3.2.2 含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸鏤溶液：稱取0.3854 g乙酸鏤，用水溶解并稀釋至1000 mL , 加入1 mL甲酸，混勻。3.3 標(biāo)準(zhǔn)品6-芳基腺喋吟、4-氯苯氧乙酸、赤霉素、口引味乙酸、口引味丁酸、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、異戊烯腺喋吟、氯口比月尿、多效吵、曝苯隆標(biāo)準(zhǔn)品，純度均R90%標(biāo)準(zhǔn)品的中文名稱、英文名

3、稱、 CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量詳見附錄 A中的表A.1。3.4 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制3.4.1 植物生長調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1 mg/mL ):精密稱取6-芳基腺喋吟、4-氯苯氧乙酸、赤 霉素、口引味乙酸、口引味丁酸、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、異戊烯腺喋吟、氯口比月尿、多效吵、曝苯隆標(biāo)準(zhǔn)品(3.3)各10 mg,分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度， 搖勻，制成濃度各為 1 mg/mL標(biāo)準(zhǔn)貯備液，-20C保存。3.4.2 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 A (10 m/L):分別精密量取11種植物生長調(diào)節(jié)劑標(biāo)準(zhǔn)儲備液(1mg/mL)(3.4.1)各1 mL,置于同一 100 mL容

4、量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度均為10 wg/mLl勺混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 Ao3.4.3 混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 B (1科g/mL：精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液A (10 g g/mL (3.4.2) 1 mL ,置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度均為1 wg/mLm昆合標(biāo)準(zhǔn)中間液 B。 3.4.4空白基質(zhì)提取液：稱取空白試樣各10.0 g (精確至0.01 g),分別置于50 mL具塞離心管中，自 加入20 mL含1%甲酸的乙睛溶液”起與樣品同法處理(6.1和6.2),作為空白基質(zhì) 提取液。3.4.5 基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別精密量取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液B (1 g/mL (3.

5、4.3) 010門20科刷40科1及混合標(biāo)準(zhǔn)中間液 A (10Wg/mL (3.4.2) 1015科卸20門用空白基質(zhì)提取液(3.4.4)定容至1.0 mL,作為基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液 S0、S1 S6。濃度依 次為 0 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、40 ng/mL、100 ng/mL、150 ng/mL 和 200 ng/mL ,或依 需要配制適當(dāng)濃度的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。臨用新制。4儀器和設(shè)備4.1 高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀，配有電噴霧離子源( ESI源)。4.2 渦旋混合器。4.3 離心機：轉(zhuǎn)速 > 10000 r/min。4.4 電子天平：感量分別為 0.01

6、 mg和0.01 g。4.5 氮吹濃縮儀。4.6 高速勻漿機。4.7 具塞離心管：50 mL和15 mL。4.8 QuEChERS 離心管：內(nèi)含 300 mg無水硫酸鎂和 100 mg C18。4.9 微孔濾膜：孔徑為 0.22 m有機相型微孔濾膜。5試樣制備與保存將豆芽切碎后用組織粉碎機充分粉碎混勻，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝入潔 凈容器中，密封并標(biāo)記，于 -18C保存。6測定步驟6.1 提取準(zhǔn)確稱取10.0 g （精確至0.01 g）試樣置于 50 mL具塞離心管（4.7）中，加入20 mL含 1%甲酸的乙睛溶液（3.2.1）,高速勻漿 2 min,加入4 g無水硫酸鎂（3.1.5

7、）和1 g無水乙 酸鈉（3.1.6）,立即渦旋混合 1 min ,以10000 r/min離心5 min使乙睛和水相分層。6.2 凈化精密量取上層乙睛溶液 4 mL置于 QuEChERS離心管（含 300 mg無水硫酸鎂和 100 mg C18） （4.8）中，渦旋混合 2 min ,以14000 r/min離心5 min ,移取全部上清液于 15 mL 離心管（4.7）中，于45 C水浴中氮吹至近千，用甲醇定容至 1 mL,渦旋混勻1 min ,以14000 r/min離心5 min ,上清液經(jīng) 0.22 m有機相濾膜（4.9）過濾后，取續(xù)濾液供高效液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜測定。6.3 色譜測

