實驗1大腸桿菌的培養(yǎng)與分離

1、 “選修模塊是為了滿足學(xué)生多樣化發(fā)選修模塊是為了滿足學(xué)生多樣化發(fā)展的需要而設(shè)計的，有助于拓展學(xué)生的生展的需要而設(shè)計的，有助于拓展學(xué)生的生物科技視野、增進(jìn)學(xué)生對生物科技與社會物科技視野、增進(jìn)學(xué)生對生物科技與社會關(guān)系的理解、提高學(xué)生的實踐和探究能關(guān)系的理解、提高學(xué)生的實踐和探究能力。力?！?“選修選修 1 生物技術(shù)實踐生物技術(shù)實踐”模塊模塊重在培養(yǎng)學(xué)生設(shè)計實驗、動手操作、重在培養(yǎng)學(xué)生設(shè)計實驗、動手操作、收集證據(jù)等科學(xué)探究的能力，增進(jìn)學(xué)收集證據(jù)等科學(xué)探究的能力，增進(jìn)學(xué)生對生物技術(shù)應(yīng)用的了解。生對生物技術(shù)應(yīng)用的了解。 本模塊適于繼續(xù)學(xué)習(xí)理工類專業(yè)本模塊適于繼續(xù)學(xué)習(xí)理工類專業(yè)或?qū)嶒灢僮鞲信d趣的學(xué)生學(xué)習(xí)

2、?；?qū)嶒灢僮鞲信d趣的學(xué)生學(xué)習(xí)。 生物技術(shù)概述生物技術(shù)概述1-1 1-1 什么是生物技術(shù)什么是生物技術(shù)1-2 1-2 傳統(tǒng)生物技術(shù)傳統(tǒng)生物技術(shù)1-3 1-3 現(xiàn)代生物技術(shù)現(xiàn)代生物技術(shù)1-1什么是生物技術(shù)什么是生物技術(shù)n生物技術(shù)生物技術(shù)= =生物工程生物工程 應(yīng)用自然科學(xué)及工程學(xué)原理，以微生物體、動應(yīng)用自然科學(xué)及工程學(xué)原理，以微生物體、動物體、植物體或其組成部分作為生物反應(yīng)器將物料物體、植物體或其組成部分作為生物反應(yīng)器將物料進(jìn)行加工，以提供產(chǎn)品來為社會服務(wù)的技術(shù)。進(jìn)行加工，以提供產(chǎn)品來為社會服務(wù)的技術(shù)。1-2 傳統(tǒng)生物技術(shù)n傳統(tǒng)傳統(tǒng)生物生物技術(shù)指技術(shù)指主要主要通過通過微生物的微生物的發(fā)發(fā)酵酵來來

3、生生產(chǎn)產(chǎn)商品商品. .如如: :醬、醋、酒、醬、醋、酒、面包、奶酪、酸奶等面包、奶酪、酸奶等1-3 現(xiàn)代生物技術(shù)現(xiàn)代生物技術(shù)n一般而言，現(xiàn)代生物一般而言，現(xiàn)代生物技術(shù)技術(shù)可以分成以下可以分成以下五五種種：n一、一、細(xì)胞工程細(xì)胞工程n二、二、發(fā)酵工程發(fā)酵工程n三、三、蛋白質(zhì)工程蛋白質(zhì)工程n四、四、酶酶工程工程n五、五、基因工程基因工程 一一、細(xì)胞細(xì)胞工程工程 按照人們的需要和科學(xué)設(shè)計改變細(xì)胞的按照人們的需要和科學(xué)設(shè)計改變細(xì)胞的遺傳基礎(chǔ)，并通過細(xì)胞遺傳基礎(chǔ)，并通過細(xì)胞(組織組織)培養(yǎng)，細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞雜交雜交(融合融合)，核移植和胚胎移植等技術(shù)，核移植和胚胎移植等技術(shù)，重組細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和內(nèi)含物，以改變

