增溶瑞香素的穩(wěn)定囊泡作為藥物載體的研究

1、增溶瑞香素的穩(wěn)定囊泡作為藥物載體的研究         06-07-05 10:53:00     編輯：studa20           作者：胡長剛 王仲妮  李干佐 謝輝  安婭  張笑一 廖莉玲【摘要】 目的  探討增溶瑞香素的穩(wěn)定囊泡作為藥物載體的優(yōu)越性。方法  選擇生理上能接受的2種表面活性劑，即仿生磷酯陽離子表面

2、活性劑PTA與陰離子表面活性劑SDS，按一定比例復(fù)配能自發(fā)形成穩(wěn)定性囊泡，用負染色透射電鏡和動態(tài)光散射對其進行表征，并以其作為藥物瑞香素的載體開展其組成、溫度對包封率的影響，以及在模擬胃液及模擬腸液中的釋放情況的研究。結(jié)果  在表面活性劑總濃度為5.0×10-3mol/L，PTA/SDS=37時，囊泡粒徑最大為151.1nm，包封率最高為28.2%。它們在模擬胃液和模擬腸液中釋放75%的時間分別為240min和340min。結(jié)論  本研究對于陰陽離子表面活性劑復(fù)配自發(fā)形成囊泡作為藥物載體進行了探索性工作，并對實驗現(xiàn)象和結(jié)果從理論上進行討論，為今后的研究指出方向。&

3、#160;       【關(guān)鍵詞】  囊泡  瑞香素  粒徑  包封率  釋放分數(shù)  藥物載體                【Abstract】  Objective  To study drug delivery of the stable vesicles with daphnetin solubili

4、zation.Methods  Stable vesicles were formed from mixed solution of cation surfactant PTA and anion surfactant SDS at proper proportions. The formation and characters of the vesicles were demonstrated by negative-staining TEM and dynamic light scattering. Using the vesicles as the delivery of da

5、phnetin， we carried out the research on the effect of formation and temperature upon entrapment efficiency. Research had also been carried out upon the release circumstance of daphnetin contained in the vesicles in simulated gastric and intestinal fluid.Results  The results showed that entrapme

6、nt efficiency of the vesicles reached a max of 28.2%， and the diameter reached a max of 151.1nm when the total concentration of surfactants were 5.0×10-3mol/L，PTA/SDS=37. In simulated gastric and intestinal fluid ，the time for the release rate of daphnetin containing vesicles reaching 75% were

7、respectively 240 minutes and 340 minutes.Conclusion  This study has made an exploration research on utilizing vesicles spontaneously-formed from mixed solution of cation surfactant and anion surfactant as drug delivery， and a theoretical exploration is also presented in this paper about the phe

8、nomena and results of experiment.        【Key words】  vesicle  daphnetin  diameter  entrapment efficiency  release percent  drug delivery        由于陰陽離子表面活性劑復(fù)配必然產(chǎn)生強烈的電性作用，因而使表面活性大大提高，顯示出極大的增效作用，因此漸漸地應(yīng)用于實際1。囊泡作為分

9、子有序組合體的一個重要分支，被廣泛地應(yīng)用于模擬生物膜2，合成納米材料3、作為微反應(yīng)器4和藥物載體5等科技領(lǐng)域。囊泡作為藥物載體具有防止藥物降解失活，延長藥物的作用時間以及降低毒副作用等特點，因而囊泡包封技術(shù)已經(jīng)成為化學(xué)、藥學(xué)和生命科學(xué)研究領(lǐng)域中的熱點課題之一。但通常制備囊泡的方法需要外界提供額外的能量，如超聲波法6、手搖法（溶媒蒸發(fā)法）等，其中手搖法的包封率約為10%，超聲波法對于水溶性藥物的包封率約為20%7。然而這些方法得到的囊泡是熱力學(xué)的不穩(wěn)定體系，從而限制了其應(yīng)用。為此自發(fā)形成囊泡就成為研究人員追求的目標。1989年，Kaler和Zasadzinski8從復(fù)配的陰陽離子表面活性劑體系得