8、定6.3.1 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測6.3.1.1 液相色譜條件a）色譜柱：C18柱，100 mmx 3.0 mm ,粒徑 2.7 rp,或性能相當(dāng)者。b）流動相：A為含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸俊溶液（3.2.2）, B為甲醇。梯度洗脫程序見表1。c）流速：300 L/mind）柱溫：35 C。e）進(jìn)樣量：5表1梯度洗脫程序時間(min)流動相A（%）流動相B（%）Initial9553.009553.10901019.00208021.00208021.1095524.009556.3.1.2質(zhì)譜條件a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）。b）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（ MRM ）。c）

9、掃描方式：6-茉基腺喋吟、4-氯苯氧乙酸、赤霉素、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、異戊烯腺喋吟、氯口比月尿、曝苯隆采用負(fù)離子模式掃描；口引喋乙酸、口引喋丁酸、多效陛采用正離子模式掃描。d）霧化氣（GS1）、氣簾氣（CUR）、輔助氣（GS2）、碰撞氣（CAD ）均為高純氮氣或其他合適氣體，使用前應(yīng)調(diào)節(jié)相應(yīng)參數(shù)使質(zhì)譜靈敏度達(dá)到檢測要求，參考條件詳見附錄Boe）電噴霧電壓（IS）、碰撞電壓（CE）、去簇電壓（DP）、碰撞室入口電壓（EP）、碰撞室出口 電壓（CXP）等參數(shù)使用前應(yīng)優(yōu)化至最佳靈敏度，監(jiān)測離子對和定量離子對等信息詳見附錄B中的表B.1和B.2。6.3.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線制作將基質(zhì)混合

10、標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（3.4.5）按儀器參考條件（6.3.1）進(jìn)行測定。以基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。6.3.3 定性測定在相同試驗條件下測定試樣和基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，記錄試樣和標(biāo)準(zhǔn)工作溶液中植物生長調(diào)節(jié)劑的色譜保留時間，以相對于最強離子豐度的百分比作為定性離子的相對離子豐度。若試樣中檢出與基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（3.4.5）中植物生長調(diào)節(jié)劑保留時間一致的色譜峰，且其定性離子與濃度相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)溶液中相應(yīng)的定性離子的相對豐度相比，偏差不超過表2規(guī)定的范圍，則可以確定試樣中檢出相應(yīng)植物生長調(diào)節(jié)劑。表2定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度（%）>50&g

11、t;20 50>10 20<10允許的相對偏差（%）+20+25墳i506.3.4 定量測定若試樣檢出與基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液一致的植物生長調(diào)節(jié)劑，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)工作曲線按外標(biāo) 法以峰面積計算得到其含量。空白樣品加標(biāo)試樣參考色譜圖見附錄C中的圖C.1。6.4 空白試驗除不加試樣外，均按試樣同法操作。7結(jié)果計算結(jié)果按式（1）計算： 1）（式中：X-試樣中各待測組分的含量，單位為微克每千克（ pg/kg ；c 一從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線中讀出的供試品溶液中各待測組分的濃度，單位為納克每毫升 （ng/mL）;V-試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（ mL）;f-試樣制備過程中的稀釋彳§數(shù)，本方法中

12、為5;m 稱樣量，單位為克（g）。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有 效數(shù)字。8檢測方法的靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度8.1 靈敏度本方法中6-節(jié)基腺喋吟、4-氯苯氧乙酸、赤霉素、口引喋乙酸、口引喋丁酸、2,4-二氯苯氧乙酸、4-氟苯氧乙酸、異戊烯腺喋吟、氯口比月尿、多效陛、曝苯隆檢出限均為5聞/kg；定量限均為 10 ©kg。8.2 準(zhǔn)確度本方法在10-100 囚/kg添加濃度范圍內(nèi)，回收率為60% 120%。20%。8.3 精密度在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的一27AA附錄A11種植物生長調(diào)節(jié)劑的化合物相關(guān)信

