注射液有關(guān)物質(zhì)及含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證方案

1、注射用XX有關(guān)物質(zhì)及含量測(cè)定方法學(xué)驗(yàn)證方案樣品：自制XX供試品：批號(hào)：市售品：進(jìn)口 XX 批號(hào)： 國產(chǎn)XX 批號(hào)： 對(duì)照品：XX對(duì)照品：自制，批號(hào)： xxxxxx , XX含量：51.27% 水分：1.34%A對(duì)照品：來源：批號(hào)：B對(duì)照品：來源：批號(hào)：C對(duì)照品：來源：批號(hào)：1、方法驗(yàn)證 注射用XX是以XX為原料通過復(fù)溶并重新凍干獲得，制品期間未加入任何輔料，同時(shí)注射用XX有關(guān)物質(zhì)及含量測(cè)定方法與原料測(cè)定方法完全一致，因此注射用 XX有關(guān)物質(zhì)及含量測(cè)定方法 學(xué)驗(yàn)證可與XX原料方法學(xué)一致，此次方法學(xué)驗(yàn)證使用的樣品用原料（批號(hào)： xxxxxx ）代替。 2、檢測(cè)方法含量測(cè)定照高效液相色譜法（中國藥典

2、 2015年版四部通則0512）測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以水相-甲醇-乙睛（800:160:16）為流動(dòng)相；柱溫：30C；檢測(cè)波長為 260nm。取對(duì)照品溶液作為系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液，量取 20 M注入液相色譜儀，各雜質(zhì)峰之間及主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應(yīng)符合規(guī)定，理論板數(shù) 按XX峰計(jì)算應(yīng)不低于 3000。測(cè)定法 取本品適量，精密稱定，加水溶解制成每1ml中約含XX 0.2mg的溶液，作為供試品溶液。精密量取供試品溶液 20小 注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取 XX對(duì)照品適量，同法測(cè) 定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，按無水物計(jì)算，含 XX陽離子應(yīng)為 50.0

3、%54.0%。有關(guān)物質(zhì)照高效液相色譜法（中國藥典 2015年版四部通則0512）測(cè)定。取本品，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX 0.5mg的溶液，作為供試品溶液；另分別取A、B、XX、C對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并定量制成每 1ml中約含A 2.5 g B 2.5 g、 XX5.0聞、C 5.0 g的混合溶液，作為對(duì)照品溶液。取對(duì)照品溶液 20 口，注入液相色譜儀，出峰順 序依次為A、B、XX、C,調(diào)節(jié)檢測(cè)靈敏度，使主成分色譜峰的峰高約為滿量程的10%30%;再精密量取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20出分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時(shí)間的6倍。供試品溶液色譜圖中如顯

4、雜質(zhì)峰，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算，A峰面積不得大于對(duì)照品溶液中A的主峰面積（0.5%）, B峰面積不得大于對(duì)照品溶液中B的主峰面積（0.5%）, C峰面積不得大于對(duì)照品溶液中 C的峰面積（1.0%）,其它單個(gè)雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照品溶液中XX主峰面積的0.1倍（0.1%）,其它雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照品溶液中XX主峰面積的0.5倍（0.5%）。3、方法學(xué)驗(yàn)證項(xiàng)目采用自制品（批號(hào)：xxxxxx ）按照確定的檢測(cè)方法進(jìn)行詳細(xì)的方法學(xué)驗(yàn)證。項(xiàng)目驗(yàn)證要求專屬性（1）空白溶劑水應(yīng)不十?dāng)_測(cè)定；供試品溶液色諳圖中主成分峰與對(duì)照品溶液色諳 圖中主成分峰保留時(shí)間應(yīng)一致；系統(tǒng)適用性溶液中各成分峰保留時(shí)間與其單 獨(dú)進(jìn)

5、樣的保留時(shí)間基本一致，各已知雜質(zhì)峰之間、主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之 間分離度均應(yīng)大于 2.0,主成分峰理論板數(shù)應(yīng) 3000專屬性（2）供試品破壞試驗(yàn)（包括酸破壞試驗(yàn)，堿破壞試驗(yàn)，氧化破壞試驗(yàn)，高溫破壞試驗(yàn)，光 照破壞試驗(yàn)）中主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)能完全分離，主成分峰純度因子應(yīng)大于980，物料基本守恒，破壞前后峰面積和基本一致。系統(tǒng)適用性（1）有美物質(zhì)方法學(xué)配制6份相同濃度的雜質(zhì)對(duì)照品混合溶液（系統(tǒng)適用性試驗(yàn)溶液）進(jìn)行分析，各雜質(zhì)峰峰面積的 RSD應(yīng)W2.0%保留時(shí)間的 RSD應(yīng)W1.0%主峰拖尾因子應(yīng)不大于2.0,理論板數(shù)應(yīng)3000各已知雜質(zhì)峰與相鄰峰分離度應(yīng)2.0系統(tǒng)適用性（2） 含量測(cè)定方法學(xué)

