復(fù)方丹參注射液的質(zhì)量考核研究

1、復(fù)方丹參注射液的質(zhì)量考核研究    摘要復(fù)方丹參注射液為臨床常用藥物，生產(chǎn)廠家眾多。由于歷版藥典均未制定含量測定方法，因此有必要對市售的復(fù)方丹參注射液的內(nèi)在質(zhì)量進行考核。目前，部頒標準(WS3B328998)和國內(nèi)文獻報道的控制本品含量的監(jiān)控成分主要是原兒茶醛。本品主藥丹參的有效成分為脂溶性的二萜醌類和水溶性的酚酸類成分，二者均具有心血管方面的藥理作用。由于注射劑中丹參以水提醇沉淀法提取制備，與以水醇提取制備的復(fù)方丹參口服制劑比較，其主要成分以水溶性成分為主。論文論文參考網(wǎng)由于，近年來研究表明水溶性成分丹參素的擴張心腦血管，抗血小板聚集，清除氧自由基等作

2、用較二萜醌類的丹參酮更強，且水?F性成分是抗心肌缺血的主要成分?？紤]藥典2000版中，以水溶性成分為主的復(fù)方丹參滴九的含量控制是丹參素，因此，本試驗同時對丹參素和原兒茶醛進行了考察?？紤]近年來中藥注射劑的致藥原性疾病不斷上升，在IK6床使用中也觀察到與藥物質(zhì)量相關(guān)的ADE，這可能與中藥制劑的成分復(fù)雜、因制劑工藝等原因造成雜質(zhì)限度超標有關(guān)，因此，同時作了注射劑相關(guān)物質(zhì)檢查。含量測定采用HPLC方法，建立同時測定丹參素、原兒茶醛的色譜條件，方法的線性關(guān)系的相關(guān)系數(shù)分別為0.9997和0.9995；精密度試驗RSD分別為：1.56(n6)和2.33(n6)。加樣回收率平均值分別為99.69和98.5

3、4。本試驗考核了三個廠家八個批號的樣品，對測定結(jié)果分別進行了單因素方差分析，結(jié)果顯示：丹參素和原兒茶醛的含量均有非常顯著性的差異(P0，01)。對C廠家的四個批號進行單因素方差分析，結(jié)果也顯示有非常顯著性的差異(P0.01)。原兒茶醛的含量部按頒標準(WS3B328998)(不得少于0.17mgm)，八個樣品中有三個低于標準，其余均高于標準。不考慮970633批號的樣品，含量(mg.ml-1)最高與最低值比：丹參素為2.07，原兒茶醛為4.64，相差較多，如果按臨床常用劑量1820m1次計算，實際給藥量會有更大的差異，勢必將影響臨床療效。因此，應(yīng)該加強中藥復(fù)方制劑的質(zhì)控方法研究。按藥典2000

4、版進行注射劑相關(guān)物質(zhì)檢查，結(jié)果顯示：鞣酸項存在較大的問題，八個樣品中有6個不達標，其次為蛋白質(zhì)，有一個樣品不達標。中藥注射劑中的這些相關(guān)物質(zhì)，是導(dǎo)致臨床使用中出現(xiàn)藥物不良反應(yīng)的一個不可忽視的原因，因此，應(yīng)該加強中藥注射劑的質(zhì)量控制。關(guān)鍵詞復(fù)方丹參注射液質(zhì)量考核HPLC復(fù)方丹參注射液為臨床常用藥物，生產(chǎn)廠家眾多。由于歷版藥典均未制定含量測定方法，因此有必要對市售的復(fù)方丹參注射液的內(nèi)在質(zhì)量進行考核。目前，部頒標準(WS3-B-3289-98)和國內(nèi)文獻報道的控制本品含量的監(jiān)控成分主要是原兒茶醛，考慮藥典2000版中，以水溶性成分為主的復(fù)方丹參滴丸的含量控制是丹參素，我們制定了考察本品中丹參素和原兒

5、茶醛含量的考核方法，同時作了注射劑相關(guān)物質(zhì)檢查，現(xiàn)將結(jié)果報告如下。1考核樣品來源北京市藥學(xué)會提供的上市藥品質(zhì)量考核品種和本原使用的品種，三個廠家八個品種。規(guī)格有2ml和5m1。2儀器設(shè)備和試劑2.1儀器HPll00高效液相色譜儀：G1311A四元泵，G1322A在線脫氣機，G1313A自動進樣器，G1316A柱溫箱，G1314A可變波長檢測器，HPCHEM色譜工作站。TCQ250超聲波清洗器(北京醫(yī)療設(shè)備二廠)2.2試藥化學(xué)對照品；原兒茶醛(中國藥品生物制品機檢定所)；丹參素(天津天士力制藥集團有限公司提供)；甲醇、乙氰為色譜試劑，其余試劑均未分析純。3方法與結(jié)果3.1色譜條件色譜柱：Hype

