人教版高中生物 選修1生物技術(shù)實踐全套學案

1、專題1傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用第1課時果酒和果醋的制作一、果酒和果醋的制作原理1果酒制作的原理(1)酵母菌類型：_，具有成形的細胞核。繁殖方式：出芽生殖和孢子生殖。溫度低時形成孢子，進入休眠狀態(tài)；溫度適宜時，進行_，繁殖速度快。代謝類型：異養(yǎng)兼性厭氧微生物。(2)制作原理在有氧條件下，酵母菌進行_，大量_，反應(yīng)式為：C6H12O66O26CO26H2O在無氧條件下，酵母菌進行_，反應(yīng)式為：C6H12O62C2H5OH2CO2(3)影響酒精發(fā)酵的環(huán)境條件有_。發(fā)酵溫度控制在_范圍內(nèi)。在_的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到抑制。酵母菌生長的最適pH為_。2果醋制作

2、的原理(1)醋酸菌：又名醋酸桿菌。類型：_。繁殖方式：_。代謝類型：_。(2)果醋制作的原理在氧氣充足時，能分別把_兩種反應(yīng)物轉(zhuǎn)化為_。當缺少_時可將乙醇轉(zhuǎn)變成乙醛，并進一步轉(zhuǎn)變成醋酸。反應(yīng)式：C2H5OHO2CH3COOHH2O(3)影響醋酸菌發(fā)酵的條件醋酸菌最適生長溫度為_。醋酸菌屬于需氧型微生物，發(fā)酵過程中需要_。最適pH為_。二、果酒與果醋制作的操作流程1實驗流程 2實驗裝置充氣口：在果醋發(fā)酵時連接充氣泵，輸入氧氣。因為酵母菌產(chǎn)生酒精時是厭氧的，所以充氣口設(shè)開關(guān)。排氣口：排出果酒發(fā)酵時產(chǎn)生的二氧化碳。排氣口和一個長而彎曲的膠管連接：防止空氣中的雜菌進入。出料口：取樣檢查和放出發(fā)酵液。使

3、用方法：在進行果酒發(fā)酵時要關(guān)閉充氣口；在進行果醋發(fā)酵時，充氣口要連續(xù)充入氧氣。3實驗操作(1)材料的選擇與處理：選擇_的葡萄，榨汁前要先_，再除_。滅菌：a.榨汁機要清洗干凈，并晾干。b發(fā)酵裝置要清洗干凈，并用_消毒。c裝入葡萄汁后，封閉充氣口。榨汁將葡萄放入榨汁機中榨取葡萄汁，避免將果核壓破；若葡萄未充分成熟，葡萄汁內(nèi)可加糖。發(fā)酵a裝置：將葡萄汁裝入發(fā)酵瓶，留大約_的空間。b制葡萄酒：_充氣口；溫度應(yīng)控制在_；時間控制在1012 d左右。c制葡萄醋：溫度應(yīng)控制在_；時間控制在78 d左右；適時通過充氣口充入_。4結(jié)果分析與評價(1)實驗現(xiàn)象發(fā)酵酒精發(fā)酵醋酸發(fā)酵氣味和味道酒香味食醋味氣泡和泡沫

4、有泡沫無泡沫發(fā)酵液顏色混濁混濁，液面形成白色菌膜(2)檢驗果酒的制作是否成功檢驗方法：發(fā)酵是否有酒精產(chǎn)生，可用_溶液來檢驗。檢驗原理：酸性條件下，重鉻酸鉀和酒精反應(yīng)呈現(xiàn)_。檢驗步驟：先在試管中加入_2 mL，再滴入物質(zhì)的量濃度為3 mol/L的_3滴，振蕩均勻，最后滴加常溫下飽和的_溶液3滴，振蕩試管，觀察_。(3)檢驗果醋的制作是否成功可通過_進行初步鑒定，再通過檢測和比較醋酸發(fā)酵前后的_做進一步的鑒定。知識點一果酒和果醋制作的原理1請根據(jù)某同學嘗試使用罐頭瓶在常溫(21±3)下制作果酒的過程，回答下列問題：(1)開始時向消過毒的罐頭瓶中加入了新鮮的葡萄汁和酵母菌，添加酵母菌的目的