6、配制6份相同濃度的0.2mg/ml對(duì)照品溶液進(jìn)行分析，主峰峰面積的RSD應(yīng) 2.0%主峰保留時(shí)間的 RSD應(yīng)w 1.0%主峰拖尾因子應(yīng) & 2.0主峰的理論板 數(shù)應(yīng)3000線性與范圍（1）有美物質(zhì)方法學(xué)A在定量限-200%限度（定量限-5.0 g g/m®濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對(duì)照品溶液，分 別測(cè)定主峰面積，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的 峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析。B在定量限-200%限度（定量限-5科g/ml的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對(duì)照品溶液，分別測(cè)定 主峰面積，以濃度C）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積（A） 為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析。XX

7、在定量限-200%限度（定量限-10科g/m的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對(duì)照品溶液，分別測(cè) 定主峰面積，以濃度 C）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面積 （A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析。C在定量限-200%限度（定量限-10 g g/m的濃度范圍內(nèi)配制6份濃度不同的各組分對(duì)照品溶液，分別測(cè) 定主峰面積，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，以相應(yīng)的峰面 積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：回歸方程的相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng)0.990 丫軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值白2 25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的 RSD應(yīng)W10%線性與范圍（2） 含量測(cè)定方法學(xué)在50%-300% （0.1mg/ml-0.6mg/ml ）的濃度范圍

8、內(nèi)配制 5份濃度不同的對(duì)照品 溶液，分別測(cè)定主峰面積，以濃度（C）為橫坐標(biāo)，以 相應(yīng)的峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析?；貧w方程的相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng)0.993 Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的 RSD應(yīng)W2.0%檢測(cè)限LOD主峰與噪音峰信號(hào)比 3時(shí)的各已知雜質(zhì)和主成分對(duì)照品溶液濃度（量）。定量限LOQ主峰與噪音峰信號(hào)比 10時(shí)的各已知雜質(zhì)和主成分對(duì)照品溶液濃度（量）；配制6份各已知雜質(zhì)和主成分定量限濃度溶液，所測(cè)6份溶液各已知雜質(zhì)和主成分主峰保留時(shí)間的 RSD應(yīng)詞,所測(cè)6份各已知雜質(zhì)和主成分溶液主峰面 積的RSD應(yīng)磴。精密度（1）有美物質(zhì)方法學(xué)包括重復(fù)性和中間精密度。重復(fù)

9、性：配制6份同一濃度（相當(dāng)于 100%濃度水平）的供試品溶液，由 1人在盡可能相同的條件下進(jìn)行雜質(zhì)含量測(cè)定，所得6份雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)0 2%中間精密度：配制 6份相同濃度供試品溶液，由另一分析人員用另一臺(tái)儀器十/、同日期進(jìn)行雜質(zhì)含量測(cè)定，所得12份雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)w 2%精密度（2）含量測(cè)定方法學(xué)包括重復(fù)性和中間精密度。重復(fù)性：配制6份相同濃度的供13t品溶液，由 1人在盡可能相同的條件下進(jìn)行含量測(cè)定，所得 6份含量數(shù)據(jù)的RSD應(yīng)w 1%中間精密度：配制 6份相同濃度供試品溶液，由另 1人用另一臺(tái)儀器進(jìn)行含量測(cè)定，所得12份含量數(shù)據(jù)的RSD應(yīng)W1%準(zhǔn)確度（1）有美物質(zhì)方法學(xué)分別

10、配制含已知雜質(zhì)濃度為各自限度濃度50%、100%、150%的供試品溶液各3份，分別測(cè)定已知雜質(zhì)含量，將實(shí)測(cè)值與理論值比較，計(jì)算回收率，各濃度下的平均回收率均應(yīng)在 92%-105%, 9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)W10%準(zhǔn)確度（2）含量測(cè)定方法學(xué)分別配制含 XX濃度為80%、100%、120%的供試品溶液各3份，分別測(cè)定含量，將實(shí)測(cè)值與理論值比較，計(jì)算回收率，各濃”的平均回收率均應(yīng)在98%-101% , 9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)W2.0%耐用性（1）（濃 0.5mg/ml）有美物質(zhì)方法學(xué)溶液穩(wěn)定性：供試品溶液分別在室溫和冰箱冷藏室（4C）中放置12h,分別在0、4、8、12h測(cè)定雜質(zhì)含量，各已知

11、雜質(zhì)含量的絕對(duì)值在10.1%以內(nèi)，并不得出現(xiàn)新的大于報(bào)告限度的雜質(zhì)視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。流速耐用性：供試品溶液在 0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測(cè)定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達(dá)到基線分離，各雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與1.0ml/min測(cè)定數(shù)值相比變化 值在M.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。柱溫耐用性：供試品溶液在 25C、30C、35c條件下測(cè)定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達(dá)到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與30c測(cè)定數(shù)

