甜草化學成分研究

1、甜草化學成分研究甜草化學成分研究答辯人：劉文基指導(dǎo)教師：李厚金 副教授中山大學有機所內(nèi)容提要 一、前言 二、研究目的 三、實驗內(nèi)容 四、實驗結(jié)果 五、結(jié)論 致謝一、前 言 甜草是我國南方的一種民間草藥，是茜草科植物，在江西草藥中國草藥大全有其藥用記載，“性平，味甘，有治療黃疸型肝炎、糖尿病、外傷出血、清熱解毒的功效”。其葉子榨汁，可用于蜜蜂、黃蜂等蜂類的蟄傷，療效顯著。二、研究目的 目前尚未見到關(guān)于甜草Oldenlandia cantonensis How 的研究報告。甜草化學成分的研究可發(fā)現(xiàn)新的具有藥用價值的化合物。三、實驗內(nèi)容（一）甜草的采集與提取 原料甜草，2004年7月份采集于江西省地

2、區(qū)的向陽山坡，取地上全草，收集后曬干剪碎，用95%乙醇多次浸泡，合并浸泡液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干，濃縮物再用甲醇溶解，溶解液拌硅膠。硅膠拌樣后吹干進行下一步分離操作。 三、實驗內(nèi)容 （二） 分離提純 實驗用柱層析，薄層層析，以及重結(jié)晶的方法分離提純甜草中的化學成分。用GCMS，紫外光譜法，紅外光譜法，質(zhì)譜法，核磁共振等方法分析確定甜草化學成分。將硅膠拌樣吹干至樣品呈粉末狀態(tài)，進行柱層析初步分離。先用石油醚濕法裝柱，然后依次用PE:EA=10:1， 5:1， 3:1， 2:1， 1:1， 1:2， 1:3溶液梯度沖洗柱子。對初次柱層析得到的溶液進行再次的柱層析分離操作。用重結(jié)晶方法對化合物進一步

3、提純，分離得到的低極性成分用GCMS分析，中等極性成分中得到四個化合物成分（A，B，C，D）。 四、實驗結(jié)果 低極性成分分析,液體油狀物用氯仿溶解，進行GC-MS分析。表1 甜草Oldenlandia cantonensis How的低極性成分及相對含量序號化合物含量(%)序號化合物含量(%)13,3,6-三甲基-2,5-庚二酮0.10313,7-二甲基-7-羥基-二甲縮醛0.7326,10,14-三甲基-2-十五烷酮1.25321-二十八烷醇0.9239-十八烯酸-1-甲基酯0.21332-二十七烷酮0.904Z-8-十六烯0.7534二十六烷酸甲基酯0.8051-十六酸乙基酯1.6435十

4、四烷酸十四烷基酯0.9961,1-二甲氧基十二烷0.1736十一烷二甲縮醛0.8178,11-十八二烯酸甲基酯1.4337二十六烷0.6789(Z)-十八烯酸甲基酯2.14382-甲基丙基酸-十二烷基酯0.909十八烷酸甲基酯0.783928-Nor-17-(H)-hopane0.54101-十七碳烯0.13401-烯-3-酮-10-二甲氧基甲基-17-乙酰氧基-雄甾烷0.48119,12-十八二烯酸乙基酯0.44413,5,22-三烯-豆甾烷0.5712油酸乙基酯0.51422-二十九烷酮1.2613十八烷酸乙基酯0.4243二十七酸甲基酯0.72145(Z)-十九碳烯0.2244Vitam

5、in E1.08153,7,11,15-四甲基-2-烯-1-十六醇0.3545十四酸十六烷基酯2.1616二十烷酸甲基酯0.4946十一烷基二甲縮醛0.9317正二十三烷0.774711-甲基-二十九烷0.79182,4-二-(1-甲基-1-苯基)乙基-苯酚0.7448桉葉油醇0.7619二十二烷酸甲基酯1.1549丁基酸環(huán)己醇酯1.5120二-n-辛基-鄰苯二甲酸酯 1.04501,1-二甲氧基-9-(Z)-十八烷烯1.51212-十二烷基菲0.4751軟木三萜酮0.6622二十三烷酸甲基酯1.16523,5-二烯-3,17-二（三甲基硅氧基）-雄甾烷1.6323二十五碳烷1.2553十六烷

6、基環(huán)氧丙烷0.89241-二十六碳烯1.32547-酮基-3-乙酰氧基-膽甾烷1.3425二十四烷酸甲基酯1.32551-氨基-4-甲基-哌嗪1.21263-甲酰氧基-11-羥基-17-酮基-雄甾烷0.40565,9(11)-二烯-3-乙酰氧基-膽甾烷1.392711,13-二甲基-12-十四烯-1-醇-乙酸酯0.845722,23-二氫豆甾醇1.73281,1-二甲基-十四烷基-叔硫醇1.13583-酮基香樹脂0.95291-(2-十二烷烯)-丁二酸酐0.39595-雄甾烷烯-3,17-二乙酰氧基1.7430二十二烷酸甲基酯0.71609-十八烯酸-二十烷醇酯2.07 中等極性成分分析 共分

