蕨菜總黃酮抗宮頸癌作用及機(jī)理研究

1、蕨菜總黃酮抗宮頸癌作用及機(jī)理研究    英文題名 Study of Effect of Flavonoids from Pteridium Aquilinum on Cervical Cancer and Its Mechanism  關(guān)鍵詞 蕨菜總黃酮; 宮頸癌; 免疫調(diào)節(jié); 抗氧化; 細(xì)胞凋亡; 英文關(guān)鍵詞 Flavonoids from pteridium aquilinum; Cervicalcancer; Immunomodulating; Antioxidant; Cell apoptosis; 中文摘要 宮頸癌是一種嚴(yán)重危害婦女健

2、康和生命的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤,病因目前尚未完全明了,可能是多種因素綜合作用的作用。由于宮頸癌的發(fā)病原因和發(fā)病機(jī)理多種多樣,防治很難一蹴而就,在治療(如化療)過程中容易產(chǎn)生毒副作用和多藥耐藥性,因而抗宮頸癌藥物尤其是植物性抗宮頸癌藥物的篩選成為腫瘤藥理學(xué)和毒理學(xué)研究者的重要任務(wù)。從多角度系統(tǒng)地研究蕨菜黃酮抗宮頸癌效果,目前尚未見報(bào)道。本研究利用小鼠U14宮頸癌細(xì)胞和人宮頸癌Hela細(xì)胞建立體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?對蕨菜黃酮抗宮頸癌效果進(jìn)行了深入研究。 蕨菜是藥食兩用植物,經(jīng)常食用蕨菜具有保健作用。作為藥用,蕨菜具有清熱滑腸、降氣化痰、利水安神、降壓等功效。但有關(guān)蕨菜黃酮類物質(zhì)是否具有抗腫瘤作用并未見相

3、關(guān)報(bào)道,因此本文主要通過實(shí)驗(yàn)來研究蕨菜總黃酮對小鼠體內(nèi)U14腫瘤細(xì)胞和體外人Hela細(xì)胞的抑制率及對機(jī)體免疫功能的影響。 本實(shí)驗(yàn)通過醇提法提取蕨菜總黃酮,后經(jīng)過溶劑萃取獲得蕨菜精黃酮,研究其對小鼠移植性宮頸癌的影響。結(jié)果表明,蕨菜黃酮能明顯抑制實(shí)體瘤小鼠腫瘤生長,低、中、高抑制率可達(dá)38.79%、44.54%、54.02%,延長腹水瘤小鼠的存活時間,生命延長率可達(dá)49.39%、6. 英文摘要 Cervical cancer is a malignant tumor in genital system that threatened the health and the life of wome

4、n. The etiological factor of cervical cancer is not clear yet, and it might be related with many influencing factors. Because of the multiformity of the reason and the mechanism behind the cervical cancer, it is very difficult to prevention and to treatment. Furthermore, because of the side-effects

5、and the multi-drug resistance in treatment (e.g. chemotherapy), screening of anti-cervical cancer drug  摘要 5-7 ABSTRACT 7-8 第1章 緒論 14-24     1.1 宮頸癌的發(fā)病原因 14-15         1.1.1 病毒感染與宮頸癌 14-15         1.1.2 不良生活習(xí)慣與

6、宮頸癌 15         1.1.3 經(jīng)濟(jì)條件與宮頸癌 15     1.2 宮頸癌的表現(xiàn) 15-16     1.3 宮頸癌的治療 16-22         1.3.1 手術(shù)治療 16         1.3.2 放射治療 16-17        

7、1.3.3 化學(xué)治療 17         1.3.4 生物技術(shù)與腫瘤治療 17-19         1.3.5 天然植物治療 19-22     1.4 問題與展望 22-23     1.5 本文的主要研究內(nèi)容和意義 23-24         1.5.1 研究內(nèi)容 23     &

8、#160;   1.5.2 研究意義 23-24 第2章 藥物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展 24-34     2.1 細(xì)胞調(diào)亡 24-28         2.1.1 細(xì)胞凋亡的概念、形態(tài)學(xué)和生化特征 24-25         2.1.2 細(xì)胞凋亡的機(jī)制 25-28     2.2 腫瘤與細(xì)胞凋亡 28-31      