12、值相比變化值在 3.1%以內(nèi)，視為耐 用性好，否則為不好。流動(dòng)相pH值耐用性：供試品溶液在 pH值為3.3、3.5、3.7條件下測(cè)定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達(dá)到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的RSD應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與 pH3.5測(cè)定數(shù)值相比變化值在 10.1%以內(nèi)， 視為耐用性好，否則為不好。流動(dòng)相比例耐用性：供試品溶液在流動(dòng)相（水相：甲醇：乙睛）比例分別為750: 200: 20; 800:160: 16; 850: 120: 12條件下測(cè)定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大 于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達(dá)到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

13、 應(yīng)不大于20%,雜質(zhì)含量與800: 160: 16測(cè)定數(shù)值相比變化值在 10.1%以內(nèi) 視為耐用性好，否則為不好。耐用性（2）（濃度0.2mg/ml ）含量測(cè)定方法學(xué)溶液穩(wěn)定性：供試品溶液分別在室溫和冰箱冷藏室（4C）中放置12h,分別在0、4、8、12h測(cè)定含量，與0時(shí)比較，各放置時(shí)間含量變化的絕對(duì)值不大于2.0%,視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。流速耐用性：供試品溶液在 0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測(cè)定含量，主峰的拖尾因子應(yīng)不大于 2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)達(dá)到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于 2.0%視為耐用性好，否則為不好。柱溫耐用性：供試品溶

14、液在 25C、30C、35c條件下測(cè)定，主峰的拖尾因子應(yīng)不大于2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)達(dá)到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。流動(dòng)相pH值耐用性：供試品溶液在 pH值為3.3、3.5、3.7條件下測(cè)定，主峰的拖尾因子應(yīng)不大于2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)達(dá)到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。流動(dòng)相比例耐用性：供試品溶液在流動(dòng)相（水相：甲醇：乙睛）比例分別為750: 200: 20; 800:160: 16; 850: 120: 12條件下測(cè)定，主峰的拖尾因子應(yīng)不大于 2.0,主峰與 相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)達(dá)到基線分離，含量數(shù)據(jù)的

15、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。4.1溶液配制A對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱取 A對(duì)照品適量，加水稀釋制成約0.1mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液B對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱取B對(duì)照品適量，加水稀釋制成0.1mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。有關(guān)物質(zhì)檢查XX對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱取XX對(duì)照品適量，加水稀釋制成約 0.5mg/ml的對(duì)照 品儲(chǔ)備液。C對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密稱取C對(duì)照品適量，力口水稀釋制成約0.2mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液。A雜質(zhì)定位溶液：精密量取A對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加水稀釋制成約2.5科g/m對(duì)照品溶液。B雜質(zhì)定位溶液：精密量取B對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加水稀釋制成約2.5g/ml溶液。5.0g/ml

16、j溶液XX定位溶液：精密量取 XX對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加水稀釋制成約C雜質(zhì)定位溶液：精密量取C對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加水稀釋制成約5.0 g/m溶液B對(duì)照品儲(chǔ)備液、XX對(duì)照品雜質(zhì)對(duì)照品溶液（系統(tǒng)適用性溶液）：精密量取A對(duì)照品儲(chǔ)備液、儲(chǔ)備?C對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，加水稀釋制成含A約2.5科g/m,l B約2.5科g/m,l XX約5.0科g/ml C約5.0科g/m的混合溶液，同時(shí)作為系統(tǒng)適用性溶液。含量測(cè)定對(duì)照品儲(chǔ)備液：精密量取XX對(duì)照品（批號(hào)xxxxxx）適量，加水溶解并稀釋制成約含 XX1.0mg/ml的溶液。供試品儲(chǔ)備液：精密稱取 XX （批號(hào)xxxxxx、市售樣品1批號(hào)xxxxxx、市售樣品2批

17、號(hào)xxxxxx） 樣品適量，加水溶解稀釋制成約含XX 5.0mg/ml的溶液。供試品溶液（1）:精密稱取各來源 XX樣品適量，加水溶解稀釋制成約含XX 0.5mg/ml的溶液作為供試品溶液（有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)）。供試品溶液（2）：精密稱取各來源 XX樣品適量，加水溶解稀釋制成約含XX 0.2mg/ml的溶液作為供試品溶液（含量測(cè)定）。對(duì)照品溶液：精密量取XX對(duì)照品（批號(hào)xxxxxx）適量，加水溶解并稀釋制成約含XX 0.2mg/ml的溶液（含量測(cè)定）。4.2方法學(xué)驗(yàn)證4.2.1 專屬性（1）（1）空白溶劑干擾試驗(yàn)：取水溶液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，在主成分峰及各已知雜質(zhì)峰位置應(yīng)不出現(xiàn)色譜