7、離得到4個純化合物，分別為十二碳脂肪酸，谷甾醇，2個三萜化合物，其中1個三萜是新的化合物。2個三萜化合物活性顯著, 對人肝癌細胞株Bel-7402的IC50 值分別為6.5g/ml，7.0g/ml ，對人胃腺癌細胞株Mcg-803的IC50值分別為8.0g/ml，7.0g/ml。 化合物A為淺白色奶油狀固體，微加熱即融化，1H-NMR（CDCl3,TMS, ppm)： 7.223，3.634，2.340，2.316，2.291，2.272，2.246，1.277，1.232，1.144，1.123，0.877，0.855，0.832，0.810。 A紅外光譜，IR/cm1（KBr）：3448，

8、2920，2851，2366，2342，1740，1652，1545，1463，1438，1378，1172。 鑒定A為十二碳脂肪酸?；衔顰的H-NMR圖 化合物B，白色粉末固體，1H-NMR（CD3COCD3，TMS，ppm）：5.226，5.215，2.793，2.057，2.049，1.293，1.171，1.128，0.988，0.969，0.952，0.943，0.918，0.898，0.884，0.865，0.839，0.810，0.783。 IR/cm1（KBr）：3421，2927，1690，1651，1574，1456，1407，1273，1185。通過數(shù)據(jù)比較確定其為谷甾

9、醇?；衔顱的H-NMR圖HO谷甾醇 化合物C，白色固體，可結(jié)晶成透明針狀晶體。 1H-NMR（CD3COCD3，TMS，ppm）：7.981，5.222，5.208，5.197，2.794，2.250，2.213，2.045，1.957，1.943，1.933，1.922，1.902，1.891，1.168，1.125，0.982，0.964，0.949，0.937，0.914，0.894，0.870，0.835，0.777。 IR/cm1（KBr）：3428，2927，2856，2337，1736，1689，1632，1574，1458，1404，1385，1274，1254，1170，1

10、107，1042，997。 此化合物比較復(fù)雜，為三萜類化合物，結(jié)構(gòu)確定工作尚在進行中?；衔顲的1H-NMR圖四、實驗結(jié)果表表2 2 化合物化合物D的的NMR數(shù)據(jù)數(shù)據(jù)(DMSO-d6, TMS, 500MHz) 位置編號位置編號DEPT13C NMR1H NMR1CH238.21.542CH223.71.50, 1.913CH76.83.004C38.35CH54.70.666CH226.91.467CH232.61.578C46.79CH46.91.4510C41.611CH222.71.8612CH124.55.1313C138.114C41.515CH227.51.8016CH217.9

11、1.46, 1.3017CH232.61.25,1.43 分子式為 C29H48O3, FABMS：m/z 445M+1+，相對分子量為444。元素分析結(jié)果：C, 78.33; H, 10.90; N, 0.000。IR（KBr）：3420, 2970, 2928, 2871, 1693, 1575, 1455, 1407, 1313, 1279, 1249, 1142, 1091, 1032, 996, 758, 661, 568。 18CH52.32.1119CH315.90.6820CH328.10.9021CH315.10.8722CH316.90.7623CH323.21.0424C

12、H38.30.9425C178.126CH230.01.4227CH38.40.9528CH316.80.8229CH320.90.923-OH 4.1525-COOH 11.8化合物D的13C-NMR圖化合物D的1H-NMR圖化合物D 的結(jié)構(gòu)：HOH3CCH3CH3CH3CH3HOOC1234567891011121314151617181920212223242526272829新化合物新化合物對化合物D衍生物制備將D與苯甲酸反應(yīng)COHO+HOH3CCH3CH3CH3CH3HOOCOOHOOC對化合物C，D進行藥理測試得到以下結(jié)果。表表3 3 對拓撲異構(gòu)酶對拓撲異構(gòu)酶（hTOP I ）的的

13、IC50測定結(jié)果測定結(jié)果 產(chǎn)物編號產(chǎn)物編號結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)產(chǎn)物來源產(chǎn)物來源IC50（gg/mL）C三萜類三萜類甜草甜草18D三萜三萜甜草甜草15表表4 對對肝癌細胞株肝癌細胞株Bel-7402的的IC50 值值測定結(jié)果測定結(jié)果 產(chǎn)物編號產(chǎn)物編號結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)產(chǎn)物來源產(chǎn)物來源IC50（gg/mL）C三萜類三萜類甜草甜草6.5D三萜三萜甜草甜草7.0表表5 對對人胃腺癌細胞株人胃腺癌細胞株Mcg-803的的IC50值值測定結(jié)果測定結(jié)果產(chǎn)物編號產(chǎn)物編號結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)產(chǎn)物來源產(chǎn)物來源IC50（gg/mL）C三萜類三萜類甜草甜草8.0D三萜三萜甜草甜草7.0五、結(jié)論 實驗成功分離到預(yù)期的化合物，并對化合物的種類及結(jié)構(gòu)進行了鑒定。 對分離所得到的2個三萜類化合物進行了結(jié)構(gòu)鑒定， 確定其中1個化合物結(jié)構(gòu)式，為新化合物，另外1個還在測