10、到了自發(fā)形成的囊泡。這種囊泡為上述應(yīng)用創(chuàng)造了條件。筆者也用仿生磷酯類陽離子表面活性劑磷酸三酯（PTA）與陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉（SDS）復(fù)配首次獲得自發(fā)形成的囊泡9。前期重點研究了囊泡大小，穩(wěn)定性及形成機制，結(jié)果表明，這種囊泡穩(wěn)定性好，其大小、電荷和滲透性等容易通過改變2種表面活性劑的比例來調(diào)節(jié)，制備速度快。由于PTA屬于仿生類磷酯，對于胺類陽離子表面活性劑對眼和皮膚有刺激性，但是分子接上乙氧基或羥丙基等基團，刺激性顯著降低。即增加100倍的濃度（10%）才具有相當(dāng)最初胺類0.1%濃度時的刺激性，因此可用于藥物中10。而SDS早以用于牙膏、搽劑，乳膏劑中，只有濃度高時對皮膚有刺激，劉程

11、等學(xué)者11提到表面活性劑對藥物影響中，談到吐溫80，SDS能影響含磺酰胺片劑的溶解性，使藥片的粘結(jié)性降低，在胃酸中較快溶解，改善了藥片的崩解、溶解和吸水性。因此本文通過改變2種表面活性劑的比例，把在磷酸二鹽（PBS）緩沖溶液中得到系列囊泡作為瑞香素藥物載體，開展其性能、包封率、緩釋率等研究，為自發(fā)囊泡作為藥物載體進行應(yīng)用性探索。目前國內(nèi)在這一方面的研究尚未見報道。        瑞香素（daphnetin）又稱祖師麻甲素是一種微溶于水的香豆素類化合物，其分子結(jié)構(gòu)見圖1。      &#

12、160;                                 圖1  瑞香素的分子結(jié)構(gòu)            瑞香素臨床上主要用于治療血栓栓塞性脈管炎、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、冠

13、心病以及中藥麻醉劑12。本文研究了仿生磷酯類陽離子表面活性劑磷酸三酯（PTA）與陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉（SDS）以不同配比（mol/mol）復(fù)配自發(fā)得到單室囊泡，采用透射電鏡對囊泡形態(tài)進行了觀測。并利用動態(tài)光散射測定了囊泡的粒徑及多分散度，用不同配比下形成的囊泡對瑞香素的包封及其緩釋作用進行了研究。        1  材料與方法        1.1  儀器和試劑  透射電鏡（TEM，型號JEM-1200EX）；動態(tài)

14、光散射（DLS，型號BI-200SM，Brookhaven Instruments Co.，Holtsville，NY）；BI-9000AT數(shù)字相關(guān)器；UV-2100型紫外/可見分光光度計（北京瑞利分析儀器公司）。透析袋（分子量800010000，山東省濟南市愛伯公司）；陽離子表面活性劑磷酸三酯（PTA，O=POCH2CH(OH)CH2-CH2-N+(CH3)2-C12H253·3Cl-），南京金陵石化研究院提供，純度98.5%；陰離子表面活性劑十二烷基硫酸鈉（SDS），F(xiàn)luka Co.， 純度98.5%；瑞香素粗品（長春春城制藥廠）；水為3次蒸餾水；其余無機試劑均為分析純試劑；模

15、擬胃液（pH=1.2）、模擬腸液(pH=7.5)、磷酸二氫鹽與磷酸氫二鹽緩沖溶液（pH=7.41；PBS）均按文獻7配制。        1.2 實驗方法        1.2.1  囊泡的制備及囊泡形態(tài)的觀測  配制PTA和SDS的母液，分別取適量的表面活性劑溶液混合至目標比例和濃度（表面活性劑總濃度Ctotal=0.005mol/L），輕微搖晃均勻，混合體系呈現(xiàn)淡藍色，預(yù)示著囊泡的自發(fā)形成9，13。采用負染色法透射電鏡對囊