18、峰，以此確定空白溶劑無干擾。(2)雜質(zhì)定位試驗(yàn)(DAD檢測(cè)器)精密量取A雜質(zhì)定位溶液、B雜質(zhì)定位溶液、C雜質(zhì)定位溶液、XX定位溶液、雜質(zhì)對(duì)照品溶液各203，依次注入色譜儀中，記錄色譜圖。雜質(zhì)對(duì)照溶液中理論板數(shù)按XX峰計(jì)算應(yīng)3000各雜質(zhì)峰之間及主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間的分離度應(yīng)符合規(guī)定，各已知雜質(zhì)定位溶液保留時(shí)間與雜質(zhì)對(duì)照品溶液各峰保留時(shí)間應(yīng)一致，各雜質(zhì)對(duì)照峰純度因子應(yīng)大于980。(3)供試品溶液與對(duì)照品溶液對(duì)比試驗(yàn)( DAD檢測(cè)器)精密量取XX自制供試品溶液(1),供試品溶液(2)和對(duì)照品溶液(0.2mg/ml)各20dl分別 注入色譜儀中，記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中主成分峰與對(duì)照品溶液

19、色譜圖中主成分峰保留時(shí)間應(yīng)一致，主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)能完全分離，主成分峰的純度因子應(yīng)大于980。專屬性(1)試驗(yàn)結(jié)果名稱雜質(zhì)定位溶液雜質(zhì)對(duì)照溶液主峰保留時(shí)間(min)主峰保留時(shí)間(min)理論板數(shù)與相鄰雜質(zhì)峰 之間分離度純度因子ABCXX樣品主峰保留時(shí)間(min)理論板數(shù)與相鄰雜質(zhì)峰之 間分離度純度因子對(duì)照品溶液(0.2mg/ml )供試品溶液(1)-自制品 (0.5mg/ml)供試品溶液(2)-自制品 (0.2mg/ml)可接受標(biāo)準(zhǔn)空白溶劑應(yīng)不干擾測(cè)定；供試品溶液色譜圖中主成分峰與對(duì)照品溶液色譜圖中主成分峰保留時(shí)間應(yīng)一致，各已知雜質(zhì)峰之間、主成分峰與相鄰雜質(zhì)峰之間分離度均應(yīng)大于2.0,理論

20、板數(shù)按 XX計(jì)算應(yīng)3000各已知雜質(zhì)及主成分峰純度因子均應(yīng)大于980。4.2.2 專屬性(2)強(qiáng)制降解試驗(yàn)4.2.2.1 未破壞樣品有關(guān)物質(zhì)檢測(cè)(DAD檢測(cè)器)6 / 20以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應(yīng)不干擾檢測(cè)。分別精密量取供試品儲(chǔ)備液各1ml,分別置于3個(gè)10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，精密量取20 d注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，列表總結(jié)雜質(zhì)情況，并對(duì)比自家樣品與市售品的質(zhì)量。4.2.2.2 氧化破壞(DAD檢測(cè)器)(1)氧化破壞空白試驗(yàn)量取1ml30%過氧化氫置于10ml量瓶中，在室溫放置 48h后，加水定容至刻度，精密量取此溶 液20dl注入液相色譜

21、儀中，記錄色譜圖。(2)分別量取3個(gè)供試品儲(chǔ)備液各 1ml置10ml容量瓶中，加入1ml30%過氧化氫，在室溫放置 48h后，加水定容至刻度，分別精密量取此溶液20 d注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計(jì)算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計(jì)3個(gè)供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個(gè)數(shù)及所占比例情況，列表進(jìn)行對(duì)比分析。4.2.2.3 堿破壞試驗(yàn)(DAD檢測(cè)器)(1)堿破壞空白試驗(yàn)量取1ml0.05mol/L氫氧化鈉溶?夜,置于 10ml量瓶中，在室溫放置 1h后，力口 1ml 0.05mol/l HCl 溶液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。(2)分別量取3個(gè)供試品儲(chǔ)備液各1ml

22、置10ml容量瓶中，加入1ml0.05mol/L氫氧化鈉溶液，在 室溫放置1h后，加1ml 0.05mol/l HCl溶液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20 dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計(jì)算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計(jì)3個(gè)供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個(gè)數(shù)及所占比例情況，列表進(jìn)行對(duì)比分析。4.2.2.4 酸破壞13t驗(yàn)(DAD檢測(cè)器)(1)酸破壞空白試驗(yàn)量取1ml1mol/LHCL溶液，置于10ml量瓶中，在室溫放置 24 h后，力口 1ml 1mol/L氫氧化鈉溶 液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。(2)分別量取3個(gè)供試品儲(chǔ)備液各1ml置10ml容量瓶

23、中，加入1ml1mol/LHCL溶液，在室溫放 置24 h后，力口 1ml 1mol/L NaOH溶液，加水定容至刻度，精密量取此溶液20"注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計(jì)算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計(jì)3個(gè)供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個(gè)數(shù)及所占比例情況，列表進(jìn)行對(duì)比分析。4.2.2.5 高溫破壞試驗(yàn)(DAD檢測(cè)器)(1)高溫破壞空白試驗(yàn)以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應(yīng)不干擾檢測(cè)。(2)量取3個(gè)供試品儲(chǔ)備液各 1ml置10ml容量并S中，加水定容，在50c恒溫放置2h后，精密量取 此溶液20科注入液相色譜儀中， 記錄色譜圖，計(jì)算樣品破壞前后的總峰面積比值、

