山綠茶不同炮制品中總黃酮的含量測定

1、    山綠茶不同炮制品中總黃酮的含量測定【關(guān)鍵詞】 山綠茶；,總黃酮；,蘆??；,紫外分光光度法,摘要：目的建立山綠茶不同炮制品的質(zhì)量 研究  方法 。方法以蘆丁為對照品，采用紫外分光光度法測定山綠茶不同炮制品中總黃酮的含量。結(jié)果蘆丁濃度在8.11248.672（g/ml）之間與吸光度值呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為C=85.224 5A+0.642 7，r=0.999 0。平均回收率為101.24%，RSD=2.73%。結(jié)論 該測定方法靈敏，簡便，重現(xiàn)性好，可用于山綠茶不同炮制品的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞：山綠茶； 總黃酮； 蘆??； 紫外分光

2、光度法 Determination of Total Flavonoids in Different Processed Products of Ilex hainanensis MerrAbstract：ObjectiveTo establish the evidence for quality of different processed products of Ilex hainanensis Merr.MethodsRutin as the standard and using ultraviolet spectrophotometer to determine the content

3、 of total flavonoids in Ilex hainanensis Merr. Results The  linear relateionship of rutin was good from 8.112 (g/ml) to 48.672 (g/ml), C=85.2245A+0.6427, r=0.999 0. The average recovery was 101.24%(RSD2.73%).ConclusionThis method is accurate, simple and reproducible, and can be applied to

4、the quality control of the different processed products of Ilex hainanensis Merr.Key words：Ilex hainanensis Merr.; Total flavonoids; Rutin; UV 山綠茶為冬青科冬青屬植物海南冬青Ilex hainanensis Merr的干燥葉,含黃酮類、三萜酸類、綠原酸、鞣酸及山綠茶苷等成分1，2，具有清熱解毒、平肝潛陽、活血化瘀的功效，臨床上用于 治療 高血壓病1，2， 文獻 報道，山綠茶降壓片治療原發(fā)性高血壓病的總有效率明顯高于復方羅布麻片3。山綠茶在廣西中藥材標準

5、（1990年版）中收載的炮制方法有兩種，一種為按綠茶加工方式進行，即將鮮葉盡快地用260280翻炒殺青，接著在揉搓臺上用手揉搓，然后復炒復揉23次，至葉色呈暗綠色，帶有銀灰綠色，略有光澤為度，取出，放涼；另一種方法為原藥材鮮葉直接曬干。黃酮類成分能保持毛細血管正常的抵抗力，減少血管的通透性，可使毛細血管恢復正常彈性，故有軟化血管、增加血管彈性，對動脈硬化有軟化作用，對高血壓病、糖尿病、視網(wǎng)膜炎有防治作用。為了控制山綠茶不同炮制品的質(zhì)量，對山綠茶不同炮制品中的總黃酮進行了含量測定，現(xiàn)報道如下。1 儀器與試藥Agilent8453紫外分光光度計（美國安捷倫 科技 有限公司）；BP211D 電子&#

6、160; 分析 天平（德國賽多利斯）；AE100S電子分析天平(梅特勒托利多儀器上海有限公司)；SB3200T超聲波清洗器（上海必能信公司）；101A2型電熱鼓風干燥箱（上海實驗儀器廠有限公司）。蘆丁對照品（ 中國 藥品生物制品檢定所提供，批號0080-9705，供含量測定用）；山綠茶不同炮制品為：上林藥材（傳統(tǒng)工藝炮制）、80干燥2 h藥材、80干燥1.5 h藥材、80干燥1 h藥材、70干燥2 h藥材、70干燥1.5h藥材、70干燥1 h藥材、60干燥2 h藥材、60干燥1.5 h藥材、60干燥1 h藥材、晾干藥材、自炒藥材，以上原藥材均購于上林縣，并經(jīng)廣西中醫(yī)學院陳勇教授鑒定符

7、合廣西中藥材標準（1990年版）山綠茶項下藥材品種，確定為冬青科冬青屬植物海南冬青Ilex hainanensis Merr.的干燥葉，所用試劑均為分析純。2 方法與結(jié)果2.1 對照品溶液的制備 精密稱取120干燥至恒重的蘆丁對照品約25 mg，置25 ml量瓶中，加70%乙醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加70%乙醇至刻度，搖勻。精密量取10 ml，置50 ml量瓶中，加70%乙醇至刻度，搖勻，即得（每毫升含無水蘆丁0.2028 mg）。2.2 檢測波長的測定精密量取上述對照品溶液2 ml于25 ml量瓶中, 加水至6 ml，分別加5%亞硝酸鈉溶液1 ml，搖勻，靜置6 min，加10%硝