5、是_，添加葡萄汁的目的是為酵母菌的生長發(fā)育提供_。(2)葡萄汁裝入瓶中時要留出大約1/3的空間，這樣做的主要目的是_。在以后的過程中，每隔12 h左右將瓶蓋擰松一次(不是打開瓶蓋)，此后再擰緊，這樣做的主要目的是_。(3)加入的新鮮葡萄汁沒有進行過滅菌處理，但是在制出的果酒中基本檢測不出酵母菌以外的雜菌，從生態(tài)學角度分析：一是酵母菌與雜菌之間存在的_關(guān)系有利于酵母的生長繁殖；二是由于果酒中的_。(4)在制作果酒時，可以將果酒進一步發(fā)酵，獲得果醋。在工業(yè)生產(chǎn)制作蘋果醋時常常先將蘋果發(fā)酵成酒，再放入醋酸菌發(fā)酵成果醋，請寫出相關(guān)的反應(yīng)式_。(5)制葡萄醋時，需要適時地通過充氣口向容器內(nèi)充氣，原因是_

6、。(6)若酵母菌分解葡萄汁中的葡萄糖36 g，則可生成酒精_mol。2下列產(chǎn)醋最多的措施是()A在果酒中加入食醋，并通氣B在果酒中加入變酸的酒表面的菌膜，并通氣C將果酒暴露在空氣中D在果酒中加入沖洗葡萄的水，并通氣知識點二果酒與果醋的制作過程3如圖是果酒和果醋制作的實驗流程和某同學設(shè)計的果酒和果醋的發(fā)酵裝置。根據(jù)圖示回答下列問題：(1)完成圖1中的實驗流程。(2)沖洗的主要目的是_，沖洗應(yīng)特別注意不能_，以防止菌種的流失。(3)圖2裝置中的充氣口在_時關(guān)閉，在_時連接充氣泵，并連續(xù)不斷地向內(nèi)_。(4)排氣口在果酒發(fā)酵時排出的氣體是由_產(chǎn)生的_，在果醋發(fā)酵時排出的是_。(5)若在果汁中就含有醋酸

7、菌，在果酒發(fā)酵旺盛時，醋酸菌能否將果汁中的糖發(fā)酵為醋酸？說明原因。_。(6)在酒精發(fā)酵時瓶內(nèi)溫度一般應(yīng)控制為_。醋酸發(fā)酵時溫度一般應(yīng)控制為_。4關(guān)于用塑料瓶制果酒和果醋的敘述，正確的是()A為了提高果酒的產(chǎn)出量，果汁應(yīng)盡量裝滿發(fā)酵瓶B醋酸發(fā)酵階段應(yīng)封閉瓶口，防止雜菌污染C制果酒過程中每天需適時打開瓶蓋D果酒制成后，可將裝置轉(zhuǎn)移至溫度較高的環(huán)境中制果醋第2課時腐乳的制作一、腐乳的制作原理1主要微生物毛霉(1)毛霉的生物學特征：腐乳制作過程中發(fā)揮作用的微生物主要是_，屬于_，同化作用類型是_。(2)毛霉的作用：毛霉等微生物產(chǎn)生的_酶等能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的_和_；產(chǎn)生的_酶能將豆腐中的脂

8、肪水解為_和_。2腐乳制作的發(fā)酵機理制作腐乳的過程主要是豆腐所含的蛋白質(zhì)發(fā)生生物化學反應(yīng)的過程。釀造腐乳的主要生產(chǎn)工序是將豆腐進行_和_。(1)前期發(fā)酵主要變化：毛霉在豆腐(白坯)上的生長。條件：發(fā)酵溫度為_。作用：a.使豆腐表面由一層菌膜包住，形成_。b.毛霉分泌以_為主的各種酶，有利于將豆腐所含有的蛋白質(zhì)水解為小分子的_。(2)后期發(fā)酵實質(zhì)：酶與微生物協(xié)同參與生化反應(yīng)的過程。主要變化 二、腐乳的制作過程1實驗流程2具體操作(1)讓豆腐上長出毛霉選材：所用豆腐的含水量為_左右最適宜，水分過多腐乳不易成形，過少則不利于毛霉的生長。切塊：將所選擇的豆腐切成3 cm×3 cm×

9、1 cm的小塊，若切的過小_，過大則中間部分很難形成腐乳。接種：將切好的豆腐塊等距離排放，周圍留有一定空隙，并將溫度控制在_。該溫度下_生長迅速，_等其他微生物生長較緩慢。為了提高毛霉的純度，也可以將優(yōu)良毛霉菌種直接接種在豆腐上。(2)加鹽腌制：將長滿毛霉的豆腐塊分層加鹽，加鹽量要隨著層數(shù)的加高而_，近瓶口的表層要_。加鹽的目的是使_，利于后期制作時成形；同時鹽也能_的生長，避免豆腐塊腐敗變質(zhì)。長滿毛霉的豆腐塊與鹽的質(zhì)量分數(shù)比為_。(3)加鹵湯裝瓶：鹵湯中酒精的含量應(yīng)控制在_左右，它能_微生物的生長，同時與腐乳獨特的_形成有關(guān)。香辛料可以調(diào)制腐乳的_，也具有_的作用。(4)密封腌制：將用鹽腌制