24、統(tǒng)at 3個(gè)供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個(gè)數(shù)及所占比例情況，列表進(jìn)行對(duì)比分析。4.2.2.6 光照破壞試驗(yàn)（DAD檢測(cè)器）（1）光照破壞空白試驗(yàn)以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應(yīng)不干擾檢測(cè)。（2）分別量取3個(gè)供試品溶液于光強(qiáng)為 4500Lux （最高光強(qiáng)），室溫放置48h后，精密量取此溶 液20dl注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，計(jì)算樣品破壞前后的總峰面積比值、統(tǒng)計(jì)3個(gè)供試液破壞后產(chǎn)生的雜質(zhì)個(gè)數(shù)及所占比例情況，列表進(jìn)行對(duì)比分析?？山邮軜?biāo)準(zhǔn)：1 .各降解條件空白試驗(yàn)不干擾測(cè)定。2 .主峰純度因子應(yīng)大于 980,主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度應(yīng)R2.0。3 .破壞前后物質(zhì)應(yīng)守恒：破壞

25、前后的總峰面積比應(yīng)在90.0-110.0%范圍內(nèi)。4 .自家產(chǎn)品破壞后雜質(zhì)個(gè)數(shù)及雜質(zhì)總量不應(yīng)多于其他兩種對(duì)比樣品。4.2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（1）（有關(guān)物質(zhì)）（1）做空白溶劑干擾試驗(yàn)以水為空白：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應(yīng)不干擾檢測(cè)。（2）配制6份相同濃度的雜質(zhì)對(duì)照品溶液， 分別精密量取20 d注入液相色譜儀中， 記錄色譜圖， 各雜質(zhì)峰峰面積的 RSD應(yīng)W2.0%保留時(shí)間的 RSD應(yīng)W1.0%主峰拖尾因子應(yīng)不大于 2.0,理論板 數(shù)應(yīng)>3000各已知雜質(zhì)峰與相鄰峰分離度應(yīng) >2.04.2.4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)（2）（含量測(cè)定）（1）做空白溶劑干擾試驗(yàn)以水為空白

26、：精密量取超純水20科注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，應(yīng)不干擾檢測(cè)。（2）配制6份相同濃度的0.2mg/ml對(duì)照品溶液，分別精密量取20 d注入液相色譜儀中，記錄色 譜圖，主峰峰面積的 RSD應(yīng)W2.0%主峰保留時(shí)間的 RSD應(yīng)W1.0%主峰拖尾因子應(yīng) <2.0主峰的 理論板數(shù)應(yīng)R3000主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度應(yīng) >2.04.2.5 檢測(cè)限分別量取各已知雜質(zhì)和主成分對(duì)照品儲(chǔ)備液，加水逐步稀釋成一定濃度的溶液，精密量取20 M注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，信噪比約為3: 1時(shí)的各成分濃度及進(jìn)樣量，為檢測(cè)限濃度及量。4.2.6 定量限分別量取各已知雜質(zhì)和主成分對(duì)照品溶液，加水逐步稀釋成一

27、定濃度的溶液，精密量取20 d注入液相色譜儀中， 記錄色譜圖，信噪比約為10: 1時(shí)的各成分濃度及進(jìn)樣量，為定量限濃度及量。分別配制6份各已知雜質(zhì)和主成分的定量限濃度溶液，分別精密量取203注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，所測(cè)6份各已知雜質(zhì)和主成分的定量限溶液主峰的保留時(shí)間的RSD應(yīng)=1%,所測(cè)6份各已知雜質(zhì)和主成分溶液主峰面積的RSD應(yīng)您%。4.2.7 線性與范圍（1）（有關(guān)物質(zhì)）4.2.7.1 A線性與范圍(儲(chǔ)備液濃度為0.1mg/ml)精密量取A對(duì)照品儲(chǔ)備液適量配制成定量限濃度、1ml (40%)、2ml (80%)、2.5ml (100%)、3ml (120%)、4ml (160%)、5

28、ml(200%),分別置100ml容量瓶中，置于100ml量瓶中，加水稀釋至 刻度。分別精密量取 20dL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以 A濃度(C, mg/ml)為橫坐標(biāo)，以 峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程的相關(guān)系數(shù)( R)應(yīng)0.9如，Y軸截距應(yīng)在100% 響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的 RSD應(yīng)W10%結(jié)果見下表。A線性與范圍試驗(yàn)結(jié)果表濃度（C, mg/ml）峰面積(A)響應(yīng)因子(A/C )響應(yīng)因子RSD%應(yīng)司0%Y軸截距/100%響應(yīng)值應(yīng) <25%回歸方程A=KC+b相關(guān)系數(shù)(R2)應(yīng) 0.9904.2.7.2 B線性與范圍(儲(chǔ)備液濃度為0.1mg/ml)精密量取B