9、0;  2.2.1 細(xì)胞凋亡在腫瘤治療方面應(yīng)用 29         2.2.2 天然植物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 29-31     2.3 檢測細(xì)胞凋亡的方法 31-33     2.4 本章小結(jié) 33-34 第3章 蕨菜與黃酮類化合物的研究進(jìn)展 34-46     3.1 蕨菜植物介紹 34-38         3.1.1 蕨菜的食用價值 35-36  

10、;       3.1.2 蕨菜的藥用價值 36-38         3.1.3 蕨菜的化學(xué)成分研究 38     3.2 黃酮類化合物抗腫瘤研究進(jìn)展 38-43         3.2.1 黃酮類化合物介紹 38-39         3.2.2 黃酮抗腫瘤作用機(jī)制的研究進(jìn)展 39-43

11、60;   3.3 本章小結(jié) 43-46 第4章 蕨菜總黃酮的提取及其含量測定 46-52     4.1 材料 46     4.2 方法 46-48         4.2.1 蕨菜黃酮的提取 46-47         4.2.2 蕨菜總黃酮含量測定 47         4.2.3 蕨菜總黃酮顯色定性

12、實(shí)驗(yàn) 47-48     4.3 結(jié)果與分析 48-50         4.3.1 蕨菜中總粗黃酮和精黃酮提取率 48         4.3.2 蕨菜中總黃酮含量測定 48-50         4.3.3 蕨菜總黃酮顯色結(jié)果 50     4.4 本章小結(jié) 50-52 第5章 蕨菜總黃酮體內(nèi)抗宮頸癌活性的研究 52-74

13、    5.1 材料 52     5.2 方法 52-56         5.2.1 小鼠宮頸癌模型的建立 52-53         5.2.2 確定小鼠治療劑量 53         5.2.3 實(shí)驗(yàn)分組和治療方案 53-54         5.2.

14、4 實(shí)體瘤小鼠抑瘤率的計(jì)算 54         5.2.5 腹水瘤生命延長率的計(jì)算 54         5.2.6 對荷瘤小鼠免疫器官的影響 54         5.2.7 肝腎腫瘤組織病理切片觀察 54-55         5.2.8 免疫指標(biāo)測定 55     

15、60;   5.2.9 對U14 腫瘤組織的免疫組化試驗(yàn) 55-56     5.3 數(shù)據(jù)處理 56     5.4 結(jié)果與分析 56-67         5.4.1 蕨菜總黃酮對實(shí)體瘤抑制率 56-57         5.4.2 蕨菜總黃酮對小鼠腹水瘤的生命延長率 57-58         5.4.3

16、 免疫指標(biāo)測定結(jié)果 58-59         5.4.4 肝腎和腫瘤組織病理切片觀察結(jié)果 59-61         5.4.5 蕨菜總黃酮對小鼠血清抗氧化能力的影響 61-62         5.4.6 蕨菜總黃酮對小鼠胸腺、脾臟抗氧化能力的影響 62-64         5.4.7 免疫組化結(jié)果 64-67

17、    5.5 討論 67-71         5.5.1 蕨菜黃酮用藥安全討論 67-68         5.5.2 小鼠腫瘤模型建立 68-69         5.5.3 蕨菜總黃酮對免疫器官作用的影響 69         5.5.4 肝腎病理切片結(jié)果討論 69  &

18、#160;      5.5.5 蕨菜黃酮對小鼠血清中胸腺脾臟抗氧化防御體系的影響 69-70         5.5.6 蕨菜黃酮對小鼠腫瘤中Bcl-2、Bax、突變型p53 基因表達(dá)的影響 70-71     5.6 本章小結(jié) 71-74 第6章 蕨菜總黃酮體外抗人宮頸癌 Hela 細(xì)胞活 性的研究 74-86     6.1 材料 74-75      

19、0;  6.1.1 細(xì)胞株 74         6.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 74         6.1.3 試劑藥品 74-75         6.1.4 主要儀器 75     6.2 方法 75-78         6.2.1 Hela 細(xì)胞復(fù)蘇 75  

20、0;      6.2.3 Hela 細(xì)胞的傳代 75         6.2.3 Hela 細(xì)胞的傳代 75-76         6.2.4 Hela 細(xì)胞的凍存 76         6.2.5 MTT 方法檢測細(xì)胞增殖作用 76         6.2.6 細(xì)胞

