枳實(shí)藥材中總黃酮提取工藝的研究(一)

1、枳實(shí)藥材中總黃酮提取工藝的研究(一)    作者：劉文娟， 耿秋菊， 蔡蓉， 姚道魯 【關(guān)鍵詞】 枳實(shí)；,總黃酮；,提取工藝；,正交實(shí)驗(yàn)摘要：目的優(yōu)化枳實(shí)總黃酮最佳提取工藝。方法以柚皮苷為對(duì)照，用紫外分光光度法在283 nm處測定總黃酮含量，以總黃酮含量為指標(biāo)，應(yīng)用正交實(shí)驗(yàn)，優(yōu)選枳實(shí)總黃酮最佳提取工藝，并對(duì)總黃酮水洗除雜的工藝進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果優(yōu)選出的最佳提取工藝是：60%乙醇，8倍量，回流提取2次，每次1.5 h。水洗除雜工藝為：9倍量水靜置24 h，共2次。結(jié)論 提取的總黃酮含量達(dá)到了70%，工藝簡便、可行，生產(chǎn)成本低，可供工業(yè)化生產(chǎn)參考。關(guān)鍵詞：枳實(shí)

2、； 總黃酮； 提取工藝； 正交實(shí)驗(yàn)Optimization of the Extracting Method of Total Flavonoids from Frutus aurantii immaturusAbstract：ObjectiveTo optimize the extraction procedure of the total flavonoids from Frutus aurantii immaturus. MethodsExtraction procedure was screened by orthogonal test according to the content

3、 of the total flavonoids which was measured through UV spectrophotometry at 283 nm using naringin as control, and the procedure of removing impurity was screened by water.ResultsThe optimized extraction procedure was as follows: 60% alcohol, 8 times volume of the weight of the dried material, reflux

4、ing 1.5 h for 2 times. The procedure of removing impurity in water was as follows: 9 times volume of the weight of the dried material, placed 24 h for 2 times.ConclusionThe content of the total flavonoids is above 70%. The procedure is simple and feasible. The production cost is low. The procedure c

5、an provide a reference to the production.Key words：Frutus aurantii immaturus； Total flavonoids； Extraction procedure； Orthogonal test 枳實(shí)為常用中藥，具有破氣消積，化痰散痞的功效。藥理毒理研究表明枳實(shí)總黃酮提取物對(duì)腸平滑肌具有雙向調(diào)節(jié)作用，而且其毒性小，安全范圍大，藥用價(jià)值非常明顯，因此，本文對(duì)枳實(shí)總黃酮的提取、精制工藝進(jìn)行了研究。1 儀器與試藥1.1 儀器電熱套981B型（天津市泰斯特儀器有限公司）；紫外分光光度計(jì)UV2550。1.2 試藥柚皮苷對(duì)照品(中國藥

6、品生物制品檢定所，批號(hào)110722200309)；枳實(shí)藥材購自河北以嶺飲片有限公司，經(jīng)鑒定為蕓香科植物酸橙的干燥幼果；化學(xué)試劑除提取用醫(yī)用酒精外，均為分析純試劑。2 方法根據(jù)文獻(xiàn)1，采用紫外分光光度法測定枳實(shí)總黃酮含量。而柚皮苷紫外最大吸收峰與總黃酮相同，分別在283 nm處產(chǎn)生最大吸收，且柚皮苷可自中國藥品生物制品檢定所購買，因此，使用柚皮苷作為總黃酮測定的對(duì)照品。2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的測定精密稱取柚皮苷對(duì)照品5.28 mg ,置50 ml量瓶中,甲醇定容至刻度,作為對(duì)照品溶液。精密吸取對(duì)照品溶液0.5 ，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0 ml于10 ml量瓶中,甲醇定容至刻度,以甲醇為空

7、白, 在283 nm 處測吸收度。得回歸方程為: A =0. 027C - 0.001 , r = 0.999 9。線性范圍為5.2831.68 g?ml1。2.2 供試品溶液制備供試品溶液制備2.2.1 枳實(shí)藥材將枳實(shí)藥材粉碎成中粉，精密稱取200 mg，用甲醇定容于50 ml容量瓶中，超聲提取30 min，冷卻到室溫，加甲醇至刻度，搖勻，過濾，精密吸取續(xù)濾液3 ml置100 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。2.2.2 正交供試品溶液 將正交工藝所得的干浸膏，分別精密稱取約50 mg置25 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超聲15 min后冷卻至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，過

