通腑法開通玄府對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷腦含水量的影響

1、通腑法開通玄府對大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷腦含水量的影響                 作者：胡建芳余志輝汪峰黃培新尤勁松【摘要】  目的研究通腑醒神膠囊（簡稱TFXSJN，下同）通腑法開通玄府對大鼠急性局灶性腦缺血再灌注損傷模型腦含水量的影響。方法采用線栓法制作大鼠大腦中動脈阻塞模型,2h后拔線實(shí)現(xiàn)再灌注損傷，于拔線后1，3 d及7 d不同時間點(diǎn)觀察神經(jīng)功能評分、大鼠腦含水量及腦組織病理的改變。結(jié)果造模后模型組及治療組大鼠的腦含水量

2、在1 d時均明顯升高，與假手術(shù)組及正常組相比有顯著性差異（P0.05），3 d時腦含水量最高，7 d時基本恢復(fù)正常，與假手術(shù)組及正常組相比無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。而治療組在3d時的腦含水量明顯低于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)；而TFXSJN治療后能有效降低模型鼠1，3 d及7 d時的神經(jīng)功能缺損評分；明顯減輕腦組織病理損傷程度。結(jié)論TFXSJN通腑法開通玄府能減輕大鼠急性局灶性腦缺血再灌注損傷的腦含水量，減輕腦組織損傷程度，從而減輕神經(jīng)功能缺損癥狀。 【關(guān)鍵詞】  局灶性腦缺血；缺血再灌注損傷；通腑法/中醫(yī)藥療法；玄府腦水腫是缺血性中風(fēng)早期常見的病理反應(yīng)，其嚴(yán)重程

3、度和持續(xù)時間與腦缺血的預(yù)后有著密切的關(guān)系，嚴(yán)重者可導(dǎo)致顱內(nèi)高壓、腦疝的形成，甚至死亡。對于腦水腫的防治，目前常用的方法主要有脫水、激素、白蛋白等預(yù)防和治療，但會出現(xiàn)水電解質(zhì)平衡紊亂、低血容量、腎功能損害、反跳等一系列并發(fā)癥1。研究認(rèn)為以通腑法為主的治療方法可以減輕腦水腫，起到與脫水藥類似的效果，保護(hù)受損的腦細(xì)胞2，3。為了進(jìn)一步探討通腑法對缺血性腦水腫的治療作用，我們建立了大鼠急性局灶性腦缺血再灌注損傷模型，觀察TFXSJN通腑法對該模型大鼠腦水腫的影響，把通腑法與中醫(yī)的玄府理論相結(jié)合，用玄府理論來闡釋通腑法治療中風(fēng)的實(shí)質(zhì)內(nèi)涵，有助于中風(fēng)病臨床療效的提高和中醫(yī)理論的創(chuàng)新及現(xiàn)代化。1 

4、 材料與方法1  試劑及儀器10水合氯醛。白熾燈、眼科剪、眼科鑷子、手術(shù)剪、直徑0.220.28 mm的漁線、04外科縫線、微動脈夾、微量精密天平儀、烘干箱等。2 藥物通腑醒神膠囊為廣東省中醫(yī)院自制藥劑，由番瀉葉、虎杖、人工牛黃、天竺黃、栝蔞仁等藥物組成。3 動物分組及給藥選用健康雄性SpragueDawley大鼠120只，SPF級，體重250300 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供（動物合格證號：0014930）。120只大鼠隨機(jī)分為正常對照組（n12）、假手術(shù)組（n36）、模型組（n36）、TFXSJN治療組（n36）。TFXSJN按大鼠每日每公斤體重1.5g計(jì)算藥量，按動物

5、系數(shù)折算，相當(dāng)于70 kg成人臨床劑量的3倍，均于術(shù)前一天及術(shù)后麻醉清醒后，每日分兩次灌胃給藥（2 ml）或者蒸餾水2 ml，上、下午各1次。各組動物如有死亡應(yīng)及時補(bǔ)充。4 大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷模型的建立大鼠大腦中動脈閉塞（Middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型制作參照koizumi線栓法4，從右側(cè)頸總動脈（common carotid artery，CCA）進(jìn)線，栓線采用尼龍漁線，長約4 cm，直徑約0.26 mm，術(shù)后2 h拔出線栓約1.5 cm形成缺血再灌注損傷。大鼠術(shù)中及清醒前均給予白熾燈（100W）照射，保持肛溫36左右，室溫25。假手

6、術(shù)組漁線插入CCA深度為0.5cm，其余操作均同手術(shù)組。5 觀察指標(biāo)及檢測方法5.1 腦含水量的測定模型組、TFXSJN組及假手術(shù)組于術(shù)后第1天、第3天、第7天時間點(diǎn)各取6只大鼠，同時取正常大鼠6只做對照，評分后斷頭取腦，去除腦表面的硬脊膜、小腦及腦干部分，立即用微量精密天平稱取腦濕重，然后放置烘箱里，80烘72h至恒重，計(jì)算腦含水量。腦含水量（%）=(濕重-干重)濕重×100。5.2 動物神經(jīng)功能評分參照Zealonga 5分制評分標(biāo)準(zhǔn)。0分：無神經(jīng)系統(tǒng)損傷癥狀；1分：不能完全伸展對側(cè)前爪；2分：向?qū)?cè)轉(zhuǎn)圈；3分：向?qū)?cè)傾倒；4分：不能自發(fā)行走；5分：意識喪失。累計(jì)一分以上即為成功