29、對(duì)照品儲(chǔ)備液適量配制成定量限溶液、1ml (40%)、2ml (80%)、2.5ml (100%)、3ml (120%)、4ml (160%)、5ml(200%),置于100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。分別精密量取 20 dL 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以 B濃度(C, mg/ml)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)，進(jìn) 行線性回歸，回歸方程的相關(guān)系數(shù)(R)應(yīng)0.90, Y軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的RSD應(yīng)40%。結(jié)果見下表。B線性與范圍試驗(yàn)結(jié)果表濃度（C, mg/ml）峰面積(A)響應(yīng)因子(A/C )響應(yīng)因子RSD%應(yīng)司0%Y軸截距/100%響應(yīng)值應(yīng) <25%回

30、歸方程A=KC+b相關(guān)系數(shù)(R2)應(yīng) 0.9904.2.7.3 XX線性與范圍(有關(guān)物質(zhì)檢查對(duì)照品儲(chǔ)備液濃度為0.5mg/ml)精密量取XX對(duì)照品儲(chǔ)備液適量配制成定量限溶液、0.4ml (40%)、0.8ml (80%)、1ml (100%)、1.2ml (120%)、1.6ml (160%)、2ml(200%),置于100ml量瓶中,加水稀釋至刻度。分別精密量取20dL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以 XX濃度(C, mg/ml)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐 標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程的相關(guān)系數(shù)( R)應(yīng)0.90 丫軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的RSD應(yīng)得0.0%。結(jié)果見

31、下表。XX線性與范圍試驗(yàn)結(jié)果表濃度（C, mg/ml）峰面積（A）響應(yīng)因子（A/C ）響應(yīng)因子RSD%應(yīng)司0%Y軸截距/100%響應(yīng)值應(yīng) <25%回歸方程A=KC+b相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng) 0.9904.2.7.4 C線性與范圍（儲(chǔ)備液濃度為0.2mg/ml）精密量取 C對(duì)照品儲(chǔ)備液適量配制成定量限溶液、1ml（40%）、2ml （80%）、2.5ml （100%）、3ml（120%）、4ml（160%）、5ml（200%）,置于100ml量瓶中，加水稀釋至刻度。分別精密量取20始注入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以線性回歸，回歸方程的相關(guān)系數(shù)（C濃度（C, mg/ml）為橫坐標(biāo)，以峰面積（A）

32、為縱坐標(biāo)，進(jìn)行R）應(yīng)0.90, 丫軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的25%以內(nèi)，響應(yīng)因子的RSD應(yīng)得0%。結(jié)果見下表。C線性與范圍試驗(yàn)結(jié)果表濃度（C, mg/ml）峰面積（A）響應(yīng)因子（A/C ）響應(yīng)因子RSD%應(yīng)司0%Y軸截距/100%響應(yīng)值應(yīng) <25%回歸方程A=KC+b相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng) 0.9904.2.8線性與范圍（2）（含量測(cè)定）4.2.8.1 XX線性與范圍（含量測(cè)定對(duì)照品儲(chǔ)備液濃度為1.0mg/ml）精密量取 XX 對(duì)照品貯備液 1.0ml （50%）、2ml （100%）、3ml （150%）、5ml （300%）分別置10ml容量瓶中，加水稀釋至刻度。分別精密量取20 dL注

33、入液相色譜儀中，記錄色譜圖。以 XX濃度（C, mg/ml）為橫坐標(biāo)，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程的相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng)0.9% 丫軸截距應(yīng)在100%響應(yīng)值的2%以內(nèi)，響應(yīng)因子的 RSD應(yīng)W2.0%結(jié)果見下表。XX線性與范圍試驗(yàn)結(jié)果表濃度（C, mg/ml）峰面積（A）響應(yīng)因子（A/C ）響應(yīng)因子RSD%應(yīng) 2.0%Y軸截距/100%響應(yīng)值應(yīng)2%回歸方程A=KC+b相關(guān)系數(shù)（R2）應(yīng) 0.9984.2.9精密度（1）（有關(guān)物質(zhì)）4.2.9.1重復(fù)性取XX樣品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1ml約含XX 0.5mg的溶液，搖勻，得供試品溶液，同法配制 6份，分別精密量取 2

