超聲波提取小葉榕總黃酮及鑒別

1、超聲波提取小葉榕總黃酮及鑒別        【摘要】     目的為充分利用小葉榕植物資源，避免資源的浪費(fèi)，探討小葉榕總黃酮的提取及鑒別方法。方法采用超聲波乙醇浸提法從小葉榕中提取總黃酮類物質(zhì)，對(duì)所提取的黃酮類物質(zhì)進(jìn)行驗(yàn)證，并用分光光度法測(cè)定含量。結(jié)果測(cè)得供試品溶液中總黃酮的含量C=0.391 6 mg/ml，回收率為100.16%，其純度和產(chǎn)率均較高。結(jié)論該方法采用全物理過程，無任何污染，是一條提取小葉榕總黃酮類物質(zhì)的有效途徑。    

2、; 【關(guān)鍵詞】  超聲波提??；小葉榕；總黃酮；鑒別    Extraction and Identification of Total Flavanone of Xiaoyerong by Ultrasonic WaveCHEN Hua， WU Yingchun（Peoples Worker's Hospital of Xingyi in Guizhou，Xingyi，Guizhou 562400，China）Abstract：ObjectiveTo develop a method for the extraction an

3、d identification of total flavanone of Xiaoyerong.MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Xiaoyerong with ultrasonic wave. Spectrophotometry was used to determine the flavanone of Xiaoyerong .ResultsThe content of the total flavanone of Xiaoyerong was C=0.3917mg/ml and th

4、e rate of recovery was 100.16%.Conclusion This method is a purely physical process and has not any pollution .It is an ideal way to extract the flavanone of Xiaoyerong.Key words：Ultrasonic wave treatment；  Xiaoyerong；  Total flavanone；  Identification    小葉榕為?？浦参镩艠銯icus

5、 microcarpa L.f.的干燥葉，又名細(xì)葉椿、細(xì)葉榕、垂葉榕，屬?？拼粚俪＞G大喬木，高2025m，生氣根12。全年可采收，斬取葉和幼枝，除去樹枝，取凈葉片，曬干。小葉榕多生長(zhǎng)于村邊或山林中，分布于廣西、廣東、福建、臺(tái)灣、浙江南部、云南、貴州。印度、緬甸、馬來西亞也有。   小葉榕既可作風(fēng)景樹、行道樹，樹皮纖維可制魚網(wǎng)和人造棉，又具有藥用價(jià)值。小葉榕的莖、皮、果、葉、膠汁等均可入藥，具有祛風(fēng)清熱、活血解毒、散淤理濕等功效。民間多用于治療關(guān)節(jié)風(fēng)濕痛、跌打損傷、小便不通、風(fēng)火牙痛、急性痢疾及腸炎、疥癬、痔瘡等病癥。其葉、皮、果等提取的浸膏是治療咳嗽、感冒類中成藥的主要原料

6、。    近年來，超聲技術(shù)應(yīng)用于提取植物中的生物堿、苷類、生物活性物質(zhì)、動(dòng)物組織漿的毒質(zhì)等研究已有報(bào)道34，表明其具有能耗低、效率高、不破壞有效成分的特點(diǎn)。很多研究表明，利用超聲波產(chǎn)生的強(qiáng)烈振動(dòng)、高的加速度、強(qiáng)烈的空化效應(yīng)、攪拌作用等，可加速植物材料中的有效成分進(jìn)入溶劑，從而增加有效成分的提取率，縮短提取時(shí)間，并且還可避免高溫對(duì)提取成分的影響4，但超聲技術(shù)應(yīng)用于提取小葉榕中黃酮類物質(zhì)的研究尚未見報(bào)道。本文報(bào)道用超聲波提取小葉榕總黃酮及鑒別。1  儀器與試劑1.1 儀器HS10260D型超聲波清洗器(超聲工作頻率40 kHz，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司)；