21、形態(tài)學(xué)觀察 76-78     6.3 結(jié)果與分析 78-83         6.3.1 MTT 法檢測蕨菜黃酮對Hela 細(xì)胞增殖作用結(jié)果 78-79         6.3.2 光學(xué)顯微鏡觀察HeLa 細(xì)胞形態(tài)變化 79-80         6.3.3 Hoechst 熒光單染細(xì)胞核形態(tài)變化 80     &#

22、160;   6.3.4 蕨菜黃酮誘導(dǎo)HeLa 細(xì)胞DNA 片段化的觀察 80-81         6.3.5 蕨菜總黃酮對Hela 細(xì)胞周期分布的影響 81-83     6.4 討論 83-85         6.4.1 蕨菜總黃酮對Hela 細(xì)胞生長的抑制作用 83         6.4.2 蕨菜總黃酮誘導(dǎo)Hela 細(xì)胞凋亡的

23、形態(tài)學(xué)變化 83-84         6.4.3 蕨菜總黃酮誘導(dǎo)Hela 細(xì)胞DNA 片段化的作用 84         6.4.4 蕨菜對細(xì)胞周期的影響 84-85     6.5 本章小結(jié) 85-86 結(jié)論 86-88 參考文獻(xiàn) 88-100         5.5.5 蕨菜黃酮對小鼠血清中胸腺脾臟抗氧化防御體系的影響 69-70  

24、0;      5.5.6 蕨菜黃酮對小鼠腫瘤中Bcl-2、Bax、突變型p53 基因表達(dá)的影響 70-71     5.6 本章小結(jié) 71-74 第6章 蕨菜總黃酮體外抗人宮頸癌 Hela 細(xì)胞活 性的研究 74-86     6.1 材料 74-75         6.1.1 細(xì)胞株 74         6.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 74 

25、0;       6.1.3 試劑藥品 74-75         6.1.4 主要儀器 75     6.2 方法 75-78         6.2.1 Hela 細(xì)胞復(fù)蘇 75         6.2.3 Hela 細(xì)胞的傳代 75      

26、   6.2.3 Hela 細(xì)胞的傳代 75-76         6.2.4 Hela 細(xì)胞的凍存 76         6.2.5 MTT 方法檢測細(xì)胞增殖作用 76         6.2.6 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 76-78     6.3 結(jié)果與分析 78-83       

27、  6.3.1 MTT 法檢測蕨菜黃酮對Hela 細(xì)胞增殖作用結(jié)果 78-79         6.3.2 光學(xué)顯微鏡觀察HeLa 細(xì)胞形態(tài)變化 79-80         6.3.3 Hoechst 熒光單染細(xì)胞核形態(tài)變化 80         6.3.4 蕨菜黃酮誘導(dǎo)HeLa 細(xì)胞DNA 片段化的觀察 80-81      

28、   6.3.5 蕨菜總黃酮對Hela 細(xì)胞周期分布的影響 81-83     6.4 討論 83-85         6.4.1 蕨菜總黃酮對Hela 細(xì)胞生長的抑制作用 83         6.4.2 蕨菜總黃酮誘導(dǎo)Hela 細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化 83-84         6.4.3 蕨菜總黃酮誘導(dǎo)Hela 細(xì)胞DNA 片段化的

29、作用 84         6.4.4 蕨菜對細(xì)胞周期的影響 84-85     6.5 本章小結(jié) 85-86 結(jié)論 86-88 參考文獻(xiàn) 88-100         5.5.5 蕨菜黃酮對小鼠血清中胸腺脾臟抗氧化防御體系的影響 69-70         5.5.6 蕨菜黃酮對小鼠腫瘤中Bcl-2、Bax、突變型p53 基因表達(dá)的影響 70-71

30、60;   5.6 本章小結(jié) 71-74 第6章 蕨菜總黃酮體外抗人宮頸癌 Hela 細(xì)胞活 性的研究 74-86     6.1 材料 74-75         6.1.1 細(xì)胞株 74         6.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 74         6.1.3 試劑藥品 74-75     

31、60;   6.1.4 主要儀器 75     6.2 方法 75-78         6.2.1 Hela 細(xì)胞復(fù)蘇 75         6.2.3 Hela 細(xì)胞的傳代 75         6.2.3 Hela 細(xì)胞的傳代 75-76         6.2.