4、生物的重組細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和內(nèi)含物，以改變生物的結(jié)構(gòu)和功能，快速繁殖和培養(yǎng)出人們所需結(jié)構(gòu)和功能，快速繁殖和培養(yǎng)出人們所需要的新物種的生物工程技術(shù)。要的新物種的生物工程技術(shù)。 細(xì)胞工程包括動物細(xì)胞工程和細(xì)胞工程包括動物細(xì)胞工程和植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程植物細(xì)胞工程: :植物組織培養(yǎng)和植物細(xì)植物組織培養(yǎng)和植物細(xì)胞雜交胞雜交動物細(xì)胞工程動物細(xì)胞工程: :細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合、細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)胞融合、胚胎移植、核移植、胚胎分割、干細(xì)胚胎移植、核移植、胚胎分割、干細(xì)胞等胞等二、發(fā)酵工程二、發(fā)酵工程n微生物的無氧呼吸叫發(fā)酵微生物的無氧呼吸叫發(fā)酵n1.1.定義定義：利用利用DNADNA重組技術(shù)對重組技術(shù)對不

5、同生物的不同生物的遺傳基因遺傳基因，根據(jù)根據(jù)人們的人們的意愿意愿，進(jìn)進(jìn)行基因的行基因的切割、拼接及重新切割、拼接及重新組組合，再合，再轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)入生物入生物體體內(nèi)內(nèi)，產(chǎn)生產(chǎn)生出人出人們們所期望的所期望的產(chǎn)產(chǎn)物或物或創(chuàng)創(chuàng)造出具有造出具有新的新的遺傳特征遺傳特征的的生物類型生物類型。n蛋白質(zhì)工程主要包括蛋白質(zhì)工程主要包括了解合成蛋白質(zhì)了解合成蛋白質(zhì)的的DNADNA編碼編碼序列、序列、蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)的的分離分離純化純化、蛋白質(zhì)的序列分析和蛋白質(zhì)的序列分析和結(jié)構(gòu)功能分析結(jié)構(gòu)功能分析、蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)結(jié)晶和結(jié)構(gòu)力學(xué)分析等結(jié)晶和結(jié)構(gòu)力學(xué)分析等。三三、蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)工程工程n酶酶工程即利用工程即利用基因工程等手段基因工程

6、等手段，改變改變酶或蛋白質(zhì)的折疊方式、空間結(jié)構(gòu)、酶或蛋白質(zhì)的折疊方式、空間結(jié)構(gòu)、催化活性和穩(wěn)定性等催化活性和穩(wěn)定性等四、四、酶酶工程工程五五、基因工程基因工程n1.1.定義定義：又叫又叫DNADNA重組技術(shù)，重組技術(shù)，即即針對針對不同不同生物的生物的遺傳基因遺傳基因，根據(jù)人們根據(jù)人們的的意愿意愿，進(jìn)行進(jìn)行基因的切割、拼接及重新基因的切割、拼接及重新組合組合，再，再轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)入生入生物物體體內(nèi)，內(nèi)，產(chǎn)產(chǎn)生出生出人們?nèi)藗兯谕乃谕漠a(chǎn)產(chǎn)物或物或創(chuàng)造創(chuàng)造出具有新的出具有新的遺傳特征遺傳特征的生物的生物類型類型。n基因工程的條件基因工程的條件（1 1）工具酶）工具酶（2 2）基因的分離）基因的分離（3

7、3）基因的載體）基因的載體（4 4）受體）受體選修選修1需學(xué)習(xí)的實驗需學(xué)習(xí)的實驗n實驗實驗1 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離大腸桿菌的培養(yǎng)和分離n實驗實驗4 果汁中的果膠和果膠酶果汁中的果膠和果膠酶n實驗實驗5 加酶洗衣粉的使用條件很效果加酶洗衣粉的使用條件很效果n實驗實驗6 -淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的檢測n實驗實驗8 果酒及果醋的制作果酒及果醋的制作n實驗實驗10 泡菜的腌制和亞硝酸鹽的測定泡菜的腌制和亞硝酸鹽的測定n實驗實驗11 植物的組織培養(yǎng)植物的組織培養(yǎng)第一部分第一部分 : :微生物的利用微生物的利用一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識1微生物微生物2培養(yǎng)基培養(yǎng)基3無