7、UV-2450型紫外-可見分光光度計(jì)(日本島津)；ZF7C型三用紫外分析儀(上?？等A生化儀器制造有限公司)；2×Z-1旋片式真空泵（浙江黃巖求精真空泵廠）；AUY220型電子天平(日本島津)。  1.2 試劑甲醇AR；乙醇AR；鎂粉AR；鹽酸AR；蘆丁(Rutin)對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所）；新鮮小葉榕采自貴州省興義市滄江鄉(xiāng)。2 方法與結(jié)果2.1  總黃酮成分提取取新鮮小葉榕，烘干(55)，粉碎(過三號(hào)篩)。取55干燥至恒重的小葉榕粉末(過三號(hào)篩)約0.2 g，精密稱定，置100 ml量瓶中，加70%乙醇90 ml，超聲處理(功率250 W，頻率4

8、0 kHz)45 min，放冷，用70%乙醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，得供試品溶液。2.2  測(cè)定方法依據(jù)以蘆丁為對(duì)照品測(cè)定小葉榕中總黃酮的含量，用鹽酸-鎂粉顯色法，在可見光區(qū)能獲得穩(wěn)定的特征吸收峰。2.3  定量實(shí)驗(yàn)總黃酮的含量測(cè)定2.3.1  對(duì)照品溶液的制備 精密稱取蘆丁對(duì)照品適量，加甲醇制成每毫升中含蘆丁0.230 8 mg的溶液，即得。2.3.2  波長(zhǎng)的選擇精密量取蘆丁對(duì)照品溶液（0.230 8 mg/ml）和供試品溶液各1.0 ml，分別置加有鎂粉100 mg的具塞刻度試管中，將試管置冷水浴（15左右）中緩緩滴加濃鹽酸3.0 ml，

9、搖勻，加70乙醇至6 ml，搖勻，置沸水浴中保溫35 min，取出，迅速冷卻至室溫，用70乙醇補(bǔ)充至原體積，以相應(yīng)試劑為空白，在400700 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描測(cè)定吸收光譜。    采用鹽酸-鎂粉顯色法對(duì)總黃酮進(jìn)行顯色并進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描。結(jié)果發(fā)觀，用鹽酸-鎂粉顯色后，蘆丁對(duì)照品、供試品的最大吸收波長(zhǎng)基本一致，均為（510±5）nm，重復(fù)性好，同時(shí)空白溶液顯色前后及蘆丁對(duì)照品、樣品顯色前在該波長(zhǎng)處均無明顯吸收，故選擇鹽酸-鎂粉顯色法，在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定小葉榕總黃酮含量。2.3.3  標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對(duì)照品溶液1.0，1.5，

10、2.0，2.5，3.0 ml，分別置加有鎂粉100 mg的具塞刻度試管中，將試管置冷水?。?5左右）中緩緩滴加濃鹽酸3.0 ml，搖勻，加70乙醇至6 ml，搖勻，置沸水浴中保溫35 min，取出，迅速冷卻至室溫，用70乙醇補(bǔ)充至原體積，以相應(yīng)試劑為空白，在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（見表1）。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程：A=0.048 1+1.169 6C，r=0.999 5（n=3）。表1  紫外-可見分光光度計(jì)測(cè)定吸光度結(jié)果（略）2.3.4  提取物含量的測(cè)定精密量取樣品溶液1.0ml，置加有鎂粉100 mg的具塞刻度試管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線

11、的制備方法測(cè)定其吸光度A=0.506，根據(jù)回歸方程：A=0.048 1+1.169 6C，計(jì)算出供試品溶液中總黃酮的含量C=0.391 6 mg/ml，小葉榕供試品中含總黃酮以蘆?。–27H30O16）計(jì)為19.58%。2.3.5  回收率實(shí)驗(yàn)5精密量取供試品溶液1.0 ml，加入蘆丁對(duì)照品溶液1.0 ml（0.230 8 mg/ml），同前供試品測(cè)定方法操作測(cè)定吸光度，求出回收率為100.16%。2.4  定性實(shí)驗(yàn)總黃酮的鑒別2.4.1  紙層析取供試品溶液、對(duì)照品溶液各2 l分別點(diǎn)在同一濾紙上，以正丁醇-醋酸-水(415)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%三