10、好的豆腐塊迅速小心地裝入洗刷干凈并用沸水消毒的玻璃瓶中，并整齊擺放，然后加入鹵湯。將瓶口通過酒精燈的火焰后，用膠條將瓶口密封。在此過程中時刻注意防止雜菌污染。3影響腐乳品質(zhì)的因素(1)鹵湯直接關(guān)系到腐乳的色、香、味鹵湯是由_和_配制而成的。鹵湯中的酒可以選用料酒、黃酒、米酒、高粱酒等，含量一般控制在_。加酒可以_，同時能使腐乳具有獨特的香味。香辛料種類很多，如胡椒、花椒、八角、桂皮、姜、辣椒等，香辛料可以調(diào)制腐乳的_，也具有_的作用。(2)控制好材料的用量用鹽腌制時，若鹽的濃度過低，不足以抑制微生物生長，可能導(dǎo)致_；若鹽的濃度過高，會影響_。鹵湯中酒的含量應(yīng)控制在12%左右。酒精含量過高，腐乳

11、成熟的時間會延長；酒精含量過低，不足以抑制微生物生長，可能導(dǎo)致豆腐腐敗。(3)掌握好發(fā)酵溫度和時間毛霉的最適生長溫度為1518，保持其生長適宜溫度，可縮短發(fā)酵時間。溫度過低或過高會影響毛霉的_和_，從而影響發(fā)酵的進程和發(fā)酵質(zhì)量；時間過短，發(fā)酵不充分；時間過長，豆腐會軟化不易成形，從而影響_。知識點一腐乳的制作原理1腐乳是通過微生物發(fā)酵制成的食品，其制作流程如下，請回答有關(guān)問題：(1)民間制作腐乳時，豆腐塊上生長的毛霉來自空氣中的毛霉孢子，現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在嚴格的無菌條件下，將優(yōu)良的毛霉菌種直接接種在豆腐上，這樣做的目的是什么？_。(2)制作腐乳的原料中哪種有機物含量比較高？_；毛霉可利用體內(nèi)的

12、酶將其分解成哪些小分子有機物？_。(3)在用鹽腌制腐乳的過程中，若鹽的濃度過低會出現(xiàn)什么現(xiàn)象？_。(4)鹵湯中酒的含量為什么要控制在12%左右？_ _。2毛霉的新陳代謝類型為異養(yǎng)需氧型，下列哪項措施與其需氧有關(guān)()A豆腐含水量控制在70%左右B控制溫度為1518C用塑料袋罩住發(fā)酵盤時不要太嚴D與上述A、C項措施有關(guān)知識點二腐乳的制作過程3請回答下列有關(guān)腐乳制作的問題：(1)腐乳制作過程中有多種微生物的參與，其中起主要作用的是_，其菌落特征是_。現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在嚴格無菌的條件下，將優(yōu)良的菌種直接接種到豆腐上，優(yōu)點是_。(2)腐乳制作的流程中需要嚴格消毒的階段是_、_。(3)加鹽腌制的過程中，要

13、注意的是_。(4)配制鹵湯時加酒的作用是_。其中酒的含量應(yīng)控制在_左右，酒精含量過高，_，酒精含量過低則_。香辛料的作用是_。(5)用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要_，加入鹵湯后，要用膠條密封，密封時最好將瓶口通過酒精燈火焰，防止_。4下列關(guān)于腐乳制作過程中食鹽和酒精用量的說法，正確的是()A食鹽不能抑制微生物生長，只會影響腐乳口味B酒精含量過高促進微生物生長C酒精含量過低可能導(dǎo)致豆腐腐敗D以上說法均不對第3課時制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量一、泡菜的制作1乳酸菌(1)生物學特征乳酸菌是由原核細胞構(gòu)成的_；繁殖方式是分裂生殖；新陳代謝類型是_，有氧時發(fā)酵(無氧呼吸)受到抑制。(2)乳酸菌的作用在