8、濾，精密吸取續(xù)濾液5 ml置100 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，得供試品溶液。3 枳實(shí)總黃酮提取工藝的研究3.1 提取工藝的優(yōu)化研究柚皮苷是枳實(shí)總黃酮的主要組成成分，根據(jù)其理化性質(zhì)，我們使用高濃度乙醇對(duì)枳實(shí)進(jìn)行提取。為了控制提取質(zhì)量，我們用紫外分光光度法在283 nm以柚皮苷為對(duì)照測定枳實(shí)總黃酮的含量，采用正交試驗(yàn)法對(duì)其醇提工藝進(jìn)行優(yōu)選，獲得了最佳條件。3.1.1 干浸膏的制備方法 稱取枳實(shí)藥材粗粉100 g，按要求加入乙醇熱回流提取。提取液過濾，轉(zhuǎn)入蒸發(fā)皿在水浴鍋上蒸發(fā)濃縮至稠膏，稠膏經(jīng)70真空干燥，粉碎成末，得干浸膏。3.1.2 提取溶媒的考察實(shí)驗(yàn) 分別用50%， 60%，70%，8

9、0%的乙醇8倍量對(duì)枳實(shí)進(jìn)行提取，熱回流2次，2 h/次。以出膏率和干浸膏中枳實(shí)總黃酮含量為綜合考察指標(biāo)，從而確定正交實(shí)驗(yàn)乙醇濃度的水平，其中“出膏率=干膏重/生藥量×100%” 。結(jié)果見表1。表1 提取溶媒考察的實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）從表1可知，選用較高濃度的乙醇提取時(shí)，黃酮苷含量較高，出膏率低，易于純化處理。因此，正交實(shí)驗(yàn)選擇乙醇濃度60%，70%，80%作為考察的三個(gè)水平。3.1.3 正交實(shí)驗(yàn)根據(jù)工藝要求，選定乙醇濃度、乙醇量、提取時(shí)間、提取次數(shù)作為考察的4個(gè)因素，各取3個(gè)水平，以出膏率和干浸膏中枳實(shí)總黃酮量為綜合考察指標(biāo)，選用L9 (34)正交實(shí)驗(yàn)表進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。因素水平表見表2，實(shí)驗(yàn)結(jié)果

10、見表3。表2 因素水平（略）根據(jù)上述正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，乙醇濃度、提取次數(shù)為影響枳實(shí)提取出膏率的主要因素，最佳工藝為A1B3C3D3；提取次數(shù)為影響枳實(shí)總黃酮含量的主要因素，最佳工藝為A1B3C2D2。綜合考慮二者結(jié)果，確立枳實(shí)總黃酮提取的最佳工藝為A1B3C2D2，即藥材加8倍量60%乙醇回流提取2次，1.5 h/次。3.1.4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 根據(jù)正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果，優(yōu)選工藝與總黃酮的最佳提取工藝相同，因此運(yùn)用優(yōu)選工藝進(jìn)行3批放大的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。結(jié)果見表4。根據(jù)結(jié)果可知，優(yōu)選工藝可行，與正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。3.2 水洗除雜工藝的研究2上述醇提工藝確定后，總黃酮的含量仍然比較低。因此，我們根據(jù)柚皮苷不易溶于冷水

11、的性質(zhì)，選用水洗法除去醇提物中的水溶性雜質(zhì)，提高總黃酮含量。3.2.1 方法將枳實(shí)醇提取物60 g,按要求加水，充分?jǐn)嚢韬箪o置。再把水傾出，將沉淀中殘余的水分蒸干后，按供試品方法制備，紫外分光光度法檢測總黃酮含量。3.2.2 結(jié)果考察加水量、放置時(shí)間、水洗次數(shù)對(duì)總黃酮含量的影響。結(jié)果見表57。表3 正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)選工藝結(jié)果（略）K，k以出膏率計(jì)算，K'、k'以總黃酮量計(jì)算表4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）表5 加水量的考察（略）由表5可知，9倍量水洗后的枳實(shí)提取物總黃酮含量最高，因此選擇9倍的水進(jìn)行水洗。表6 放置時(shí)間的考察（略）由表6可知，放置24 h，總黃酮含量已穩(wěn)定，因此選擇放置時(shí)間為24 h。表7 水洗次數(shù)的考察（略）由表7可知，水洗2次時(shí)已達(dá)到70%，因此選擇水洗2次。4 討論本研究通過正交試驗(yàn)確定了枳實(shí)總黃酮最佳提取工藝，即藥材加8倍量60%乙醇，回流提取2次，1.5 h/次。水洗除雜工藝為9倍量水洗滌2次，24 h/次