止癢洗劑的定性定量分析

1、止癢洗劑的定性定量分析    【摘要】  目的 對止癢洗劑進行定性定量分析。方法 采用薄層色譜法對止癢洗劑中的蛇床子、黃柏、防風進行定性鑒別;以蛇床子素為指標成分,采用高效液相色譜法對蛇床子素進行了定量分析。結果 各薄層定性色譜中,在與對照藥材相應的位置上顯相同顏色的斑點,陰性對照未見干擾;蛇床子素在0.022.60 g范圍內呈良好的線性關系,r=0.999 9,平均加樣回收率為98.81%。結論 定性定量方法結果準確,重復性好,可用于止癢洗劑的質量控制。 【關鍵詞】  止癢洗劑;薄層色譜法;高效液相色譜法;蛇床子素Abstract：

2、Objective To analysis the quality of Zhiyang Lotion. Methods Fructus Cnidii, Cortex Phellodendri Chinesis and Radix Saposhnikoviae in the preparation were identified by TLC, and the content of Osthole was determined by RH-HPLC. Results The method of TLC was simple, accurate and specific. The linear

3、range of Osthole was 0.022.60 g, r=0.999 9. The average recovery was 98.81%. Conclusion The methods were simple, reliable and accurate. It can be applied to the quality control of Zhiyang Lotion.Key words：Zhiyang Lotion;TLC;HPLC;Osthole止癢洗劑是本院臨床經驗方,主要由蛇床子、黃柏、防風、枯礬等組成,具有清熱燥濕、殺蟲止癢之功效,用于治療濕瘡、疥癬等瘙癢性皮膚病。

4、為了對其制劑進行質量控制,我們采用薄層色譜法對止癢洗劑中的黃柏、蛇床子、防風進行了定性控制,并以蛇床子素為指標成分,應用高效液相色譜(HPLC)法進行定量分析,現(xiàn)報道如下。1 儀器與試藥Waters高效液相色譜儀(Waters 515泵,Waters2487紫外檢測器,Empower色譜工作站,美國);Hypersil C18色譜柱(英國);BP-211D型十萬分之一電子分析天平(德國Sartarius公司);939型全自動薄層制板器(重慶市南岸貝爾德儀器技術廠);WD-9413A凝膠成像分析儀(北京市六一儀器廠)。止癢洗劑由本院制劑室提供(批號為090406、090519、090622);蛇

5、床子、黃柏、防風對照藥材(批號分別為200405、200602、200907)均購于中國藥品生物制品檢定所;蛇床子素對照品(批號11822-200305)購于中國藥品生物制品檢定所(供含量測定用)。薄層層析硅膠G(60型)、薄層層析硅膠H、薄層層析硅膠GF254均為青島海洋化工有限公司產品。含量測定用甲醇為色譜純(德國Merk公司);其他化學試劑均為分析純。2 薄層色譜鑒別2.1 蛇床子的薄層色譜鑒別取止癢洗劑20 mL,置分液漏斗中,用乙醚萃取3次,每次10 mL,合并乙醚液,水浴蒸干,殘渣加丙酮1 mL使溶解,作為供試品溶液。同法制備蛇床子缺味陰性對照溶液。另取蛇床子對照藥材1 g,加水適

6、量提取,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法2005年版中華人民共和國藥典(一部)附錄B1試驗,分別吸取上述3種溶液約5 L,點于同一硅膠G薄層板上,以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(332)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。陰性無干擾。2.2 黃柏的薄層色譜鑒別取止癢洗劑30 mL,加濃氨試液2 mL使成堿性,用氯仿萃取3次,每次20 mL,合并氯仿液,水浴蒸干,殘渣加甲醇1 mL使溶解,作為供試品溶液。同法制備黃柏缺味陰性對照溶液。另取黃柏對照藥材1 g,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法2005年版中華人民

7、共和國藥典(一部)附錄B1試驗,分別吸取上述3種溶液各約5 L,點于同一硅膠G薄層板上,以苯-醋酸乙酯-異丙醇-甲醇-濃氨試液(631.51.50.5)為展開劑,置氨蒸氣飽和的展開缸內,展開,取出,晾干,置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。陰性無干擾。2.3 防風的薄層色譜鑒別取止癢洗劑20 mL,加乙酸乙酯萃取3次,合并萃取液,水浴蒸干,殘渣加乙酸乙酯1 mL使溶解,作為供試品溶液。同法制備防風缺味陰性對照溶液。另取防風對照藥材1 g,同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法2005年版中華人民共和國藥典(一部)附錄B1試驗,分別吸取上