14、_條件下，乳酸菌可將_分解成_。反應(yīng)式：C6H12O62C3H6O3(乳酸)2泡菜壇的選擇標準是_、_、_、_、_，否則容易引起蔬菜腐爛。3實驗流程4操作步驟(1)將新鮮蔬菜預(yù)先處理成_。(2)泡菜鹽水按清水和鹽的質(zhì)量比為_的比例配制，_備用。(3)預(yù)處理的新鮮蔬菜裝至半壇時放入蒜瓣、生姜、香辛料等佐料，并繼續(xù)裝至八成滿。(4)倒入配制好的_，使鹽水浸沒全部菜料。(5)蓋上泡菜壇蓋子，并用水_。發(fā)酵時間長短受室內(nèi)溫度的影響。5腌制的條件(1)在泡菜的腌制過程中，需要控制的條件包括腌制的_、_和_的用量。(2)溫度過高、食鹽用量不足10%、腌制時間過短，容易造成細菌大量繁殖，亞硝酸鹽含量增加。6

15、泡菜腌制過程中乳酸菌和乳酸的變化泡菜發(fā)酵可分為三個階段：(1)發(fā)酵初期：以不產(chǎn)酸的_和_活動為主，同時還有一部分_活動。該時期利用了氧氣，產(chǎn)生了缺氧環(huán)境，乳酸菌才開始活動。乳酸菌和乳酸的量都比較少。(2)發(fā)酵中期：由于乳酸菌產(chǎn)生了大量乳酸，其他細菌活動受到抑制，只有乳酸菌活動強烈。此時期_數(shù)量達到高峰，_的量繼續(xù)積累。(3)發(fā)酵后期：由于乳酸的積累，酸度繼續(xù)增長，乳酸菌活動也受到抑制，乳酸菌數(shù)量下降。乳酸菌和乳酸在整個發(fā)酵過程中的含量變化趨勢為：二、測定泡菜中亞硝酸鹽的含量1亞硝酸鹽(1)亞硝酸鹽為_色粉末，易溶于_，在食品加工中用作_。(2)分布：亞硝酸鹽在蔬菜中平均含量約為_ mg/kg；

16、咸菜中平均含量為_ mg/kg以上；而豆粉中的平均含量可達_ mg/kg。(3)危害：膳食中的亞硝酸鹽一般不會危害人體健康，但是，當人體攝入的亞硝酸鹽總量達到_ g時，會引起中毒；當攝入總量達到_ g時會引起死亡。(4)在人體內(nèi)的代謝特點：正常情況下亞硝酸鹽可以_；只有在特定條件下(適宜的_、_和_作用)，才會轉(zhuǎn)變?yōu)橹掳┪颻。(5)衛(wèi)生標準：我國衛(wèi)生標準規(guī)定，亞硝酸鹽的殘留量在肉制品中不得超過_ mg/kg，醬腌菜中不超過_ mg/kg，而嬰兒奶粉中不得超過_ mg/kg。2實驗原理在_條件下，亞硝酸鹽與_發(fā)生_后，與_結(jié)合形成_。將顯色反應(yīng)后的樣品與已知濃度的_進行_，可大致估算出泡菜中亞硝

17、酸鹽的含量。3操作過程(1)配制_(2)制備_(3)制備_(4)比色：觀察樣品顏色的變化，并與標準顯色液比較，找出與_最相近的顏色，記錄對應(yīng)的亞硝酸鈉含量，并按照下面的公式進行計算。亞硝酸鹽含量4結(jié)果記錄每隔2天測一次，將結(jié)果記錄在下表。泡菜腌制過程中亞硝酸鹽含量變化(mg/kg)腌制天數(shù)1號壇2號壇3號壇封壇前2天4天6天8天5.結(jié)論分析泡菜發(fā)酵可分為三個階段：發(fā)酵初期，由于硝酸鹽還原菌的活動，亞硝酸鹽含量_。發(fā)酵中期：由于硝酸鹽還原菌受抑制；同時形成的亞硝酸鹽又被分解，因而亞硝酸鹽_。發(fā)酵后期，硝酸鹽還原菌完全受抑制因而亞硝酸鹽含量_。亞硝酸鹽在整個發(fā)酵過程中的含量變化趨勢如圖所示。知識點

18、一泡菜的制作1據(jù)所學泡菜的制作過程，回答下面的問題：(1)制作泡菜所利用的乳酸菌，從其結(jié)構(gòu)上分析，屬于哪類生物？_。(2)請用反應(yīng)式表示出乳酸菌發(fā)酵的原理。_。(3)制作泡菜的壇子必須密封，試說明其道理。_。(4)試討論制作泡菜的過程中應(yīng)注意的問題及原因。_。2在泡菜的制作過程中，不正確的是()A按照清水與鹽的質(zhì)量比為41的比例配制鹽水B按照清水與鹽的質(zhì)量比為51的比例配制鹽水C鹽水入壇前要煮沸冷卻，以防污染D在壇蓋邊沿的水槽中要注滿水，以保證壇內(nèi)的無氧環(huán)境知識點二泡菜制作過程中亞硝酸鹽含量的測定3如圖是泡菜的制作及測定亞硝酸鹽含量的實驗流程示意圖，請據(jù)圖回答：(1)制作泡菜宜選用新鮮蔬菜的原