13、息表A.111種化合物的中文名稱、英文名稱、CAS登錄號、分子式、相對分子質(zhì)量序號中文名稱央文名稱CAS 登#分子式相對分子質(zhì)里1赤霉素Gibberellic acid77-06-5C19H22。6346.3726-辛基腺喋吟6-Benzylaminopurine1214-39-7C12H11N5225.253口引喋乙酸Indole-3-acetic acid87-51-4C10H9NO2175.184曝苯隆Thidiazuron51707-55-2C9 H8N4OS220.2552,4-二氯苯氧乙酸2,4-Dichlorophenoxyacetic acid94-75-7C8 H6Cl2O3

14、221.0464-氯苯氧乙酸4-Chlorophenoxyacetic acid122-88-3C8H7ClO3186.597氯口比月尿Forchlorfenuron68157-60-8C12H10ClN3O247.688多效陛Paclobutrazol76738-62-0C15H20ClN3O293.799口引喋丁酸3-Indolebutyric acid133-32-4C12H13NO2203.24104-氟苯氧乙酸4-Fluorophenoxyacetic acid405-79-8C8H7FO3170.1411異戊烯腺喋吟N6-(delta2-Isopentenyl)-adenine23

15、65-40-4C10H13N5203.24一29BB附錄B參考質(zhì)譜條件1）負(fù)離子模式掃描質(zhì)譜條件a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）；b）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM ）;c）電噴霧電壓（IS）: -5500 V （ESI-）;d）氣簾氣（CUR） : 20 L/min ;e）霧化器（GS1）: 45 L/min ;f）輔助氣壓力（GS2） : 35 L/min ;g）離子源溫度（TEM ）: 500 C。表B.1負(fù)離子模式下 8種植物生長調(diào)節(jié)劑定性、定量離子對和質(zhì)譜分析參數(shù)序 號分析物離子對m/z去簇電壓V碰撞能量eV入口電壓V出口電壓V16-辛基腺喋 吟*224.2/133.0-77-31

16、-4-6224.2/106.0-80-46-9-18224.2/117.0-76-47-9-182赤霉素_ _ _ _*344.9/142.5-79-33-10-12344.9/238.9-78-22-8-14344.9/220.6-70-35-10-1432,4-二氯苯氧 乙酸*218.9/161.0-18-16-9-26218.9/125.1-34-37-6-5218.9/89.1-21-49-12-1044-氯苯氧乙 酸*184.8/126.7-43-22-6-9184.8/110.7-39-22-6-95曝苯隆*218.9/99.9-50-16-15-15218.9/70.7-51-4

17、5-15-10218.9/91.9-46-49-13-136氯口比月尿*245.9/126.6-40-11-3-14245.9/90.9-40-37-3-147異戊烯腺喋 吟*202.0/133.9-58-23-10-10202.0/106.8-58-36-10-10202.0/157.9-70-31-10-1084-氟苯氧乙 酸*169.2/110.9-53-16-10-22169.2/94.9-46-22-8-17* 、一、 .定量離子對。2）正離子模式掃描質(zhì)譜條件a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）；b）檢測方式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM ）;c）電噴霧電壓（IS）: 5500 V （ESI+

18、）;d）氣簾氣（CUR） : 20 L/min ;e）霧化器（GS1）: 45 L/min ;f）輔助氣壓力（GS2） : 35 L/min ;g）離子源溫度（TEM ）: 500 C。表B.2 正離子模式下 3種植物生長調(diào)節(jié)劑定性、定量離子對和質(zhì)譜分析參數(shù)序號分析物離子對m/z去簇電壓V碰撞能量eV入口電壓V出口電壓V1多效坐*294.2/70.138521213294.2/125.052521282口引喋乙酸*176.2/130.36020108176.2/103.278461083口引喋丁酸*204.1/186.25315915204.1/130.45830710204.1/144.27630715* 、一、 .定量離子對。注：附錄B所列參考質(zhì)譜條件僅供參考，當(dāng)采用不同質(zhì)譜儀器時，儀器參數(shù)可能存在差異，測定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。cc附錄C