34、0 口注入液相色譜儀中，記錄色譜圖；另取雜質(zhì)對(duì)照品溶液同法測(cè)定，計(jì)算有關(guān)物質(zhì)，所測(cè)6份供試品溶液的有關(guān)物質(zhì)的 RSD應(yīng)V%。有關(guān)物質(zhì)檢查重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表樣品123456A%平均值%RSD%應(yīng)2%B%平均值%RSD%應(yīng)2%C%平均值%RSD%應(yīng)V%最大未知單雜%平均值%RSD%應(yīng)V%未知雜質(zhì)和%平均值%RSD%應(yīng)V%總雜平均值%RSD%應(yīng)V%由另一 QC人員用另一臺(tái)液相，同法測(cè)定6份供試品溶液有關(guān)物質(zhì)，12份雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的 RSD 應(yīng)V%。有關(guān)物質(zhì)檢查中間精密度試驗(yàn)結(jié)果表樣品123456789101112A%平均值%RSD%應(yīng)w 2%B%平均值%RSD%應(yīng)W%C%平均值%RSD%應(yīng)w 2%最大未

35、知單雜%平均值%RSD%應(yīng)w 2%未知雜質(zhì)和%平均值%RSD%應(yīng)w 2%總雜平均值%RSD%應(yīng)w 2%4.2.10 精密度（2）（含量測(cè)定）4.2.10.1重復(fù)性取XX樣品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每 1ml約含XX0.2mg的溶液，搖勻，得供試品溶液，同法配制 6份，分別精密量取 20口注入液相色譜儀中，記錄色譜圖；另取含量測(cè)定對(duì)照品溶液同法測(cè)定，計(jì)算含量，所測(cè)6份供試品溶液的含量測(cè)定的RSD應(yīng)W%。含量測(cè)定重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表樣品123456含量%平均值%RSD%應(yīng)得4.2.10.2中間精密度由另一分析人員于不同日期用不同儀器同法測(cè)定6份含量，12份含量數(shù)據(jù)的RSD應(yīng)得。含量測(cè)定中間精

36、密度試驗(yàn)結(jié)果表樣品123456789101112含量%平均值%RSD%應(yīng)得備注：將重復(fù)性項(xiàng)下的含量測(cè)定結(jié)果作為準(zhǔn)確度試驗(yàn)的已知含量。4.2.11 準(zhǔn)確度(1)(有關(guān)物質(zhì))(1)配制供試品儲(chǔ)備液：精密稱取XX樣品適量，加水溶解并定量稀釋制成約含XX 5.0mg/ml的溶液，配制250ml, 4c冰箱中保存。(2)配制供試品溶液：精密量取供試品儲(chǔ)備液1ml,置于10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得。(3)配制加標(biāo)供試液：分別精密量取 A對(duì)照品儲(chǔ)備?夜(濃度 0.1mg/ml)、B對(duì)照品儲(chǔ)備液(濃 度0.1mg/ml)、C各雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液對(duì)口品儲(chǔ)備液(濃度 0.2mg/ml) 2.5、5.0

37、、7.5ml,分別置于3 個(gè)200ml量瓶中，分別加入供試品儲(chǔ)備液20ml,加水稀釋至刻度，搖勻，制成分別含 50%、100%、3份，共9份。加水稀釋制成每1ml中約含A150%已知雜質(zhì)的含 XX樣品0.5mg/ml的供試液，每個(gè)濃度分別制備(4)配制雜質(zhì)對(duì)照品溶液： 精密量取各雜質(zhì)對(duì)照品儲(chǔ)備液適量,4.2.12 2.5囚、C 5.0四的混合溶液。20W注入液相色譜儀，記錄92%-105% , 9 個(gè)回(5)分別精密量取供試品溶液、雜質(zhì)對(duì)照品溶液、各濃度供試液色譜圖，分別測(cè)定已知雜質(zhì)含量，計(jì)算回收率，各濃度下的平均回收率均應(yīng)在收率數(shù)據(jù)的RSD應(yīng)2%。有關(guān)物質(zhì)檢查準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果表編p加入量(mg

38、)測(cè)得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)RSD(%)雜質(zhì)ABCABCABCABCABC50%1-11-21-31002-1精密稱取XX樣品適量，加水溶解并定量稀釋分別制成每1ml中約含XX0.16mg (80%)、0.2mg(100%)和0.24mg (120%)的溶液，各濃度分別制備 3份，共9份，分別精密量取 20 注入液相色譜儀中，記錄色譜圖；另取含量測(cè)定對(duì)照品溶液20dL注入液相色譜儀中，記錄色譜圖，分別計(jì)算回收率。結(jié)果見下表。各濃度回收率均應(yīng)98%-101%, 9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的 RSD應(yīng)W2.0%含量測(cè)定準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果表編R已知量(mg)測(cè)得量(mg)回收率(%)平均回收率(%)

39、RSD(%)80%1-1應(yīng) 98%-101%應(yīng) W2.0%1-21-3100%2-1應(yīng) 98%-101%2-22-3120%3-1應(yīng) 98%-101%3-23-34.2.13耐用性(1)(有關(guān)物質(zhì))4.2.13.1溶液穩(wěn)定性精密稱取供試品適量， 加水溶解并稀釋制成每 1ml約含XX0.5mg的溶液，分別置室溫和4c冰 箱各放置12h,分別在0、4、8、12h測(cè)定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)含量的絕對(duì)值在 M.1%以內(nèi)，并不 得出現(xiàn)新的大于報(bào)告限度(0.05%)的雜質(zhì)視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。有關(guān)物質(zhì)檢查溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表放置時(shí)間0h4h8h12h雜質(zhì)變化雜質(zhì)雜質(zhì)與0h差雜質(zhì)與0卜差雜質(zhì)與0卜差A(yù)B

