艾草中黃酮類化合物的提取步驟

1、艾草中黃酮類化合物的提取步驟一、試驗儀器及藥品1試驗儀器：天平、紫外分光光度計、恒溫水浴鍋、小鼠固定器、灌胃器、恒溫干燥 箱、真空抽濾機、毛細(xì)血管、容量瓶、移液管等。2試驗藥品：鹽酸、乙醇、蘆丁標(biāo)品、5%E硝酸鈉溶液、10%S肖酸鋁溶液、1 mol/L氫氧 化鈉溶液、阿司匹林、生理鹽水二、技術(shù)路線技術(shù)路線1:艾草采集一干燥-粉碎一過篩-浸提一趁熱抽濾2次一合并濾 液一冷卻一黃酮類粗品一乙醇重結(jié)晶-冷卻一黃酮類化合物精品技術(shù)路線2:小鼠編號分組一灌胃給藥一毛細(xì)血管靜脈取血一觀察并記錄凝 血時間技術(shù)路線3:小鼠編號分組一灌胃給藥一小鼠斷尾一觀察并記錄凝血時間三、實驗步驟：（一）艾草中黃酮類化合物的

2、提取工藝研究分別以液料比（艾草質(zhì)量：溶劑體積）、浸提溫度、浸提時間 3個方面進行單因素實驗，以黃酮類化 合物的提取率為指標(biāo)，確定單因素的合適范圍，然后做單因素正交實驗，確定 最佳的提取工藝組合。1、艾草中黃酮類化合物粗提取液的制備艾草采集：采取8月中旬的艾草干燥：以風(fēng)干為最佳干燥方法。浸提：準(zhǔn)確稱取1g艾草粉末，加約6倍量已煮沸的蒸儲水，攪拌下加飽和石灰水 調(diào)pH至89,并保持此pH下微沸4050min。合并提取液：在8090C,攪拌下用鹽酸調(diào)pH45,靜止，沉淀完全抽濾，水洗至洗液 呈中性，60c干燥至恒重。乙醇重結(jié)晶：收集干燥得黃酮粗提物，力口 500mL已煮沸的蒸儲水，加熱煮沸20min

3、至溶 液澄清，趁熱過濾，收集濾液，放置充分冷卻，沉淀完全抽濾，水洗至洗液呈 中性，沉淀60 c干燥至恒重。2、黃酮含量測定：(1)制備標(biāo)準(zhǔn)曲線：取干燥恒重蘆丁配成濃度為0." 065 mg/mL標(biāo)溶液，取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液0." 0,2 ." 0,4 ." 0,6 ." 0,8 ." 0,10 ." 0 mL分別置于25 mL容量瓶中，力口 30%乙醇補足至12." 5mL,加5%亞硝酸鈉溶液0." 7mL搖勻，放置5min后，精確加入10%5肖酸鋁溶液0."7mL搖勻，放置5min,精確加入1mol

4、/L氫氧化鈉溶液5 mL,用30%乙醇稀釋 至刻度。以第1容量瓶為空白，于510 nm波長下測定吸光度，以吸光度為坐標(biāo)， 濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，建立回歸方程。(2)黃酮類化合物的測定：取提取液0." 1 mL,置于25 mL容量瓶中，加30%乙醇補足至12." 5 mL加5%硝酸鈉溶液0." 7 mL搖勻，放置5 min后，精確加入10咖肖酸鋁溶液0." 7 mL搖勻，放置5 min,精確加入1 mol/L氫氧化鈉溶液5 mL用30%乙醇稀 釋至刻度。以0." 1氧化鈉溶液5 mL用30%乙醇稀釋至刻度。以0." 1mL 30%

5、乙醇為空白，于510 nm波長下測定吸光度 A,由標(biāo)準(zhǔn)曲線得對應(yīng) 濃度C可算得艾草樣品的總黃酮含量。3、黃酮化合物提取優(yōu)化試驗(1)單因素試驗液料比：80c水浴浸提3h,液料比分別為1:15、"1:20、"1:25 "1:30 "1:35、"1:40條件下提取艾草中黃酮化合物，以黃酮化合物的提取率為指標(biāo)， 研究液料比對黃酮提取效率的影響。選取對黃酮提取率影響較大的范圍，用于 正交試驗。浸提溫度：液料比1:25水浴浸提3h,溫度分別為60C、70C、80C、90C、100c條 件下提取艾草中黃酮類化合物，以黃酮化合物的提取率為指標(biāo)，研究溫度對黃

6、酮提取效率的影響。選取對黃酮提取率影響較大的范圍，用于正交試驗。浸提時間：80c水浴、液料比1:25,時間分別為1h.、1 .“5h、2h、2 .“5h、3h、3 .5h條件下提取艾草中黃酮化合物，以黃酮化合物的提取率為指標(biāo)，研究 液料比對黃酮提取效率的影響。選取對黃酮提取率影響較大的范圍，用于正交 試驗。（2）正交試驗以（1）單因素試驗中的數(shù)據(jù)進行 L9（33）正交試驗。（二）艾草中黃酮類化合物的凝血試驗小鼠分組：將50只2周齡的小鼠隨即分成5組，分別為：空白對照組（生理鹽水0."2mL/10g （體重），陽性對照組（20mg/kg阿司匹林），5."0、0、15."0g/黃酮類化合物組。灌胃給藥：按照步驟所述條件，用針管將生理鹽水、阿司匹林、各濃度黃酮類化合 物注射到小鼠嘴內(nèi)，每天2次，連續(xù)3d。毛細(xì)管靜脈取血：末次給藥1h后，用內(nèi)徑1mm毛細(xì)管插入小鼠內(nèi)齪靜脈叢中取血，血液注 滿毛細(xì)管后輕輕放于桌面。觀察并記錄凝血時間：從血液開始流入毛細(xì)管開始計時，每隔 30s打斷毛細(xì)管，觀察斷裂處有無 凝血絲的出現(xiàn)，一旦出現(xiàn)則說明凝血，停止計時，記錄時間，即為凝血時間。（三）、艾草中黃酮類化合物的出血試驗、于二中的、相同。小鼠斷