8、酸鋁溶液1 ml，搖勻，靜置6 min，加氫氧化鈉試液10 ml，再加水至刻度，搖勻，放置15 min。以相應試劑作空白，照分光光度法3，在400800 nm測定吸收光譜圖，其最大吸收波長為502 nm3。光譜圖見圖1。圖1 蘆丁對照品吸收光譜圖（略）2.3 標準曲線的制備 精密吸取對照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0 ml，分別置于25 ml量瓶中，各加水至6 ml，分別加5%亞硝酸鈉溶液1 ml，搖勻，靜置6 min，加10%硝酸鋁溶液1 ml，搖勻，靜置6 min，加氫氧化鈉試液10 ml，再加水至刻度，搖勻，放置15 min，照分光光度法3，在502 nm波長處測定

9、吸收度。以濃度（C，g/ml）為縱坐標，吸收度（A）為橫坐標繪制標準曲線，得回歸方程為C=85.224 5A+0.642 7，r=0.999 0。結(jié)果表明蘆丁濃度8.11248.672 g/ml之間與吸光度值呈良好的線性關(guān)系。標準曲線見圖2。圖2 蘆丁對照品標準曲線（略）2.4 供試品溶液的制備取本品粗粉約0.1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%乙醇25 ml，稱定重量，超聲處理1 h，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液2 ml，置25 ml量瓶中，照標準曲線制備項下 方法 ，自“加水至6 ml”起依法測定吸收度，用回歸方程求出供試品溶液中總黃

10、酮的含量(mg)， 計算 ，即得。2.5 精密度實驗 取同一供試品溶液重復測定6次，平均吸收度為0.344，RSD為0.27%（n=6），表明精密度良好。2.6 穩(wěn)定性實驗 對同一份供試品每間隔6 min測定吸光度，在30 min內(nèi)平均吸收度為0.302,RSD=1.63%（n=6），說明在30 min內(nèi)顯色基本穩(wěn)定。2.7 重復性實驗取同一批藥材，平行測定6次，平均含量為77.35 mg/g，RSD為1.87%，表明重復性良好。結(jié)果見表1。表1 重復性實驗結(jié)果（略）2.8 加樣回收率實驗取已測知含量的樣品約0.05 g，精密稱定，分別加入一定量的蘆丁對照品，照供試品溶液制備方法處理并測定含量

11、。結(jié)果見表2。表2 總黃酮回收率測定結(jié)果（略）2.9 樣品測定取藥材粉末0.1 g，精密稱定，照供試品溶液的制備方法處理并測定。結(jié)果見表3。3 討論3.1 在提取過程中，曾用醋酸乙酯-石油醚3060（31）混合溶液進行超聲脫脂處理，發(fā)現(xiàn)總黃酮的含量較低，可能在脫脂過程中會提取去部分黃酮類成分，后改用直接進行超聲處理總黃酮的提取較完全。表3 樣品中總黃酮測定結(jié)果（略）3.2 通過對山綠茶總黃酮的提取溶劑、提取時間等因素考察，確定合適的提取條件為用70%乙醇超聲提取1 h。3.3 初步實驗表明：不同炮制方法，常導致總黃酮含量有較大變化。山綠茶不同炮制品中總黃酮含量結(jié)果有不同變化，以自炒藥材含量最高

12、；其次是晾干藥材、上林藥材（傳統(tǒng)工藝炮制）、80干燥2 h藥材、80干燥1.5 h藥材、80干燥1 h藥材、70干燥2 h藥材、70干燥1.5 h藥材、70干燥1 h藥材、60干燥2 h藥材、60干燥1.5 h藥材、60干燥1 h藥材。自炒藥材可能因為炒制時間比較短，另外較高的溫度還可以破壞藥材中大部分酶，故藥材中黃酮類成分含量最高。而晾干藥材因未受熱黃酮類成分基本不受破壞，但藥材中酶未被破壞，仍有部分黃酮類成分被分解，故含量次高，而采用6080干燥，因受熱溫度不高但時間較長，使酶活性增強加速黃酮類成分的分解破壞，因此認為山綠茶的炮制方法以自炒（清炒）為佳。山綠茶不同炮制方法與總黃酮含量的變化關(guān)系還有待進一步考察 研究 。3.4 根據(jù)含量較多的3，5位羥基黃酮類化合物可與硝酸鋁試液顯色后，在一定波長下有最大吸收峰的特點4，在供試品溶液中加入亞硝酸鈉試液顯色后，采用紫外分光光度法對其進行含量測定，對照品選用蘆丁，但該方法必須在顯色后30 min內(nèi)測定，因在30 min后，其吸光度會隨時間急劇下降， 影響 樣品測定的準確。3.5 山綠茶不同炮制品中的黃酮類成分含量都比較高，將其作為降壓、降血脂、減肥類藥品或保健品值得進一步研究開發(fā)。 參考  文獻 ：1 全國中草藥匯編編寫組.全國