圖像定量分析系統(tǒng)(ICM)在骨巨細(xì)胞瘤DNA含量檢測中的應(yīng)用

1、    圖像定量分析系統(tǒng)(ICM)在骨巨細(xì)胞瘤DNA含量檢測中的應(yīng)用          摘要：目的研究骨巨細(xì)胞瘤DNA含量和該瘤各級(jí)別的關(guān)系。方法對(duì)36例骨巨細(xì)胞瘤石蠟包埋標(biāo)本Feulgen染色后，用Video Pro32彩色像分析系統(tǒng)對(duì)它們的核DNA進(jìn)行定量分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)Jaffe氏骨巨細(xì)胞瘤的病理分級(jí)與核DNA指數(shù)及各種倍體分布類型之間無顯著相關(guān)。在各級(jí)別骨巨細(xì)胞瘤中均有非整倍體例數(shù)檢出，提示了該腫瘤的潛在惡性。結(jié)論從DNA定量分析結(jié)果上看，存在有惡性巨細(xì)胞瘤。

2、關(guān)鍵詞：骨巨細(xì)胞瘤；病理分級(jí)；DNA；像細(xì)胞計(jì)分類號(hào)：R738.1文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1000-8578(2000)02-0101-02Study on the Nuclear DNA Content in the Giant Cell Tumor of Bone by Image CytometerZHENG Wei,HUANG Jian-wen（Dept.of Pathol,Fujian Medical University,Fuzhou 350004,China）Abstract:36 giant cell tumor of bone(GCT) on paraffin-embeded

3、 specimens were stained by Feulgen.Then the nuclear DNA content of them were measured by “Video Pro 32”Colour image analysis system.The results showed that Jaffes pathologic grades of GCT was not significant difference in DNA index and various DNA ploidy.GCT of various grades were found some cases o

4、f aneuploid.It pointed out the tumor was latent malignancy.The results of quantitative analysis of DNA showed that there was malignant giant cell tumor in GCT.Key words:Giant cell tumor of bone;Pathologic grades;DNA;Image cytometer骨巨細(xì)胞瘤在我國是頗常見的骨腫瘤，具有局部侵襲性及復(fù)發(fā)傾向。該瘤組織中有大量多核巨細(xì)胞存在，但目前公認(rèn)本瘤真正的瘤細(xì)胞是在巨細(xì)胞之間的基質(zhì)

5、細(xì)胞1。根據(jù)單核基質(zhì)細(xì)胞形態(tài)和多核巨細(xì)胞數(shù)量，Jaffe氏將本瘤分為三級(jí)。本文旨在研究這一病理學(xué)分級(jí)和瘤細(xì)胞DNA含量的關(guān)系。1材料和方法1.1材料36例骨巨細(xì)胞瘤標(biāo)本均為手術(shù)切除后經(jīng)10%福爾馬林固定，石蠟包埋處理的組織。按Jaffe氏病理分級(jí)法，級(jí)7例，級(jí)23例，級(jí)6例。1.2方法各蠟塊經(jīng)4m厚切片，進(jìn)行Feulgen染色。染色后的切片，置于(X40)物鏡下，對(duì)所測細(xì)胞進(jìn)行準(zhǔn)確定位后，由彩色攝像機(jī)提取細(xì)胞像輸入Video Pro32彩色像分析系統(tǒng)(澳大利亞產(chǎn)品)，進(jìn)行處理。最后得出腫瘤細(xì)胞核DNA指數(shù)(DI)值，并用計(jì)算機(jī)統(tǒng)計(jì)出二倍體(2C)、三四倍體、五倍體和超五倍體細(xì)胞各占該病例病變細(xì)

6、胞的百分?jǐn)?shù)2。2結(jié)果各級(jí)骨巨細(xì)胞瘤DNA指數(shù)、DNA倍體類型和非整倍體例數(shù)分別見表1，2，3。表1各級(jí)骨巨細(xì)胞瘤DNA指數(shù)檢測結(jié)果(±s)級(jí)別例數(shù)DNA指數(shù)(DI)71.2123±0.0874231.2696±0.302661.3346±0.5667表2各級(jí)骨巨細(xì)胞瘤倍體類型(±s%)級(jí)別例數(shù)2C34C5C>5C753.56±4.0741.25±2.863.78±1.611.41±2.092353.44±20.4538.38±13.84.85±6.923.33±

7、;4.77655.06±31.532.67±16.335.61±7.056.67±12.00表3各級(jí)骨巨細(xì)胞瘤非整倍體例數(shù)級(jí)別例數(shù)2C數(shù)非整倍體例數(shù)743231013633雖然隨著病理分級(jí)增高，DI均值亦增高(表1)，但經(jīng)t檢驗(yàn)各級(jí)別間差異均無顯著性(P>0.05)。從倍體類型(表2)，各級(jí)骨巨細(xì)胞瘤DNA倍體，均有檢測到5C和>5C細(xì)胞，這兩種類型倍體百分率均值，隨著病理分級(jí)增高而增高，但經(jīng)t檢驗(yàn)，它們之間的差異無顯著性(P>0.05)。作者以DI值不在0.901.10之間且出現(xiàn)>5C細(xì)胞為標(biāo)準(zhǔn)判定非整倍體例數(shù)3(表3)，經(jīng)2檢

