乳酸菌的分離純化畢業(yè)設(shè)計1解讀

1、LUOYANG NORMAL UNIVERSITY2015屆畢業(yè)論文乳酸菌的分離純化及抑菌實驗院（系）名稱生命科學(xué)學(xué)院專業(yè)名稱生物技術(shù)學(xué)生姓名勾倩倩學(xué)號111344045指導(dǎo)老師易力副教授完成時間2015年5月7日乳酸菌的分離純化及抑菌實驗勾倩倩生命科學(xué)學(xué)院 生物技術(shù)專業(yè) 學(xué)號：111344045指導(dǎo)教師：易立 副教授摘要：本文對乳酸菌的分離純化，革蘭氏染色以及抑菌實驗進(jìn)行闡述，從市售酸菜中分離純化得到乳酸菌，革蘭氏染色進(jìn)行鑒定，最后進(jìn)行金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的抑菌實驗！實驗主要是分離純化，革蘭氏染色，最后用抑菌實驗比較單菌株的抑菌能力。因為什么，做了什么實驗，得出什么結(jié)論關(guān)鍵詞：乳酸菌：分

2、離純化；革蘭氏染色；抑菌乳酸菌 (LA B ，Lactic acid bacteria)是指能使碳水化合物(主要為葡萄糖)發(fā)酵產(chǎn)生大量乳酸的細(xì)菌的通稱，這類細(xì)菌生長在礦物質(zhì)和有機營養(yǎng)豐富的微酸性環(huán)境中1,2。在自然界中比較常見，用途廣泛，它可以改善食物的風(fēng)味，并延長食品的貨架期，作為保健食品和藥品，可以改善和提高人的健康水平，延年益壽，還可以作為微生物學(xué)和微生態(tài)學(xué)領(lǐng)域研究的模式生物3。酸菜是世界性大眾化蔬菜腌制品,在我國歷史悠久4，其自然發(fā)酵的主要菌群是乳酸菌5。人體在攝人發(fā)酵酸菜時，也同時攝入了大量的乳酸菌體及其代謝產(chǎn)物6。乳酸菌是酸菜發(fā)酵過程中的有益菌，在發(fā)酵速度以及發(fā)酵產(chǎn)品品質(zhì)等方面都起

3、到至關(guān)重要的作用。因此在微生物學(xué)和食品科學(xué)的研究中，對酸菜中乳酸菌進(jìn)行鑒定是必要的7前言內(nèi)容太少，乳酸菌的好處多陳述一些。本實驗從酸菜中分離純化得到6株乳酸菌（1,2,3,4,5,6）， 進(jìn)行革蘭氏染色，為紫色桿狀，最后進(jìn)行抑菌實驗，比較6株乳酸菌的抑菌能力。1 材料與儀器1.1 菌種 乳酸菌1.2 樣品來源市售新鮮酸菜1.3 培養(yǎng)基（1）乳酸菌分離培養(yǎng)基（固體MRS培養(yǎng)基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氫二鉀1g，檸檬酸銨1g，乙酸鈉2.5g，硫酸鎂0.29g，硫酸錳0.125g，吐溫80 0.5 mL，瓊脂8.5g，蒸餾水500mL，pH7.0 （2）乳酸菌純

4、化培養(yǎng)基：MRS培養(yǎng)基+1%的碳酸鈣溶液（碳酸鈣1g，蒸餾水100mL）（3）乳酸菌富集培養(yǎng)培養(yǎng)基（液體MRS培養(yǎng)基）：蛋白胨5g，酵母膏2.5g，牛肉膏5g，葡萄糖10g，磷酸氫二鉀1g，檸檬酸銨1g，乙酸鈉2.5g，硫酸鎂0.29g，硫酸錳0.125g，吐溫80 0.5 mL，蒸餾水500mL，pH7.0（4）抑菌實驗培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g，NaCl 2.5g，瓊脂粉7.5g，水500mL，pH7.21.4 儀器及用具 恒溫培養(yǎng)箱，高壓蒸汽滅菌鍋，超凈工作臺，培養(yǎng)皿，錐形瓶，移液槍，涂布棒，接種針2 方法與過程 方法里的圖片是很常規(guī)的，不用要2.1 酸菜中

