槐花藥材中總黃酮的質(zhì)量分析試驗設(shè)計1

1、槐花藥材中總黃酮的質(zhì)量分析【實驗?zāi)康摹?、掌握比色法測定槐花藥材中總黃酮含量的方法及原理。2 、熟悉槐花藥材的含量測定的方法學(xué)驗證?！緦嶒炘怼炕被槎箍浦参锘盨ophora japonica L 的干燥花及花蕾。夏季花開放或花蕾 系形成時采收，及時干燥，除去枝、梗及雜質(zhì)。前者習(xí)稱“槐花”，后者習(xí)稱“槐米”0槐花藥材的主要有效成份是黃酮類化合物，其中產(chǎn)丁的含量最高，所以槐花藥材 的鑒別及含量測定均以產(chǎn)丁為指標成分。0H0H產(chǎn)丁 ( C27H30。6,610.51 )黃酮類化合物在堿性條件下與鋁鹽發(fā)生配位反應(yīng)，生成紅色的配位化合物，使得最 大吸收波長紅移至可見光區(qū)，且具有較高的吸收系數(shù)。黃酮類與

2、鋁鹽的配位反應(yīng)是 定量完成的，因此可采用比色法測定槐花藥材中總黃酮的含量，避免其他非黃酮成 分對測定準確度的影響。【儀器與試藥】儀器：紫外一可見分光光度計、100ml容量瓶、25ml容量瓶、10ml移液管，超聲 波清洗器、漏斗、玻璃棒、燒杯、膠頭滴管、洗耳球等。試劑：槐花藥材、產(chǎn)丁對照品、5%!硝酸鈉溶液、10%肖酸鋁溶液，氫氧化鈉試 液、甲醇、乙醇等。【實驗步驟】1線性范圍考察1.1 供試品溶液的制備將槐花研碎，取粗粉約1g,精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加 60% (V/V)乙 醇100ml,稱定重量，超聲30分鐘，用60% (V/V)乙醇補足失重，搖勻，過濾， 取續(xù)濾液10ml,置100m

3、l量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。(中國藥典2015版：將槐花研碎，取粗粉約1g,精密稱定，置索氏提取 器中，加乙醴適量，加熱回流至提取液無色，放冷，棄去乙醴液。再加甲醇 90ml,加熱回流至提取液無色，轉(zhuǎn)移至 100ml量瓶中，用甲醇少量洗滌容器，洗液 并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻。精密量取 10ml,置100ml量瓶中，加水 至刻度，搖勻。)1.2 線性關(guān)系的考察分別取供試品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml與6ml于25ml容量瓶中，各加 水使成6.0ml,精密加5%H肖酸鈉溶液1.0ml,搖勻，放置6分鐘，再加10%肖酸 鋁溶液1.0ml,搖勻，放置6分鐘，

4、加氫氧化鈉試液10.0ml,加水稀釋至刻度，搖 勻，放置15分鐘，不加對照品溶液同法配制空白溶液，按照紫外可見分光光度 法，在500nm波長處測定各溶液的吸光度。根據(jù)響應(yīng)信號選擇最佳的供試品溶度。2總黃酮含量測定2.1 對照品溶液的制備取產(chǎn)丁對照品50mg精密稱定，置于25ml量瓶中，加60%L醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，力口 60叱醇至刻度，搖勻。精密量取10ml,置于100ml量瓶 中，力口水至刻度，搖勻，即得濃度為 0.2mg/ml的產(chǎn)丁對照品溶液。2.2 標準曲線的制備精密量取對照品溶液1ml,2ml,3ml,4ml,5ml 與6ml,分別置于6個25ml量瓶 中，各加水使成6.

5、0ml,精密加5%!硝酸鈉溶液1.0ml,搖勻，放置6分鐘，再加 10%肖酸鋁溶液1.0ml,搖勻，放置6分鐘，加氫氧化鈉試液10.0ml,加水稀釋至 刻度，搖勻，放置15分鐘，不加對照品溶液同法配制空白溶液，按照紫外可見分 光光度法，在500nm波長處測定各溶液的吸光度，以濃度為橫坐標，吸光度為縱坐 標，繪制標準曲線。濃度 C (mg/ml)0.000 0.008 0.016 0.024 0.032 0.040 0.048吸光度A2.3 測定法精密量取供試品溶液3ml,置25ml量瓶中，按照標準曲線制備項下方法，自 “加水使成6.0ml”起同法測定吸光度，由標準曲線計算出供試品溶液中含產(chǎn)丁的

6、重量?；被ò锤稍锲酚嬎悖傸S酮以產(chǎn)丁( G7H0。6)計，槐花不得少于8.0%,槐米不得少于20.0%。樣品濃度C (mg/ml)123平均值吸光度AZ濃度 C (mg/ml)一百分含量(%3方法學(xué)驗證考察3.1 精密度試驗指用相同方法對同一樣品溶液進行多次測定，考察各測定值彼此接近的程度。具體如下：取同一樣品，連續(xù)測定五次，相對標準偏差RS陰不得大于2.1 %。具體如下：精密度試驗操作方法：取同一槐花樣品溶液 5 ml ,在500 nm處測吸光度, 重復(fù)測定5次，算出RSD測試次數(shù)12345吸光度A2.2 重復(fù)性試驗每份供試品液再分別進行測定，測定所得到的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，計算其含 量的

7、平均值和相對標準偏差（RSD%。具體如下：同一批號樣品，分別取低、中、 高三個樣品量，每個樣品量3份，按樣品測定方法操作。或在規(guī)定范圍內(nèi)，取同一 濃度的供試品，用6個測定結(jié)果進行評價。相對標準偏差 RS陰不得大于2.0%。重復(fù)性實驗操作方法：精密稱取藥材樣品1g,精密稱定，共6份，按供試品制備方法制成供試品溶液按測定法分別在 500nm波長處測定各溶液的吸光度。由 標準曲線計算出供試品溶液中含產(chǎn)丁的重量（ug）并求RSDfio樣品 123456吸光度A含量（ug）2.3 穩(wěn)定性試驗考察不同時間點是否對測定方法和測定結(jié)果有影響，用同一被測樣品的供試液在不同間隔時間用同一測定方法所得到的測定結(jié)果。

8、一般考察36小時，這里考察60min計算RSD嘛得大于3.0%。對照和樣品均要做。穩(wěn)定性實驗操作方法：取產(chǎn)丁對照品和樣品溶液 5ml,于0, 15, 30, 45, 60 m in ,測定吸光值，計算吸光度平均值，求出 RSD判斷樣品的穩(wěn)定性。""時間（min）015304560平均值吸光度A2.4 加樣回收試驗一般回收率要求在 95.0105.0 %。詳解：加樣回收試驗即于已知被測成分含量的成藥中再精密加入一定量的被測 成分純品，依法測定。用實測值與原樣品中含測成分之差，除以加入純品量計算回 收率。此法不用制備空白對照，模擬真實性好。加樣回收試驗操作方法：取樣品6份精密稱定每份0.5g,精密加入產(chǎn)丁對照品 適，同按照供試品溶液的制備法和測定法步驟在500nm波長處測定各濃度的吸光度，計算含量。回收率% =實驗測得量-實驗前樣品含量加入對照品含量100%注意事項：純品的加人量與取樣量中被測成分之和必須在標淮曲線線性關(guān)系范圍之內(nèi)；外加純品的量要適當(dāng)，過小則引起較大的相對誤差，過大則干擾成分相對減 少，真實性差。一般加入量與所取樣品含量之比控制在1: 1左右做加樣試驗時，有人將對照品加至制