40、C新增大于0.05%的雜質(zhì)一4.2.13.2流速耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在流速0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測(cè)定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達(dá)到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與1.0ml/min數(shù)值相比變化的絕對(duì)值在劃1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。有關(guān)物質(zhì)檢查流速耐用性試驗(yàn)結(jié)果表流速(ml/min )0.81.01.2雜質(zhì)含量RSD%A含量%與1.0ml/min結(jié)果 差值與相鄰峰分 離度拖尾因子B含量%與1.0

41、ml/min結(jié)果 差值與相鄰峰分 離度拖尾因子C含量%與1.0ml/min結(jié)果 差值與相鄰峰分 離度拖尾因子最大未知 單雜含量%未知總雜含量%總雜含量%4.2.13.3柱溫耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在柱溫25C、30C、35c條件下測(cè)定，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達(dá)到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與 30c測(cè)定數(shù)值相比變化的絕對(duì)值在 M.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。有關(guān)物質(zhì)檢查柱溫耐用性試驗(yàn)結(jié)果表柱溫C253035雜質(zhì)含量RSD%A含量%與30 C 差

42、值與相鄰峰分 離度拖尾因子B含量%與30 C差值與相鄰峰分 離度拖尾因子C含量%與30 C 差值與相鄰峰分 離度拖尾因子最大未知 單雜含量%未知總雜含量%總雜含量%4.2.13.4流動(dòng)相pH值耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在pH值為3.3、3.5、3.7條件下測(cè)定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達(dá)到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含量與pH值3.5測(cè)定數(shù)值相比變化的絕對(duì)值在M.1%以內(nèi)，視為耐用性好，否則為不好。有關(guān)物質(zhì)檢查流動(dòng)相 pH值耐用性試驗(yàn)結(jié)果表PH值3.3

43、3.53.7雜質(zhì)含量RSD%A含量%與 pH3.5差值與相鄰峰分 離度拖尾因子B含量%與 pH3.5差值與相鄰峰分 離度拖尾因子C含量%與 pH3.5差值與相鄰峰分 離度拖尾因子最大未知 單雜含量%未知總雜含量%總雜含量%4.2.13.5流動(dòng)相比例耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.5mg的溶液，作為供試品溶液。分別在流動(dòng)相比例（水相：甲醇：乙睛）750: 200: 20; 800: 160: 16; 850: 120: 12條件下測(cè)定雜質(zhì)含量，各已知雜質(zhì)峰的拖尾因子不大于2.0,各已知雜質(zhì)和相鄰峰應(yīng)達(dá)到基線分離，雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%,雜質(zhì)含

44、量與流動(dòng)相比例800: 160: 16測(cè)定數(shù)值相比變化值在S.1%以內(nèi)視為耐用性好，否則為不好。有關(guān)物質(zhì)檢查流動(dòng)相比例耐用性試驗(yàn)結(jié)果表流動(dòng)相比例750: 200: 20800: 160: 16850: 120: 12雜質(zhì)含量RSD%A含量%與 800: 160: 16差值與相鄰峰分離度拖尾因子B含量%與 800: 160: 16差值與相鄰峰分離度拖尾因子C含量%與 800: 160: 16 差值與相鄰峰分離度拖尾因子最大未知 單雜含量%未知總雜含量%總雜含量%4.2.14耐用性（2）（含量測(cè)定）4.2.14.1溶液穩(wěn)定性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每 1ml約含XX0.2mg的溶液，

45、分別置室溫和4c冰箱放置12h,分別在0、4、8、12h測(cè)定含量，與0h主成分含量比較，各放置時(shí)間含量變化的絕對(duì) 值不大于2.0%,視為溶液穩(wěn)定，否則為不穩(wěn)定。含量測(cè)定溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表放置時(shí)間0h4h8h12h含量與0h含量差的絕對(duì)值%一4.2.14.2流速耐用性精密稱取供試品（xxxxxx ）適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.2mg的溶液，作為供試品溶液。分別在流速0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min條件下測(cè)定含量，主峰的拖尾因子應(yīng)不大于2.0,主峰與相鄰雜質(zhì)峰應(yīng)達(dá)到基線分離，含量數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%視為耐用性好，否則為不好。含量測(cè)定流速耐用性試驗(yàn)結(jié)果表流速(ml/min )0.81.01.2含量數(shù)據(jù)RSD（%）含量（）主峰拖尾因子主峰與相鄰雜質(zhì)峰分離度4.2.14.3柱溫耐用性精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含XX0.2mg的