16、泡進行表征。        1.2.2  囊泡粒徑及多分散度的測定  動態(tài)光散射的入射波長為488nm。在溫度為25，散射角為90°等條件下進行測定。        1.2.3  瑞香素的純化  見文獻12。        1.2.4  瑞香素及其空白囊泡溶液的紫外可見光譜掃描  精確配制

17、含5.0×10-3mol/L的瑞香素溶液及表面活性劑總濃度Ctotal=5.0×10-3mol/L（PTA/SDS=73）空白囊泡溶液，分別用PBS緩沖溶液（pH=7.41）稀釋5倍得到待測樣品，在UV-2100型紫外/可見分光光度計上從220500nm間進行掃描，其目的是尋求瑞香素的最大吸收峰，并了解空白囊泡是否對藥物分子測定有干擾。掃描結(jié)果表明瑞香素在325nm、263nm處有吸收峰（圖2中b線的1、2兩處），與文獻報道（324nm，262nm）相吻合12。由于瑞香素在325nm處吸收峰明顯且峰形好，為此本文選用325nm（圖2中b線的1處）作為用透析法來測定瑞香素緩釋

18、率的吸收波長。同時筆者在相同的波長范圍內(nèi)測定了瑞香素溶液和空白囊泡的一階導(dǎo)數(shù)光譜，結(jié)果見圖3。圖3的a線是空白囊泡的一階導(dǎo)數(shù)曲線，是數(shù)值基本為0的一條直線。b線為波形，是瑞香素的一階導(dǎo)數(shù)曲線，從1、2、3、4四個峰形來看，選擇3處波長（即306nm）測定瑞香素的導(dǎo)數(shù)值，此時空白囊泡對藥物分子吸收峰基本不產(chǎn)生干擾。故本文選用306nm作為用一階導(dǎo)數(shù)法來測定瑞香素包封率的吸收波長。                      

19、60;                    a空白囊泡；b瑞香素                          圖2  瑞香素和空白囊泡紫外光譜圖 

20、60;                                 a空白囊泡；b瑞香素                 圖3  瑞香素

21、和空白囊泡的一階導(dǎo)數(shù)紫外光譜圖            1.2.5 瑞香素一階導(dǎo)數(shù)標準曲線和零階導(dǎo)數(shù)標準曲線的繪制  在上述配制的瑞香素母液(5.0×10-3mol/L)中，分別取出80、160、200、240、280、320l分別置于相應(yīng)的10ml容量瓶中，再用PBS溶液（pH=7.41）稀釋到刻度，在306nm處測定瑞香素的一階導(dǎo)數(shù)值并繪制標準曲線，其線性回歸方程為（1）式。按同樣方法取瑞香素母液分別置于另一批容量瓶中，再用水稀釋到刻度在325nm處分別

22、測定系列濃度瑞香素溶液的吸光度，繪制標準曲線其線性回歸方程為（2）式。        C=0.0942A+2×10-6（mg/ml）  R2=0.9993  （1）        C=0.0195A0.0001 （mg/ml）  R2=0.9998  （2）        1.2.6  樣品的制備及包封率的測定  向試管中加入4ml 0.

23、005mol/L（含瑞香素0.356mg）的瑞香素溶液后，分別從事先配制好的PTA和SDS母液中按不同比例取量，但保持兩者總濃度（Ctotal=0.005mol/L）不變。輕微振蕩試管后，即得淡藍色的含藥物瑞香素的囊泡溶液。        藥物包封率的測定有多種方法，本實驗選擇一階導(dǎo)數(shù)分光光度法。它具有快速、準確、方便等特點1417。準確量取2ml上述制備好的瑞香素包封溶液置于10ml容量瓶中，用PBS溶液稀釋至刻度后迅速在306nm處測定上述溶液的一階導(dǎo)數(shù)值。將該值代入方程（1）中算出游離藥物質(zhì)量，則由（3）式計算瑞香素囊泡溶液的總包封率。