飼料中沙門氏菌測定方法確認(rèn)表

1、新項目投入使用審批表項目名稱食品中沙門氏菌的檢測實驗?zāi)康姆椒ù_認(rèn)監(jiān)測方法方法出處GB/T 13091-2002儀器名稱恒溫培養(yǎng)箱規(guī)格型號上海精宏 DNP-9272實驗起止時間上交報告日期項目負(fù)責(zé)人參加人報告起草人日期室主任審核日期技術(shù)負(fù)責(zé)人批準(zhǔn)日期1 實驗記錄(實驗中現(xiàn)象、情況、技術(shù)關(guān)鍵、注意事項)1、 增菌培養(yǎng)：25g樣品+225mlBPW，36培養(yǎng)24h后，取1ml轉(zhuǎn)鐘于10mlTTB、10mlSC、10mlRV內(nèi)，TTB和RV于42培養(yǎng)24h，SC于36培養(yǎng)24h。觀察生長情況：在氯化鎂-孔雀綠增菌液、TTB增菌液和SC增菌液中，飼料的顏色既不是陰性也不是陽性；繼續(xù)做分離培養(yǎng)。 2、分離

2、培養(yǎng)：分別挑取增菌液接種在BS、HE、XLD、沙門顯色培養(yǎng)基和酚紅煌綠培養(yǎng)基上上，36培養(yǎng)24h（BS培養(yǎng)48h）,觀察各平板上菌落生長情況。1）BS：如右圖所示典型菌落為黑色金屬光澤、棕褐色或灰色，菌落周圍培養(yǎng)基可呈黑色或棕色；有些菌株形成灰綠色的菌落，周圍培養(yǎng)基不變。左圖為飼料樣品，在BS培養(yǎng)基上長出疑似沙門氏菌的菌落，需往下繼續(xù)做鑒定實驗。2）HE：如右圖所示典型菌落為藍(lán)綠色或藍(lán)色，多數(shù)菌落中心黑色或幾乎全黑色；有些菌株為黃色，中心黑色或幾乎全黑色。左圖為飼料樣品，在HE培養(yǎng)基上長出大量菌落，但與沙門氏菌的菌落形態(tài)不符合。3）XLD：如右圖菌落所示典型菌落呈粉紅色，帶或不帶黑色中心，有些

3、菌株可呈現(xiàn)大的帶光澤的黑色中心，或呈現(xiàn)全部黑色的菌落；有些菌株為黃色菌落，帶或不帶黑色中心。左圖為飼料樣品，在XLD培養(yǎng)基上長出疑似沙門氏菌的菌落，需往下繼續(xù)做鑒定實驗。4）沙門顯色培養(yǎng)基：如右圖菌落所示典型菌落呈品紅色或紫紅色。左圖為飼料樣品，在沙門顯色培養(yǎng)基上長出綠-藍(lán)綠色的菌落，根據(jù)沙門顯色培養(yǎng)基說明書可知，該菌落很有可能是大腸菌群。5）酚紅煌綠培養(yǎng)基：如右圖菌落所示典型菌落為是粉紅培養(yǎng)基顏色由酚紅變紅。左圖為飼料樣品，在酚紅煌綠培養(yǎng)基上長出黃色的菌落，使培養(yǎng)基顏色由酚紅變黃，說明該菌落很有可能不是沙門氏菌。3、 鑒定實驗：1） 生化鑒定標(biāo)準(zhǔn)菌株：TSI瓊脂上培養(yǎng)24h后，斜面紅色產(chǎn)堿，

4、瓊脂變黑，產(chǎn)生硫化氫；尿素瓊脂上培養(yǎng)24h后，瓊脂不變色，表現(xiàn)為陰性；賴氨酸脫羧酶實驗培養(yǎng)后實驗管為藍(lán)綠色，表現(xiàn)為陽性；靛基質(zhì)實驗加入靛基質(zhì)后顏色未變色，變現(xiàn)為陰性；ONPG實驗培養(yǎng)后試劑為變色，表現(xiàn)為陰性；KCN實驗培養(yǎng)后，對照管和生長管均為生長，表現(xiàn)為陰性；V-P實驗加入V-P試劑后顏色未變色，表現(xiàn)為陰性。飼料在TSI瓊脂上培養(yǎng)24h后，斜面和底部都為黃色產(chǎn)酸；接種在尿素瓊脂上，培養(yǎng)24h后，瓊脂稍微變?yōu)榉奂t色，表現(xiàn)為弱陽性。2） 血清學(xué)鑒定：標(biāo)準(zhǔn)菌株在生理鹽水中無法自凝，在血清中出現(xiàn)自凝現(xiàn)象，表現(xiàn)為陽性。二技術(shù)說明本實驗采用GB/T 4789.4-2010食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)中的微生物生物學(xué)檢驗中的沙門氏菌檢驗，通過增菌、前增菌、分離培養(yǎng)以及生化試驗和血清學(xué)鑒定，最后綜合生化試驗和血清學(xué)鑒定的結(jié)果，報告25g樣品中檢出或未檢出沙門氏菌。三結(jié)論標(biāo)準(zhǔn)菌株生化鑒定結(jié)果TSI尿素瓊脂賴氨酸脫羧酶靛基質(zhì)ONPG實驗KCN實驗V-P實驗斜面紅色，培養(yǎng)基變黑-+-飼料數(shù)據(jù)分析