5、菌種的分離培養(yǎng)（平板涂布法）吸取湯汁0.1ml，加入9ml無菌水中進(jìn)行100倍稀釋，依次做5個梯度，每個梯度分別取0.2ml涂布于滅好菌MRS培養(yǎng)基中，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，然后用封口膜封住培養(yǎng)皿，平放于試驗臺上20 min，然后倒置于37恒溫箱中培養(yǎng)48h。 2.2 酸菜中菌種的純化培養(yǎng)（平板劃線法）48h無菌條件下，從培養(yǎng)基中挑選不同的菌落，放入1.5ml無菌水中稀釋，用接種環(huán)挑取菌液，用平板劃線法接入含有1%碳酸鈣的MRS培養(yǎng)基，用封口膜密封培養(yǎng)皿，倒置放在37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時。2.3 革蘭氏染色在潔凈的載玻片上加蒸餾水一滴，然后用接種環(huán)分別挑選取少量培養(yǎng)基

6、透明圈中的單菌落與水滴混勻，涂開，而后將此玻片在酒精燈火焰上通過34次，使細(xì)菌固定在載玻片上。然后，加草酸銨結(jié)晶紫液，染12min，水洗并除盡水滴。然后在涂片上滴加碘液，染12min除盡水滴。而后在涂片上，滴加復(fù)紅乙醇溶液，維持1min，水洗，用吸水紙輕輕吸干，最后進(jìn)行油鏡鏡檢。2.4 抑菌實驗首先用打孔器制作藥敏片并高溫滅菌。然后把培養(yǎng)在液體培養(yǎng)基里的乳酸菌倒在滅過菌的培養(yǎng)皿上，做好的藥敏片放在里邊浸泡20分鐘左右，拿出來瀝干（藥敏片仍然是濕的，但是沒有水珠）。其次，倒平板，分別涂布金黃色葡萄球菌和大腸桿菌。最后，每個培養(yǎng)皿放4個藥敏片。用封口膜密封培養(yǎng)皿，倒置放在37恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小

7、時。2.5 保種甘油和乳酸菌菌液1:1放在凍存管中，放在冰箱20保存。3 實驗結(jié)果3.1 分離培養(yǎng)結(jié)果乳酸菌菌落大約1-3 mm，圓形隆起，表面光滑，呈乳白色、灰白色或暗黃色。3.2 純化培養(yǎng)結(jié)果分離純化放在一起，是一個統(tǒng)一的過程，需要看到的是單菌落照片，這幾張照片沒任何體現(xiàn)。3.3 革蘭氏染色結(jié)果 紫色棒狀乳酸菌，證乳酸菌為革蘭氏陽性菌3.4 抑菌實驗結(jié)果 分離得到的6株乳酸菌金黃色葡萄球菌抑菌效果 大腸桿菌抑菌效果4 數(shù)據(jù)分析表1 金黃色葡萄球菌抑菌圈直徑長度分組123456直徑長度 （cm）172219151916141518141816151515101513181413121115平

8、均值（cm）1616.516.2512.7515.7515表2 大腸桿菌抑菌圈直徑長度分組123456直徑長度（cm）15181111141410201512151311161312141310181091014平均值（cm）11.51812.251113.2513.5表3 兩種菌抑菌圈直徑長度平均值比較123456金黃色葡萄球菌抑菌圈平均值(cm)1616.516.2512.7515.7515大腸桿菌抑菌圈平均值(cm)11.51812.251113.2513.5平均值（cm）13.7517.2514.2511.87514.514.25通過表格可以看出抑菌效果有高到低依次排序為：2>5