6、rsilODS柱(250×4.0mm，5m)；流動相：甲醇：乙氰：1冰醋酸(含0.04IPRB7試劑)為10：2：88；流速：1.0mlmin；檢測波長：280nm；柱溫：40。在此條件下丹參素、原兒茶醛完全分離，且峰型穩(wěn)定。3.2標準曲線制備分別取丹參素鈉和原兒茶醛對照品適量，精密稱取，加甲醇溶解并稀釋制成濃度為每1mI含丹參素和原兒茶醛分別為140g和48g的對照品溶液II。精密吸取對照品溶液II加甲醇稀釋，制成濃度分別為丹參素7，14，28，56，112，140gml，原兒茶醛為2.4，4，8，9.6，19.2，38.4，48.0gm1的標準品，置自動樣器，自動進樣101，進行

7、色譜分析，以峰面積y對進樣濃度C(gm1)回歸，求得回歸方程，線性關(guān)系良好，見表1。表1標準曲線測定結(jié)果成分線性范圍(gm1)回歸方程(n=6)r丹參素0.07-1.40Y=0.711C-1.8610.9997原兒茶醛0.024-0.48Y=5.011C-3.9440.99953.3供試品制備及測定取供試注射液2m1，于50m1棕色容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。置自動樣器，自動進樣10l，測定丹參素和原兒茶醛，結(jié)果見表2。3.4       照藥典2000版進行注射劑相關(guān)物質(zhì)檢查，結(jié)果見表。表2復(fù)方丹參注射液含量測定結(jié)

8、果含量mgm1，x±SD，n3廠家 批號注射劑相關(guān)物質(zhì)檢查含量測定蛋白質(zhì)鞣酸樹脂草酸鹽 丹參素原兒茶醛A981214-+-2.35±0.040.482±0.003B980438-+-3.07±0.030.462±0.009B970632-+-2.14±0.010.567±0.004B970633-+-0.37±0.020.091±0.001C990404-+-3.63±0.010.384±0.002C990615-3.11±0.030.156±0.002C99060

9、5+-2.69±0.020.298±0.001C990606-4.44±0.030.122±0.0023.5精密度試驗取一供試注射液按4.4.3項制備供試品，置自動進樣器中并依法重復(fù)進樣6次，結(jié)果丹參素和原兒茶醛含量的RSD分別為：1.56(n6)和2.33(n6)。3.6回收率試驗取含量測定后一供試注射液溶液lml，三份，分別加入對照液H適量得三個供試品，進樣測定丹參素和原兒茶醛，計算加樣回收率，結(jié)果見表3。表3回收率試驗結(jié)果成分空白含量g對照品加入量g測得總量g回收率平均回收率RSD丹參素0.15580.84000.987799.0499.6g0.8

10、90.15581.05001.190899.340.15581.26001.4248100.71原兒茶醛0.36600.28800.3268100.7698.542.060.36600.36000.389798.080.36600.45200.477096.77論文參考網(wǎng) 4討論 4.1系統(tǒng)適用性試驗分別取對照品溶液、供試品溶液、流動相、復(fù)方丹參滴丸供試液(按藥典處理)、丹參注射液(按復(fù)方丹參注射液制備供試液)，依法處理，置自動進樣器，進樣記錄色譜圖，結(jié)果見附圖。復(fù)方丹參滴丸、丹參注射液與復(fù)方丹參注射液的圖譜基本一致，有丹參素和原兒茶醛陽性峰，由色譜圖可知本試驗條件，樣品中的丹參素和原兒茶醛與

11、其他組分分離完全。理論塔板數(shù)以丹參素計算為6947。 同時考察了藥典復(fù)方丹參滴丸測定丹參素的條件，結(jié)果本測定條件可同時測定供試品中的丹參素和原兒茶醛。 4.2本品主藥丹參的有效成分為脂溶性的二萜醌類和水溶性的酚酸類成分，二者均具有心血管方面的藥理作用。由于注射劑中丹參以水提醇沉淀法提取制備，與以水醇提取制備的復(fù)方丹參口服制劑比較，丹參的主要成分以水溶性成分為主。近年來研究表明水溶性成分丹參素的擴張心腦血管，抗血小板聚集，清除氧自由基等作用較二萜醌類的丹參酮更強，且水溶性成分是抗心肌缺血的主要成分。因此，本試驗同時對丹參素和原兒茶醛進行了考察。 4.3對供試品四種成分的含量分別進行單因素方差分析，結(jié)果顯示：丹參素和原兒茶醛的含量均有非常顯著性的差異(P0.01)。對C廠家的四個批號進行單因素方差分析，結(jié)果也顯示有非常顯著性的差異(P0.01)。原兒茶醛的含量部按頒標準(WS3B328998)(不得少于0，17mgm)，八個樣品中有三個低于標準，其余均高于標準。不考慮970633批號的樣品，含量(mg，mI1)最高與最低值比：丹參素為2.07，原兒茶醛為4。64，相差較多，如果按臨床常用劑量1820m1次計算，實際給藥量會有更大的差異，勢必將影響臨床療效。因此，應(yīng)該加強中藥復(fù)方制劑的質(zhì)控方法研