12、氯化鋁乙醇溶液，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。2.4.2 鹽酸-鎂粉反應(yīng) 取供試品溶液1ml置加有鎂粉適量的試管中，加濃鹽酸數(shù)滴，在泡沫處呈紫紅色。2.4.3  三氯化鋁反應(yīng)取供試品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%三氯化鋁乙醇溶液，吹干。在可見光下呈灰黃色，置紫外光燈(365 nm)下呈黃色熒光斑點(diǎn)。2.4.4  紫外光下呈色反應(yīng)取供試品溶液點(diǎn)在濾紙上，在可見光下呈灰黃色，置紫外光燈(365 nm)下呈灰褐色并有熒光斑點(diǎn)。2.4.5  濃氨水反應(yīng)取供試品溶液點(diǎn)在濾紙上，將濾紙?jiān)诎彼戏睫?0s，立即

13、置紫外光燈(365 nm)下檢視，呈極明顯的黃褐色熒光斑點(diǎn)。2.4.6 乙酸鎂反應(yīng)取供試品溶液點(diǎn)在濾紙上，滴加1%乙酸鎂甲醇溶液，吹干，置紫外光燈(365 nm)下檢視，呈黃色斑點(diǎn)。3 討論      實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，本實(shí)驗(yàn)方法工藝簡(jiǎn)單，回收率為100.16%，本實(shí)驗(yàn)所提供的超聲波提取、純化方法而得到的黃酮類物質(zhì)其純度較高。超聲波可以強(qiáng)化乙醇浸提法，達(dá)到省時(shí)、高效、節(jié)能的目的6。該方法采用全物理過程，無任何污染，是一條理想的提取小葉榕總黃酮類物質(zhì)的途徑，具有廣闊的應(yīng)用前景。    黃酮類化合物是一大類天然產(chǎn)物，廣泛存在于植物界

14、，是許多中草藥的有效成分。在自然界中最常見的是黃酮和黃酮醇，其它包括雙氫黃(醇)、異黃酮、雙黃酮、黃烷醇、查爾酮、橙酮、花色苷及新黃酮類等7。天然來源的生物黃酮分子量小，能被人體迅速吸收，能通過血腦屏障，進(jìn)入脂肪組織，進(jìn)而體現(xiàn)出如下功能：消除疲勞、保護(hù)血管、防動(dòng)脈硬化、擴(kuò)張毛細(xì)血管、疏通微循環(huán)、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大腦及其他臟器細(xì)胞的功能。    黃酮類化合物具有抗癌、抗腫瘤、抗心腦血管疾病、抗炎鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、降血糖、治療骨質(zhì)疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗輻射等作用813。近年來，世界上掀起了植物藥開發(fā)的熱潮，植物藥以天然低毒的特點(diǎn)備受青睞，而黃酮類化

15、合物以廣譜的藥理作用引人矚目。小葉榕分布廣泛。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，小葉榕中含有較為豐富的黃酮。因此，小葉榕具有廣泛的開發(fā)和利用價(jià)值，值得綜合利用并加強(qiáng)資源開發(fā)。    【參考文獻(xiàn)】  1張秀實(shí),吳鉦益,曹子余. 中國(guó)植物志M. 北京:科學(xué)出版社,1998:112. 2中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所.云南植物志M. 北京:科學(xué)出版社,1995：597.3劉詳義. 超聲波提取元寶楓葉總黃酮方法研究J.云南化工,2003,30（1）:27.4謝明杰,宋 明,鄒翠霞,等. 超聲波提取大豆異黃酮J. 大豆科學(xué),2004,23(1):75.5囯家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典,I部S.北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2005:附錄115 .6農(nóng)世永,林丹英,尤婷婷,等. 超聲波提取馬尾松總黃酮及鑒別J.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2007,18（8）:1913.7夏杏洲,張 輝,魏傳晚.榕樹葉中黃酮類化合物的提取條件研究J.食品研究與開發(fā),2002,23(5)：35.8姜國(guó)芳,謝宗波,樂長(zhǎng)高.銀杏葉黃酮類化合物的研究進(jìn)展J. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2004,15（5）:306.9曹緯國(guó),劉志勤,邵 云,等. 黃酮類化合物藥理作