7、模型。動物清醒后觀察拔線時及再灌注后1，3，7 d時的神經(jīng)功能缺失評分。5.3 腦組織的病理改變各組大鼠于術(shù)后1，3 d及7 d觀察神經(jīng)功能評分后，分別取6只，并取6只正常大鼠作對照，斷頭處死，取腦，去除小腦、腦干，取視交叉為中心水平相當(dāng)于前聯(lián)合水平腦片，置入10中性福爾馬林溶液固定。常規(guī)脫水、透明、浸蠟、包埋、切片5 m厚，HE染色，觀察組織學(xué)變化。6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均錄入SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析。兩樣本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)（方差齊）或t檢驗(yàn)（方差不齊），檢驗(yàn)水平0.05。        

8、2 結(jié)果2.1 各組大鼠腦含水量的比較造模后模型組及TFXSJN組大鼠平均腦含水量在1 d時即明顯升高，與假手術(shù)組及正常組對比，具有明顯差異（P0.05），3 d時的腦含水量最高，7 d時兩組大鼠的腦含水量基本恢復(fù)正常，與假手術(shù)組及正常組相比無明顯差異（P0.05）。而TFXSJN組的腦含水量在3 d時與模型組相比有明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.01），表明TFXSJN治療后可以抑制腦水腫高峰的形成，減少缺血性腦損傷的腦含水量。假手術(shù)組的腦含水量在任何時間點(diǎn)與正常組相比均無明顯差異（P0.05），表明手術(shù)本身對大鼠腦含水量無明顯影響。結(jié)果見表1及圖1。表1  兩組大鼠在不同時間點(diǎn)

9、腦含水量比較（略）2.2 模型組及TFXSJN組大鼠神經(jīng)功能缺損評分的比較根據(jù)評分標(biāo)準(zhǔn)，造模大鼠清醒后予以評分，評分在14分的大鼠為納入對象。結(jié)果表明TFXSJN組及模型組大鼠在拔線時的神經(jīng)功能缺損評分無明顯差異（P0.05），兩組基線齊，具有可比性。而1，3及7 d時TFXSJN組大鼠的神經(jīng)功能缺損評分明顯低于對照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P0.05或P0.01）。表明TFXSJN治療后可以減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的神經(jīng)功能缺損癥狀（見表2）。假手術(shù)組大鼠均未出現(xiàn)明顯神經(jīng)功能缺損癥狀。2.3 各組大鼠腦組織病理改變光鏡下可見假手術(shù)組及正常組大鼠軟腦膜、大腦、脈絡(luò)叢等結(jié)構(gòu)基本正常，細(xì)胞結(jié)構(gòu)正常

10、，未見梗死灶、細(xì)胞及間質(zhì)水腫，未見變性、萎縮，未見炎癥反應(yīng)。模型組左側(cè)大腦半球無明顯異常，右側(cè)大腦可見皮質(zhì)內(nèi)部分血管擴(kuò)張，神經(jīng)元數(shù)量明顯減少，正常的結(jié)構(gòu)消失，神經(jīng)細(xì)胞明顯腫脹，形成空泡，部分細(xì)胞核濃染，細(xì)胞周圍間隙增大，神經(jīng)元中尼氏小體溶解壞死(呈紅紫)，星形膠質(zhì)細(xì)胞腫脹，局灶性泡沫細(xì)胞形成，腦實(shí)質(zhì)內(nèi)有散在的凝固性壞死和部分膠質(zhì)細(xì)胞增生，管周圍亦可見炎性細(xì)胞袖套狀浸潤。而TFXSJN組神經(jīng)元變性程度較輕，神經(jīng)細(xì)胞排列趨于整齊，神經(jīng)纖維輕度腫脹，膠質(zhì)細(xì)胞輕度增生，壞死灶明顯減小，炎癥細(xì)胞浸潤較輕。結(jié)果見圖2。表2  兩組大鼠在不同時點(diǎn)神經(jīng)功能缺損評分比較（略）3 討論 

11、60; 腦梗塞是臨床上常見病、多發(fā)病，其病理機(jī)制十分復(fù)雜，其中腦水腫是腦缺血再灌注過程中的一個重要的病理環(huán)節(jié)，可引起和加重遲發(fā)性神經(jīng)元損傷，影響患者的預(yù)后和功能恢復(fù)，也是導(dǎo)致病情惡化，甚至患者死亡的常見原因。腦水腫早期表現(xiàn)為細(xì)胞毒性水腫，晚期以血管源性水腫為主。而對于腦水腫的治療目前主要使用的藥物有脫水劑、激素、白蛋白或者是外科手術(shù)治療等。臨床常用的脫水藥物如甘露醇等易出現(xiàn)水電解質(zhì)平衡紊亂、低血容量、腎功能損害及停藥后反跳等一系列并發(fā)癥1。研究認(rèn)為通腑法與西醫(yī)脫水療法相當(dāng)，可以減輕腦水腫、減輕腦細(xì)胞損傷等多靶點(diǎn)的治療作用2，3。   玄府學(xué)說是中醫(yī)基本內(nèi)容之一，是中醫(yī)學(xué)關(guān)于