8、菌技術(shù)無菌技術(shù)二、實驗操作二、實驗操作1操作步驟操作步驟微生物包括哪五類：微生物包括哪五類：真菌真菌原生動植物原生動植物特點：特點：結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單結(jié)構(gòu)都相當(dāng)簡單, ,個體多數(shù)十分微小。個體多數(shù)十分微小。通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，通常要用光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能看到，有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)。有的甚至沒有細(xì)胞結(jié)構(gòu)。 原核生物界原核生物界 原生生物界原生生物界真菌界真菌界病毒界病毒界一基礎(chǔ)知識一基礎(chǔ)知識（一）微生物（一）微生物 1 1、結(jié)構(gòu)：、結(jié)構(gòu)：單細(xì)胞原核單細(xì)胞原核分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）分支狀的菌絲（基內(nèi)菌絲、氣生菌絲）鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、鏈霉素、土霉素、四環(huán)素、氯

9、霉素、紅霉素、慶大霉素氯霉素、紅霉素、慶大霉素 微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中微生物中發(fā)現(xiàn)了幾千種抗生素，其中2/32/3是是由放線菌產(chǎn)生的由放線菌產(chǎn)生的 應(yīng)用應(yīng)用: :2病毒的結(jié)構(gòu)病毒的結(jié)構(gòu)2病毒病毒 SARS病毒、病毒、 禽流感病毒禽流感病毒朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）朊病毒（蛋白質(zhì)病毒）病毒的增殖：病毒的增殖：3真菌真菌如圖是酵母菌電子顯微如圖是酵母菌電子顯微鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)鏡下的形態(tài)結(jié)構(gòu)酵母菌和霉菌酵母菌和霉菌青霉青霉4細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌的外形與大小細(xì)菌：細(xì)菌：單細(xì)胞不分枝的原核微生物單細(xì)胞不分枝的原核微生物。細(xì)菌細(xì)胞細(xì)菌細(xì)胞，通常用適當(dāng)染料，通常用適當(dāng)染料后顯微鏡觀察后顯微鏡觀察圖圖1-1

10、 常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)常見的三種細(xì)菌典型形態(tài)A.球菌球菌 B.桿菌桿菌 C.弧菌弧菌細(xì)菌細(xì)胞由外向里依次有、菌菌（、，。細(xì)菌的構(gòu)造細(xì)菌的構(gòu)造細(xì)胞膜細(xì)胞膜 擬核擬核* *細(xì)胞壁細(xì)胞壁n細(xì)胞壁有哪些功能？細(xì)胞壁有哪些功能？n 傷傷寒寒桿桿菌菌細(xì)細(xì)胞胞壁壁中中含含毒毒素素 有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠體，叫做體，叫做芽孢芽孢。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)。芽孢的壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸境有很強的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3 3小時以后才小時以后才

11、死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水死亡。芽孢又小又輕，可以隨風(fēng)飄散。當(dāng)環(huán)境適宜（如溫度、水分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌分適宜）的時候，芽孢又可以萌發(fā)，形成一個細(xì)菌. .菌落：菌落：n單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖單個或少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定時，就會形成一個肉眼可見的，具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。n菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落是鑒定菌種的重要依據(jù)。菌落細(xì)菌的菌落特征細(xì)菌的菌落特征因種而異因種而異 5細(xì)菌的營養(yǎng)物質(zhì)細(xì)菌的營養(yǎng)物質(zhì) n碳源碳源 n氮源氮源 n水水n無機鹽