19、因是_。(2)制備泡菜的鹽水中清水與鹽的質(zhì)量比約為_，鹽水需煮沸并冷卻后才可使用，原因是_試說明鹽在泡菜制作中的作用：_。(3)泡菜風味形成的關(guān)鍵在于_的加入。(4)泡菜的制作方法不當，很容易造成泡菜變質(zhì)，甚至發(fā)霉變味，試分析可能的原因：_。(5)發(fā)酵過程中應(yīng)定期測定亞硝酸鹽的含量，原因是_。(6)測定亞硝酸鹽含量的方法是_。4下列關(guān)于亞硝酸鹽的敘述，錯誤的是()A亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水B亞硝酸鹽分布廣泛，其中蔬菜中亞硝酸鹽的平均含量約為4 mg/kgC咸菜中亞硝酸鹽的平均含量在7 mg/kg以上，所以盡量少吃咸菜D亞硝酸鹽不會危害人體健康，并且還具有防腐作用，所以在食品中應(yīng)多加些以延長

20、食品的保質(zhì)期專題2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用第1課時微生物的實驗室培養(yǎng)一、培養(yǎng)基與無菌技術(shù)1培養(yǎng)基(1)概念：人們按照微生物對_的不同需求，配制出供其_的_。(2)成分：一般含有_、_、_、_，此外還要滿足微生物對_(即生長因子)、_以及氧氣的需求。拓展深化營養(yǎng)物質(zhì)定義作用主要來源碳源能提供所需_的物質(zhì)構(gòu)成生物體的_和一些_，有些是異養(yǎng)生物的_無機化合物：CO2、NaHCO3等；有機化合物：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等氮源能提供所需_的物質(zhì)合成蛋白質(zhì)、核酸以及含氮的代謝產(chǎn)物無機化合物：N2、NH3、銨鹽、硝酸鹽等；有機化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等特殊營養(yǎng)物質(zhì)(生長因子)生長必不可少的_酶和核酸的組

21、成成分維生素、氨基酸、堿基等水在生物體內(nèi)含量很高，在低等生物體內(nèi)含量更高不僅是優(yōu)良的溶劑，而且可維持生物大分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定無機鹽為微生物提供除碳、氮以外的各種重要元素細胞內(nèi)的組成成分，生理調(diào)節(jié)物質(zhì)，某些化能自養(yǎng)菌的能源，酶的激活劑(3)培養(yǎng)基的種類劃分標準培養(yǎng)基種類特點用途物理性質(zhì)_培養(yǎng)基加凝固劑，如瓊脂_半固體培養(yǎng)基觀察微生物的運動、分類、鑒定_培養(yǎng)基微生物_、_、活菌計數(shù)、保藏菌種化學成分_培養(yǎng)基含化學成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)_培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分明確(用化學成分已知的化學物質(zhì)配成)分類、鑒定用途_培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種化學物質(zhì)，以_不需要的微生物的生長，_所需要的微生物的生長培養(yǎng)、_出特定

22、微生物(如培養(yǎng)酵母菌和霉菌，可在培養(yǎng)基中加入青霉素或鏈霉素；培養(yǎng)固氮菌可用無氮培養(yǎng)基，如阿須貝培養(yǎng)基)_培養(yǎng)基根據(jù)微生物的代謝特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥品_不同種類的微生物，如可用伊紅美藍培養(yǎng)基鑒別飲用水或乳制品中是否有大腸桿菌(若有，菌落呈深紫色，并帶有金屬光澤)注意病毒目前不能利用人工培養(yǎng)基來培養(yǎng)，需接種在動、植物組織細胞中才能繁殖。常用于培養(yǎng)病毒的是活雞胚。2無菌技術(shù)(1)概念：防止一切外來雜菌的侵入，并保持滅菌物品及無菌區(qū)域不再被污染的方法，稱為無菌技術(shù)。注意在微生物的實驗室培養(yǎng)中，無菌技術(shù)的核心是_，_。(2)無菌技術(shù)的具體內(nèi)容對實驗操作的_、操作者的_進行清潔和消毒。將