12、臟腑組織結(jié)構(gòu)最微觀的認(rèn)識。劉完素提出：“玄府者，無物不有，人之臟腑、皮毛、肌肉、筋膜、骨髓、爪牙，至于世之萬物，盡皆有之，乃氣出入升降之道路門戶也”。而“玄府郁閉為百病之根”，劉氏指出中風(fēng)病存在玄府閉塞，氣血不通，神機(jī)不遂的病機(jī)。中醫(yī)認(rèn)為水淫腦之玄府、濁毒損腦是中風(fēng)病急性期腦水腫的基本病機(jī)，“水淫玄府”導(dǎo)致玄府開闔通利功能障礙，津液滲灌失常，津停為水，瘀滯玄府，水積成濁而引起的5。而具有“開通玄府、利水解毒”的利開靈(主要由澤瀉、石菖蒲、半邊蓮、桂枝等組成）能有效改善大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血的神經(jīng)功能缺損癥狀及腦水腫的程度，降低不同時點(diǎn)腦血管的通透性、腦組織的含水量6。   對于中

13、風(fēng)病的治療，劉氏強(qiáng)調(diào)宣通玄府，開發(fā)郁結(jié)，指出“或熱甚郁結(jié)不能開通者，法當(dāng)辛苦寒藥下之，熱退結(jié)散而無郁結(jié)也。所謂結(jié)者，怫郁而氣液不能宣通也，非謂大便結(jié)硬也”。可見通腑攻下在于開通“玄府”而不在于攻下燥屎，故運(yùn)用指征不拘于大便之結(jié)硬與否，大多臨床研究證明通腑法是治療中風(fēng)急性期常用的有效的方法。TFSXJN是廣東省中醫(yī)院腦病中心根據(jù)多年的臨床實(shí)踐研制而成的，由番瀉葉、虎杖、人工牛黃、天竺黃、栝蔞仁等藥物組成，以番瀉葉、虎杖為君藥，番瀉葉通腑瀉下，虎杖活血化瘀、化痰解毒，又有瀉下作用，與番瀉葉合用具有協(xié)同之功；人工牛黃、天竺黃熄風(fēng)豁痰、開竅醒神為臣藥；栝蔞仁潤腸化痰，諸藥合用，使壅滯之邪氣得以迅速清瀉

14、，逆亂之氣血得以糾正，共奏通腑醒神、豁痰開竅、開通玄府之功。研究表明TFXSJN應(yīng)用于中風(fēng)病急性期伴有痰熱腑實(shí)癥候患者，經(jīng)多中心臨床驗(yàn)證，臨床療效顯著，并有降低患者并發(fā)癥、致死率、致殘率和提高生活質(zhì)量等作用7。本研究采用TFXSJN開通玄府治療急性局灶性腦缺血再灌注損傷大鼠模型，結(jié)果表明TFXSJN開通玄府法治療后可以明顯減輕模型鼠的腦水腫及神經(jīng)功能缺損評分，減輕腦組織的病理損傷程度，與模型組相比具有顯著性差異（P0.05或P0.01）,對缺血再灌注損傷后腦水腫的形成具有明顯的抑制作用。   本研究以玄府理論為基礎(chǔ)，從微觀的角度、更深的層面上認(rèn)識中風(fēng)后腦水腫，用微觀的或現(xiàn)代

15、醫(yī)學(xué)的方法來認(rèn)識中醫(yī)學(xué)的臨床事件，把中醫(yī)的理論與西醫(yī)微觀的病理機(jī)制相結(jié)合，提出了腦梗死急性期存在水淫玄府、玄府郁閉的病機(jī)演變，在此基礎(chǔ)上確定了通腑法開通玄府的治法，把通腑法與玄府理論相結(jié)合用于中風(fēng)病的治療，擴(kuò)大了通腑法治療中風(fēng)病的適應(yīng)癥，有助于提高中風(fēng)病的臨床療效和中醫(yī)理論的創(chuàng)新，值得進(jìn)一步深入探討?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1江基堯，朱誠，羅其中顱腦創(chuàng)傷臨床救治指南，第2版M第二軍醫(yī)大學(xué)出版社，2003：81，1182張秋菊，王永成，程惠娟，等.通腑健腦液對大鼠顱腦損傷治療作用的實(shí)驗(yàn)研究J.中國中醫(yī)急癥，2004：13（5）：309.3張國享，趙青春瀉下逐瘀湯降低腦梗塞急性期腦水腫臨床觀察J.中國中醫(yī)急癥，2001，10(4)：2374Koizumi J, Yoshida Y, Nakazawa T, et al.Experimental studies of ischemia brain edema. A new experimental model of cere bral embolism infracts in tats in which recircula