12、無機鹽n生長因子生長因子 即細(xì)菌生長必需，而自身即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物不能合成的化合物,如維生素、某些氨如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶基酸、嘌呤、嘧啶6細(xì)菌的營養(yǎng)類型細(xì)菌的營養(yǎng)類型 n根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同根據(jù)細(xì)菌所利用的能源和碳源的不同，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。，將細(xì)菌分為兩大營養(yǎng)類型。n自養(yǎng)菌（自養(yǎng)菌（autotrophautotroph）n異養(yǎng)菌（異養(yǎng)菌（heterotrophheterotroph）n腐生菌腐生菌n寄生菌寄生菌 大部分病原菌大部分病原菌 了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進(jìn)行無了解有關(guān)培養(yǎng)基的基礎(chǔ)知識，進(jìn)行無菌技術(shù)的操作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。菌技術(shù)的操

13、作，進(jìn)行微生物的培養(yǎng)。 一、課題目標(biāo)：一、課題目標(biāo)： 掌握掌握培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基的制備、高壓蒸氣滅菌高壓蒸氣滅菌和和平板劃線法平板劃線法等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范等基本操作技術(shù)，熟練、規(guī)范地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。地進(jìn)行無菌操作，成功地培養(yǎng)微生物。無菌技術(shù)的操作。無菌技術(shù)的操作。二、課題重點和難點：二、課題重點和難點：三、技能目標(biāo)：三、技能目標(biāo)：（二）培養(yǎng)基（二）培養(yǎng)基 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。的，專供微生物生長繁殖使用的混合營養(yǎng)液。（1 1）按）按物理狀態(tài)物理狀態(tài)來分：培養(yǎng)基可分為來分：培養(yǎng)基可分

14、為固體培固體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和和液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基。其中固。其中固體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等，而液體培養(yǎng)基用于菌種分離、鑒定菌落等，而液體培養(yǎng)基一般用于工業(yè)生產(chǎn)。體培養(yǎng)基一般用于工業(yè)生產(chǎn)。（2 2）按）按功能功能來分，可分為來分，可分為選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基和和鑒別鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基。（3 3）按）按化學(xué)成分化學(xué)成分來分，可分為來分，可分為天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基和和合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基。1.1.培養(yǎng)基的類型和用途培養(yǎng)基的類型和用途液體培養(yǎng)基：液體培養(yǎng)基：表面生長表面生長均勻混濁生長均勻混濁生長沉淀生長沉淀生長按按物理狀態(tài)物理狀態(tài)來分來分固體培養(yǎng)基：菌落，菌苔固體培養(yǎng)基：

15、菌落，菌苔按按物理狀態(tài)物理狀態(tài)來分來分半固體培養(yǎng)基：半固體培養(yǎng)基：無動力無動力 有動力有動力( (彌散彌散) )觀察細(xì)菌的運動、厭氧菌的分離和菌種鑒定觀察細(xì)菌的運動、厭氧菌的分離和菌種鑒定 按按物理狀態(tài)物理狀態(tài)來分來分選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基: : 分離酵母菌、霉菌等真菌分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基: : 分離金黃色葡萄球菌分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基不加氮源的無氮培養(yǎng)基: : 分離固氮菌分離固氮菌不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基: : 分離自養(yǎng)型微生物分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基

16、加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基: : 分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞按按功能功能來分來分鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基n伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基伊紅美藍(lán)乳糖培養(yǎng)基按按功能功能來分來分 天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）?？椞崛∫海ㄈ珉u胚和牛胚浸液）。優(yōu)點：優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好缺點：缺點：來源受限來源受限; ;成分復(fù)雜，影響對某成分復(fù)雜，影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析; ;易發(fā)生支原體污染易發(fā)生支原體污染; ;天然培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基：按按化學(xué)成分化學(xué)成分來分來分 根