23、用于微生物培養(yǎng)的_、接種用具和培養(yǎng)基等進行_。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在_進行。實驗操作時應(yīng)避免已_處理的材料用具與周圍的物品相接觸。(3)消毒和滅菌的概念消毒：消毒是指使用_的物理或化學方法殺死物體表面或內(nèi)部的_(不包括芽孢和孢子)。滅菌：滅菌是指使用_的理化因素殺死物體內(nèi)外_，包括_。消毒與滅菌的區(qū)別：兩者最大的區(qū)別是_。拓展深化某些細菌在其生長發(fā)育后期，可在細胞內(nèi)形成一個圓形的抗逆性休眠體，稱為芽孢。每個細菌細胞僅形成一個芽孢，故它無繁殖功能。芽孢有極強的抗熱、抗輻射、抗化學藥物和抗靜水壓的能力。芽孢的休眠能力十分驚人，可保持幾年到幾十年的生活力。孢子是微生物產(chǎn)生的一種有

24、繁殖或休眠作用的細胞。一般是單細胞，個體微小，通常是適應(yīng)于從不利環(huán)境條件中存活下來，并在條件改變時產(chǎn)生新的營養(yǎng)體，能直接發(fā)育成新個體。(4)消毒與滅菌的常用方法方法條件作用對象消毒_100，煮沸56 min殺死微生物的營養(yǎng)細胞和一部分芽孢_7075煮30 min或80煮15 min不耐高溫的液體_70%的酒精對雙手消毒50%的石炭酸、來蘇水對空氣消毒一定濃度的乳酸、食醋通過熏蒸對空氣進行消毒紫外線法紫外線照射30 min物體表面或空氣中的微生物滅菌_在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒對接種環(huán)、接種針或其他金屬工具滅菌，也可以對試管口、瓶口滅菌_在干熱滅菌箱內(nèi)，160170條件下，加熱12 h耐高溫且

25、需保持干燥的物品，如玻璃器皿和金屬用具等_在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，121，100 kPa，滅菌1530 min_30 W照射30 min小型接種室、接種箱等二、實驗操作(一)配制培養(yǎng)基1配制原則(1)_(根據(jù)微生物的種類、培養(yǎng)目的等)，如培養(yǎng)基可由簡單的無機物組成；生產(chǎn)用培養(yǎng)基內(nèi)可加入化學成分不明確的天然物質(zhì)，而分類鑒定用培養(yǎng)基內(nèi)必須加入已知化學成分的物質(zhì)。(2)_，注意各種營養(yǎng)物質(zhì)的濃度和比例。(3)_，各種微生物適宜生長的pH范圍不同，細菌6.57.5、放線菌7.58.5、真菌5.06.0。注意不同微生物對營養(yǎng)需求不同，因此，首先根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需求配制針對性強的培養(yǎng)基。營養(yǎng)物質(zhì)濃度過低不

26、能滿足微生物營養(yǎng)需要，過高對微生物的生長有抑制作用，另外，培養(yǎng)基中各營養(yǎng)物質(zhì)濃度比直接影響微生物的生長繁殖和代謝產(chǎn)物的形成和積累，其中碳氮比(C/N)的影響較大。例如，在谷氨酸生產(chǎn)中，當培養(yǎng)基中的碳源與氮源的比為41時，菌體大量繁殖，而產(chǎn)生的谷氨酸少；當碳源與氮源的比為31時，菌體繁殖受抑制，但谷氨酸合成量大增。2配制方法(以制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基為例)(1)培養(yǎng)異養(yǎng)菌的牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成培養(yǎng)基組分提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)牛肉膏5.0 g碳源、磷酸鹽和維生素蛋白胨10.0 g氮源和維生素NaCl 5.0 g無機鹽H2O定容至1 000 mL氫元素、氧元素(2)實驗流程提醒合格的培養(yǎng)

27、基必須滅菌效果好。培養(yǎng)基配制好后，要放在恒溫箱中保溫12 d，若無菌落生長則說明制備的培養(yǎng)基是合格的。(二)純化大腸桿菌純化大腸桿菌就是為了獲得大腸桿菌的純種菌落，這需在培養(yǎng)時，盡量使菌落中的菌體來自于一個大腸桿菌的分裂，即這個菌落的細菌群體由一個大腸桿菌繁殖而來，這就需接種時盡量接種單個的大腸桿菌。1微生物接種的方法微生物接種的方法最常用的是_和_兩種。(1)_通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。將_放在酒精燈火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開盛有菌液的試管的_。將試管口通過酒精燈的_。將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，_一環(huán)菌