8、驗(yàn)非整倍體例數(shù)在各級(jí)骨巨細(xì)胞瘤間差異無顯著性(P>0.05)。在23例級(jí)骨巨細(xì)胞瘤中，發(fā)現(xiàn)1例DI值為2.093，且5C和>5C細(xì)胞百分率分別為30.09和18.45。級(jí)中的3例非整倍體，有1例DI值<0.90但又檢測到>5C細(xì)胞。 3討論骨巨細(xì)胞瘤病理學(xué)分級(jí)(Jaffe三級(jí))沿用至今，但人們?cè)絹碓蕉嗟匕l(fā)現(xiàn)該分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)不能準(zhǔn)確地反映骨巨細(xì)胞瘤的生物學(xué)行為，因此很多學(xué)者對(duì)該分級(jí)提出異議4，5。本實(shí)驗(yàn)旨在應(yīng)用像細(xì)胞光度計(jì)對(duì)該瘤DNA含量進(jìn)行測量，研究其和骨巨細(xì)胞瘤各級(jí)別的關(guān)系。細(xì)胞核DNA含量的測定，能直接反映癌變過程中的細(xì)胞增殖和癌組織中的染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)的顯著異常。DI值

9、和倍體分布是兩個(gè)相互補(bǔ)充的指標(biāo)，前者反應(yīng)細(xì)胞DNA平均含量，數(shù)據(jù)精確度高，但靈敏度稍差；后者反應(yīng)細(xì)胞中染色體各種倍體核型的多少，靈敏度高，但特異性稍差。因此，作者用DI值不在0.901.10且有>5C細(xì)胞的檢出，作為判定非整倍體之標(biāo)準(zhǔn)。從結(jié)果看(表1，2)，各級(jí)別的倍體類型，DI值之間的差異均無顯著性，說明該病理分級(jí)并不能指示腫瘤的惡變傾向，與有些學(xué)者用FCM研究的結(jié)果相似5。但各級(jí)別骨巨細(xì)胞瘤中均有非整倍體例數(shù)的檢出，提示該瘤具有惡性傾向；各級(jí)別DNA倍體類型均有5C，>5C細(xì)胞分布，DI均值稍大于1.10，這些結(jié)果支持骨巨細(xì)胞瘤屬低惡度腫瘤的觀點(diǎn)6。在本實(shí)驗(yàn)中，在級(jí)中發(fā)現(xiàn)1例，

10、級(jí)中1例，DI值>2，5C、>5C細(xì)胞為DNA直方的主流(另一峰值位于34C處)，HE切片上這兩例單核瘤細(xì)胞核肥大，有明顯異形性，組織學(xué)具有肉瘤樣特點(diǎn)應(yīng)劃歸惡性巨細(xì)胞瘤。另外，級(jí)、級(jí)中有4例DI值>1.5，DNA倍體類型分布廣泛，直方為不規(guī)則多峰組合，它們的基質(zhì)細(xì)胞核較肥大深染，亦呈一定的異型性。在級(jí)中還有1例復(fù)發(fā)性的巨細(xì)胞瘤，其DI值<0.90且又檢出>5C細(xì)胞，說明該例細(xì)胞分裂，增殖均異常，才同時(shí)有低二倍體和>5C細(xì)胞的出現(xiàn)。各級(jí)腫瘤中均存在二倍體例數(shù)，且從DI均值<1.3，2C、34C倍體百分率均值為主上看，提示本實(shí)驗(yàn)有部分骨巨細(xì)胞瘤是良性的。綜

11、上分析，骨巨細(xì)胞瘤(除惡性巨細(xì)胞瘤外)，應(yīng)是良、惡性交界瘤，各級(jí)區(qū)分在判定該腫瘤惡變傾向上已無意義，但要注意該腫瘤的潛在惡性。作者單位：鄭偉（350004 福州，福建醫(yī)科大學(xué)病理教研室）黃健文（350004 福州，福建醫(yī)科大學(xué)病理教研室）參考文獻(xiàn)：1董郡，等.病理學(xué)M.第2版.北京：人民衛(wèi)生出版社，1996.907.2鄭偉，李一偉.腫瘤細(xì)胞DNA像分析技術(shù)探討J.臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，1997，13(2)：180.3徐根興.定量細(xì)胞學(xué)和細(xì)胞化學(xué)技術(shù)M.長春：吉林科學(xué)技術(shù)出版社，1993.79，95.4Fukunaga M,Nikaido T,Shimoda T,et al.A flow cytometric DNA analysis of giant cell tumors of bone including two case