32、4 Hela 細(xì)胞的凍存 76         6.2.5 MTT 方法檢測細(xì)胞增殖作用 76         6.2.6 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 76-78     6.3 結(jié)果與分析 78-83         6.3.1 MTT 法檢測蕨菜黃酮對Hela 細(xì)胞增殖作用結(jié)果 78-79       &#

33、160; 6.3.2 光學(xué)顯微鏡觀察HeLa 細(xì)胞形態(tài)變化 79-80         6.3.3 Hoechst 熒光單染細(xì)胞核形態(tài)變化 80         6.3.4 蕨菜黃酮誘導(dǎo)HeLa 細(xì)胞DNA 片段化的觀察 80-81         6.3.5 蕨菜總黃酮對Hela 細(xì)胞周期分布的影響 81-83     6.4 討論 83-85  

34、;       6.4.1 蕨菜總黃酮對Hela 細(xì)胞生長的抑制作用 83         6.4.2 蕨菜總黃酮誘導(dǎo)Hela 細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化 83-84         6.4.3 蕨菜總黃酮誘導(dǎo)Hela 細(xì)胞DNA 片段化的作用 84         6.4.4 蕨菜對細(xì)胞周期的影響 84-85   

35、;  6.5 本章小結(jié) 85-86 結(jié)論 86-88 參考文獻(xiàn) 88-100         5.5.5 蕨菜黃酮對小鼠血清中胸腺脾臟抗氧化防御體系的影響 69-70         5.5.6 蕨菜黃酮對小鼠腫瘤中Bcl-2、Bax、突變型p53 基因表達(dá)的影響 70-71     5.6 本章小結(jié) 71-74 第6章 蕨菜總黃酮體外抗人宮頸癌 Hela 細(xì)胞活 性的研究 74-86   

36、60; 6.1 材料 74-75         6.1.1 細(xì)胞株 74         6.1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 74         6.1.3 試劑藥品 74-75         6.1.4 主要儀器 75     6.2 方法 75-78    

37、60;    6.2.1 Hela 細(xì)胞復(fù)蘇 75         6.2.3 Hela 細(xì)胞的傳代 75         6.2.3 Hela 細(xì)胞的傳代 75-76         6.2.4 Hela 細(xì)胞的凍存 76         6.2.5 MTT 方法檢測細(xì)胞增殖作用 76

38、        6.2.6 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察 76-78     6.3 結(jié)果與分析 78-83         6.3.1 MTT 法檢測蕨菜黃酮對Hela 細(xì)胞增殖作用結(jié)果 78-79         6.3.2 光學(xué)顯微鏡觀察HeLa 細(xì)胞形態(tài)變化 79-80         6.3.

39、3 Hoechst 熒光單染細(xì)胞核形態(tài)變化 80         6.3.4 蕨菜黃酮誘導(dǎo)HeLa 細(xì)胞DNA 片段化的觀察 80-81         6.3.5 蕨菜總黃酮對Hela 細(xì)胞周期分布的影響 81-83     6.4 討論 83-85         6.4.1 蕨菜總黃酮對Hela 細(xì)胞生長的抑制作用 83   

40、60;     6.4.2 蕨菜總黃酮誘導(dǎo)Hela 細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化 83-84         6.4.3 蕨菜總黃酮誘導(dǎo)Hela 細(xì)胞DNA 片段化的作用 84         6.4.4 蕨菜對細(xì)胞周期的影響 84-85     6.5 本章小結(jié) 85-86 結(jié)論 86-88 參考文獻(xiàn) 88-100       

41、60; 5.5.5 蕨菜黃酮對小鼠血清中胸腺脾臟抗氧化防御體系的影響 69-70         5.5.6 蕨菜黃酮對小鼠腫瘤中Bcl-2、Bax、突變型p53 基因表達(dá)的影響 70-71     5.6 本章小結(jié) 71-74 第6章 蕨菜總黃酮體外抗人宮頸癌 Hela 細(xì)胞活 性的研究 74-86     6.1 材料 74-75         6.1.1 細(xì)胞株 74