9、>3=6>1>4對于結(jié)果，要有文字描述，不光是畫一張表5 討論乳酸菌(LAB)及發(fā)酵產(chǎn)物數(shù)千年的利用歷史及無毒副作用的優(yōu)良品質(zhì)使其被認(rèn)為是GRAS(generally recognized as safe 公認(rèn)安全) 菌8。其發(fā)酵產(chǎn)物也是安全物質(zhì)，特別是乳酸菌產(chǎn)生的細(xì)菌素具有光譜抑菌的作用，在將來能夠替代化學(xué)防腐劑保藏食品，故乳酸菌及其發(fā)酵產(chǎn)物在食品工業(yè)上有極好的應(yīng)用前景9。近年來乳酸菌分離成為一個熱門研究方向。 本文從市售酸菜中分離出來6株具有抑菌效果的乳酸菌，在實驗過程中，要注意整個過程無菌操作，防止雜菌污染。乳酸菌需要厭氧環(huán)境，需要用保鮮膜包裹討論部分太少，需要和同類研

10、究做一比較，然后得出你的結(jié)論。參考文獻(xiàn)：1 楊潔彬乳酸菌一生物學(xué)基礎(chǔ)及應(yīng)用 M 北京：中國輕工業(yè)出版社，1996：2352142 劉愛民微生物資源與應(yīng)用 M 南京：東南大學(xué)出版社，2008（6）：19273 張剛?cè)樗峒?xì)菌一基礎(chǔ)、技術(shù)和應(yīng)用M 北京：化學(xué)工業(yè)出版，2006（10）：1291344 趙佳銳，楊虹益生菌降解膽固醇的作用及機理研究進(jìn)展J微生物學(xué)報，2005，3153185 R Martin，N Sober6n，F(xiàn) V 6zquez，eta1La microbiota vaginal：comPosici6n，papel protector，patologia asociada y per

11、spectivas terap6uticas J Enfermedades Infecciosas y M icrobiologia Clinica，2008，26：1601676 燕平梅，薛文通，暢曉暉等自然發(fā)酵和接種發(fā)酵方法對白菜品質(zhì)的影響J農(nóng)業(yè)工程學(xué)報，2008，24(3 )：2862907 孫慶申，王藝，楊麗娟，吳桐，韓德權(quán)，曹相輝，李曉娣等復(fù)合酸菜發(fā)酵劑乳酸菌的優(yōu)選及鑒定J黑龍江大學(xué)工程學(xué)報，2013，4（4）：35408 BURDOCKGA，CARABIN I GGenerally recognized as safe (GRAS)：history and descriptionJ

12、Toxicology letters，2004，150 (1)：3-189 胡美忠，張新卓，劉蕓等貴州銅仁產(chǎn)廣譜抑菌作用細(xì)菌素乳酸菌的篩選及鑒定J銅 仁學(xué)院學(xué)報，2014,16（4）:3236Isolation and purification of lactic acid bacteria and inhibiting bacteria testGou qianqianCollege of life sciences biotechnology professional learning: 111344045Supervisor: Associate Professor Yi LiAbstr

13、act：This article on separation and purification of lactic acid bacteria, Gram staining and bacteriostatic experiment of elaborate, separation and purification of lactic acid bacteria from the Sauerkraut on the market, Gram staining identification, and finally the bacteriostatic test of Staphylococcu

14、s aureus and Escherichia coli! Experiment is to isolate and purify the Gram-staining, and finally with bacteriostatic test compared to the bacteriostatic ability of strain.Key words：Lactic acid bacteria; isolation; purification and Gram staining; bacteriostaticAuthor：Gou qianqianStudent number：111344045Tutor：Yi li 讀書的好處1、行萬里路，讀萬卷書。2、書山有路勤為徑，學(xué)海無涯苦作舟。3、讀書破萬卷，下筆如有神。4、我所學(xué)到的任何有價值的知識都是由自學(xué)中得來的。達(dá)爾文5、少壯不努力，老大徒悲傷。6、黑發(fā)不知勤學(xué)早，白首方悔讀書遲。顏真卿7、寶劍鋒從磨礪出，梅花香自苦寒來。8、讀書要三到：心到、眼到、口到9、玉不琢、不成器，人不學(xué)、不知義。10、