8、述3種溶液各約5 L,點于同一硅膠GF254薄層板上,以三氯甲烷-甲醇(41)為展開劑,展開,取出,晾干,置紫外光燈(254 nm)下檢視。供試品色譜中,在與對照品色譜相應的位置上,顯相同顏色的熒光斑點。陰性無干擾。3 含量測定3.1 色譜條件Hypersil C18色譜柱(4.6 mm×250 mm,5 m),甲醇-水(7030)為流動相,流速為1.0 mL/min,檢測波長為322 nm,理論塔板數(shù)按蛇床子素計算不得低于3 000。3.2 線性關系的考察精密稱取經五氧化二磷減壓干燥12 h以上的蛇床子素對照品10.40 mg,置于10 mL容量瓶中,加入甲醇超聲溶解并定容至刻度(

9、每1 mL含蛇床子素1.04 mg)。取上述對照品溶液,加甲醇稀釋,定容至刻度,依次制成130.00、65.00、32.50、16.25、8.13、4.06、2.03、1.02 g/mL的溶液。分別精密吸取上述各對照品溶液20 L,注入液相色譜儀,測定峰面積,并以進樣濃度為橫坐標,吸收峰峰面積為縱坐標,進行線性回歸,回歸方程為：Y=92 851X+27 076,r=0.999 9,蛇床子素在0.022.60 g范圍內呈良好的線性關系。3.3 供試品溶液的制備止癢洗劑10 mL置于25 mL容量瓶中,加甲醇定容至刻度,密塞,稱定重量,超聲處理(功率300 W,頻率50 kHz)10 min,放冷

10、,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量。精密吸取上清液,用0.45 m的微孔濾膜濾過,濾液作為供試品溶液。3.4 可行性試驗按處方量制備蛇床子缺味陰性對照溶液。精密吸取對照品、供試品及陰性對照溶液各20 L,分別注入液相色譜儀,測定。結果顯示,在與對照品色譜峰相應的位置上,供試品溶液出現(xiàn)相同保留時間的色譜峰,蛇床子素和樣品中其他組分色譜峰可達到基線分離,蛇床子素與其相鄰色譜峰的分離度均大于1.5。陰性對照溶液在此保留時間和位置上無色譜峰,表明陰性對照無干擾。見圖1。3.5 精密度試驗精密吸取同一批號止癢洗劑10 mL,依法制備供試品溶液,精密吸取20 L注入色譜儀,重復測定6次,RSD=0.72%

11、(n=6)。3.6 穩(wěn)定性試驗取配制好的供試品溶液,按含量測定方法,分別在0、2、4、6、8、10、12 h進樣測定,記錄峰面積,結果顯示在12 h內穩(wěn)定,RSD=0.25%(n=7)。3.7 重復性試驗精密吸取同一批號的止癢洗劑10 mL,共6份,依法制備供試品溶液,測定,計算,RSD=0.76%(n=6)。3.8 加樣回收率試驗精密吸取已知含量的止癢洗劑5 mL,共6份,稀釋至10 mL,再精密吸取5 mL,分別加入蛇床子素對照品,按樣品測定方法制備溶液,測定,計算回收率,結果蛇床子素平均回收率為98.81%。見表1。表1 加樣回收率試驗結果(n=6)3.9 樣品測定精密吸取止癢洗劑,按“3.3”項下方法制備供試品溶液,進樣,測定,計算。結果見表2。表2 蛇床子素含量測定結果(n=3)4 討論本試驗采用薄層色譜法對止癢洗劑中的蛇床子、黃柏、防風進行了定性鑒別,方法簡便易行,重復性好。在進行色譜條件摸索時,本試驗對2種流動相系統(tǒng)即甲醇-水(7030)和乙腈-水(6535)1進行了比較,結果以甲醇-水(7030)為流動相,被測組分與其他組分有較好分離,且重復性好,精密度高,經濟實用。在供試品溶液(供含量測定用)的制備時,我們對兩種提取方法即甲醇超聲提取和乙酸乙酯萃取2-3進行了比較,測定結果比較接近,考慮到方法的簡便易行,故選擇甲醇超聲提取?！?/p>