實驗九抗酸染色

1、實驗九實驗九抗抗 酸酸 染染 色色一、實驗?zāi)康模阂?、實驗?zāi)康模?.掌握抗酸染色的原理和方法掌握抗酸染色的原理和方法2掌握結(jié)核分支桿菌痰涂片的報告方掌握結(jié)核分支桿菌痰涂片的報告方法。法。v分枝桿菌的細(xì)胞壁內(nèi)含有大量的脂質(zhì)，主要是分枝菌酸，它包圍在肽聚糖的外面，所以分枝桿菌一般不易著色，要經(jīng)過加熱和延長染色時間來促使其著色。但分枝桿菌中的分枝菌酸與染料結(jié)合后，就很難被酸性脫色劑脫色，故名抗酸染色抗酸染色。v齊-尼氏抗酸染色法是在加熱條件下使分枝菌酸與石炭酸復(fù)紅牢固結(jié)合成復(fù)合物，用鹽酸酒精處理也不脫色。當(dāng)再加堿性美蘭復(fù)染后，分枝桿菌仍然為紅色，而其他細(xì)菌及背景中的物質(zhì)為蘭色。三、實驗材料：三、實驗材

2、料：細(xì)菌：結(jié)核桿菌染液：石炭酸復(fù)紅液、3%鹽酸酒精、堿性美蘭溶液其它：接種環(huán)、酒精燈、載玻片等四、實驗方法：四、實驗方法：1、細(xì)菌涂片的制備、細(xì)菌涂片的制備 1）涂片：）涂片：20mm*25mm薄涂片或薄涂片或 20mm*15mm厚涂片厚涂片 2）干燥：自然干燥）干燥：自然干燥 3）固定：火焰固定）固定：火焰固定四、實驗方法：四、實驗方法：1、細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備、細(xì)菌涂片標(biāo)本的制備 涂片涂片 干燥干燥 固定固定2、染、染 色色3、油鏡觀察油鏡觀察1）初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅）初染：用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽滴，在火焰高

3、處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時離開，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免即暫時離開，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱干涸，加熱5-10分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。2）脫色：）脫色： 3%鹽酸酒精脫色鹽酸酒精脫色301；用水沖洗。；用水沖洗。3）復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染）復(fù)染：用堿性美蘭溶液復(fù)染1，用水沖洗后用吸，用水沖洗后用吸水紙吸干。水紙吸干。五、實驗結(jié)果：五、實驗結(jié)果：結(jié)核桿菌呈紅色結(jié)核桿菌呈紅色，常堆積成團(tuán)，排列無序，偶呈分枝狀生長。背景及非抗酸性細(xì)菌呈蘭色。六、注意事項：六、注意事項：1、無菌操作、無菌操作2、涂片厚度要適中、涂片厚度要適中3、固定、固定4、沖洗、沖洗5、染色時間、染色時間6、初染加熱的溫度，勿沸騰、初染加熱的溫度，勿沸騰準(zhǔn)備v細(xì)菌：卡介苗