28、液。將試管口通過酒精燈的火焰，并迅速塞上棉塞。_將培養(yǎng)皿皿蓋打開一條縫隙，_將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入_，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)基。灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將_的劃線與_相連。將_，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(2)_則是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。系列稀釋操作a取盛有9 mL水的6支試管滅菌，并按101106的順序編號。b用_吸取1 mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中。用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，使菌液與水充分混勻

29、。c從101倍稀釋的試管中吸取1 mL稀釋液，注入102倍稀釋的試管內(nèi)吹吸均勻，獲得102倍液。依此類推。涂布平板操作a將_浸在盛有酒精的燒杯中。b取不超過0.1 mL的_，滴加到培養(yǎng)基表面。c將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻810 s。d用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)皿，使菌液分布均勻。2注意事項(1)平板劃線法操作第一步即取菌種之前及每次劃線之前都需要進行_，劃線操作結(jié)束時，仍需灼燒_。從第二次以后的劃線操作總是從_開始，能使細菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加逐漸減少，最終得到由單個細菌繁殖而來的菌落。(2)稀釋涂布平板法稀釋涂布平板的操作比較復(fù)雜，

30、且各個細節(jié)均需保證“_”，應(yīng)特別注意：酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適。吸管頭不要接觸任何其他物體。吸管要在酒精燈火焰周圍使用。3微生物分離純化培養(yǎng)的結(jié)果作出分析與評價(1)培養(yǎng)未接種培養(yǎng)基的作用是對照，若有菌落形成，說明培養(yǎng)基滅菌不徹底。(2)在肉湯培養(yǎng)基上，大腸桿菌菌落呈白色，為圓形，光滑有光澤，邊緣整齊。(3)培養(yǎng)12 h和24 h后的菌落大小不同，菌落分布位置相同。原因是時間越長，菌落中細菌繁殖越多，菌落體積越大，而菌落的位置不動，只是菌落數(shù)增多。(4)頻繁使用的菌種利用臨時保藏法保存，長期保存菌種的方法是甘油管藏法。前者利用固體斜面培養(yǎng)基培養(yǎng)后，保存在4冰箱中，第36個月轉(zhuǎn)種培養(yǎng)一次，缺點

31、是保存時間較短，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異；后者將菌種與無菌甘油等量混合后保存在20的冷凍箱中。4菌種的保存為了保持菌種的純凈，需對菌種進行保藏。對于頻繁使用的菌種，我們可以采用_法；對于需要長期保存的菌種，可以采用_法。將菌種放在低溫環(huán)境中保藏的目的是_，但時間長了菌種還是要老化的，因此對臨時保存的菌種_個月后需重新接種。知識點一培養(yǎng)基與無菌技術(shù)1不同的微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的需要各不相同。下列有關(guān)一種以CO2為唯一碳源的自養(yǎng)微生物營養(yǎng)的描述中，不正確的是()A氮源物質(zhì)為該微生物提供必要的氮素B碳源物質(zhì)也是該微生物的能源物質(zhì)C無機鹽是該微生物不可缺少的營養(yǎng)物質(zhì)D水是該微生物的營養(yǎng)要素之一2下列說法正

32、確的是()A培養(yǎng)基是為微生物的生長繁殖提供營養(yǎng)的基質(zhì)B培養(yǎng)基只有兩類：液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基C除水以外的無機物只能提供無機鹽D無機氮源不可能提供能量知識點二大腸桿菌的純化培養(yǎng)3有關(guān)平板劃線操作的敘述，不正確的是()A第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物B每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上的菌種C在第二區(qū)域內(nèi)劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于菌液D劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上的菌種，避免細菌污染環(huán)境和感染操作者4下列為某同學在培養(yǎng)金黃色葡萄球菌實驗中的部分操作步驟，其中正確的是()A培養(yǎng)基中蛋白胨、牛肉膏溶化后，直接補充蒸餾水至100 m

33、LB培養(yǎng)基配制完畢可直接使用C加壓至100 kPa之前，要徹底排出鍋內(nèi)的冷空氣D將接種環(huán)放在酒精燈火焰上灼燒，滅菌后立即伸入菌液試管內(nèi)挑取少量菌種第2課時土壤中分解尿素細菌的分離與計數(shù)一、研究思路1篩選菌株(1)實驗室中微生物篩選的原理人為提供有利于_生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時_或_其他微生物生長。(2)選擇培養(yǎng)基在微生物學中，將允許_種類的微生物生長，同時_或_其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱做選擇培養(yǎng)基。(3)分離分解尿素的細菌的選擇培養(yǎng)基在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長提供碳源的是_，提供氮源的是_，瓊脂的作用是凝固劑。該培養(yǎng)基對微生物具有選擇作用。其選擇機制是_才能在該培

34、養(yǎng)基上生長。土壤中的細菌之所以能分解尿素，是因為它們體內(nèi)能合成_，將尿素分解的反應(yīng)式是_。Taq細菌能忍受93左右的高溫，是在美國黃石國家公園的一個熱泉中發(fā)現(xiàn)的，這說明，在尋找目的菌株時，要根據(jù)_。2統(tǒng)計菌落數(shù)目的方法(1)稀釋涂布平板法(也叫活菌計數(shù)法)原理：當樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的_，通過統(tǒng)計平板上的_，就能推測出樣品中大約含有多少活菌。操作第一，設(shè)置重復(fù)組，增強實驗的說服力與準確性。將待測樣品經(jīng)一系列10倍稀釋，然后選擇_稀釋度的菌液，分別取0.1 mL接種到已制備好的平板上，然后用無菌涂布器將菌液涂布整個平板表面，放在適宜的溫度下培養(yǎng)并計算

35、菌落數(shù)。為使結(jié)果接近真實值，可將同一稀釋度涂布到三個或三個以上的平板上，培養(yǎng)并計算出_。第二，為了保證結(jié)果準確，一般選擇菌落數(shù)在_的平板進行計數(shù)，若設(shè)置的重復(fù)組中結(jié)果相差太遠，意味著操作有誤，需重新實驗。計算公式：每克樣品中的菌株數(shù)×M，其中C代表_，V代表_(mL)，M代表_。(2)顯微鏡直接計數(shù)法原理：此法利用特定的_或_，在顯微鏡下計算一定容積的樣品中微生物的數(shù)量，但不能區(qū)分細菌的死活。計數(shù)板是一塊特制的載玻片，上面有一個特定的面積1 mm2和高0.1 mm的計數(shù)室，在1 mm2的面積里又被劃分成25個(或16個)中格，每個中格進一步劃分成16個(或25個)小格，計數(shù)室由_個小

36、格組成。操作：將稀釋的樣品滴在計數(shù)板上，蓋上蓋玻片，然后在顯微鏡下計數(shù)45個中格中的細菌數(shù)，并求出每個小格所含細菌的平均數(shù)，再按公式求出每毫升樣品中所含的細菌數(shù)。計數(shù)公式：每毫升原液所含細菌數(shù)每小格平均細菌數(shù)×400×10 000×稀釋倍數(shù)。(3)設(shè)置重復(fù)和對照設(shè)置重復(fù)：培養(yǎng)過程中應(yīng)設(shè)置重復(fù)組，同一稀釋度下應(yīng)涂布_個平板，才能增強實驗的說服力與準確性。設(shè)置對照：實驗中應(yīng)設(shè)置對照，主要目的是_對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。如_對照組，觀察培養(yǎng)物中是否有雜菌污染；設(shè)置_培養(yǎng)基，觀察選擇培養(yǎng)基是否具有_作用。二、實驗設(shè)計實驗步驟1土壤取樣：從肥沃、濕潤的土壤中

37、，用無菌小鐵鏟鏟去表層土3 cm左右，迅速取土壤并裝入_密封或事先準備好的_中。2制備培養(yǎng)基：制備_培養(yǎng)基作為對照組，尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基作為_，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否具有_。放寬稀釋范圍，如稀釋倍數(shù)為103107范圍內(nèi)的要分別涂布，而每個稀釋度下需要_個選擇培養(yǎng)基、_個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此需要15個選擇培養(yǎng)基和5個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。兩種培養(yǎng)基應(yīng)各有一個作為_對照，此外還需準備8個滅菌的試管和1個滅菌的移液管。3樣品的稀釋與涂布平板：參考下面的實驗流程示意圖，將10 g土樣加入盛有90 mL無菌生理鹽水的錐形瓶中(錐形瓶體積為250 mL)，充分搖勻，吸取上清液1 mL，轉(zhuǎn)移至盛有_ mL生理鹽水的無菌大試管依次等比稀釋至107稀釋度，并按照由107103稀釋度的順序分別吸取_mL進行平板涂布操作。按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。說明：圖中的1、2、3平板是_，4為_作對照，判斷選擇培養(yǎng)基是否具篩選作用，還有兩個空白對照，即不涂布稀釋后菌液的選擇培養(yǎng)基和牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，驗證培養(yǎng)基中是否_。4將涂布好的培養(yǎng)皿放在30溫度下培養(yǎng)，及時觀察和記錄。5挑選選擇培養(yǎng)基上不同形態(tài)的菌落接入含_培養(yǎng)基的