17、據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。數(shù)量，用人工方法模擬合成的。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。一些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點：優(yōu)點：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定對固定; ;成本低成本低 缺點：缺點： 缺少某些成分，不能完全滿缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長需要。足體外細(xì)胞生長需要。 合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基: :按按化學(xué)成分化學(xué)成分來分來分血清中含有：血清中含有：多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）白

18、、鐵蛋白等）多種金屬離子；多種金屬離子； 激素；激素；促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。冷析球蛋白、膠原等。各種生長因子各種生長因子轉(zhuǎn)移蛋白轉(zhuǎn)移蛋白不明成分不明成分 人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如胞生長和繁殖，還需補充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。血清）。按按化學(xué)成分化學(xué)成分來分來分3.培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)培養(yǎng)基內(nèi)所含的基本物質(zhì)n一般營養(yǎng)物質(zhì)一般營養(yǎng)物質(zhì)(1)水水 (2)碳源碳源 (3)氮源氮源 (4)無機無機鹽鹽n其他物質(zhì)其他物質(zhì) pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、特殊營養(yǎng)物質(zhì)

19、,例如例如:生長因子生長因子(即細(xì)即細(xì)菌生長必需，而自身不能合成的化合物菌生長必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及以及氧氣氧氣、二氧化碳二氧化碳、滲滲透壓透壓等的要求。等的要求。 2. 2.不同的微生物往往需要采用不同不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方的培養(yǎng)基配方 .(2)碳源n可作為碳源的物質(zhì)有可作為碳源的物質(zhì)有:n含碳無機物含碳無機物: 、 、n含碳有機物：含碳有機物：蛋白蛋白質(zhì)質(zhì) 脂肪酸脂肪酸碳酸鹽碳酸鹽碳酸氫鹽碳酸氫鹽糖類（主要）葡萄糖糖類（主要）葡萄糖 乳糖乳糖二氧化碳二氧化碳 不同微生物所利用的碳源不同不同微生物

20、所利用的碳源不同 異養(yǎng)型微生物的碳源為異養(yǎng)型微生物的碳源為 自養(yǎng)型微生物的碳源為自養(yǎng)型微生物的碳源為含碳有機物（有機碳）含碳有機物（有機碳）含碳無機物（無機碳）含碳無機物（無機碳）(3)氮源n可作為氮源的物質(zhì)有可作為氮源的物質(zhì)有:n含氮無機物：含氮無機物： 、 、 、n含氮有機物：含氮有機物：蛋白蛋白胨胨牛肉膏牛肉膏尿素尿素 固氮微生物所利用的氮源是固氮微生物所利用的氮源是氮氣氮氣氨氣氨氣硝酸鹽硝酸鹽氨鹽氨鹽氮氣氮氣3培養(yǎng)基配制原則：培養(yǎng)基配制原則：n營養(yǎng)要協(xié)調(diào)營養(yǎng)要協(xié)調(diào)n目的要明確目的要明確nPH要適宜要適宜1.1.無菌技術(shù)的概念無菌技術(shù)的概念 無菌操作泛指無菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作在培

21、養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。中，所有防止雜菌污染的方法。n（1）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)）對實驗操作空間、操作者的衣著和手進(jìn)行清潔和消毒行清潔和消毒 ；n（2）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具）將培養(yǎng)器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌進(jìn)行滅菌 ；n（3）為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在）為避免周圍微生物污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行；酒精燈火焰附近進(jìn)行；n（4）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品）避免已滅菌處理的材料用具與周圍物品相接觸。相接觸。 從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實驗過程要無菌操作驗過程要無菌操作（）（）消毒定義

22、：消毒定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份利用化學(xué)或物理方法，殺死大部份致病微生物的過程。區(qū)分為致病微生物的過程。區(qū)分為高程度消毒高程度消毒（High-level DisinfectionHigh-level Disinfection）、）、中程度中程度消毒消毒（Intermediate-level Intermediate-level DisinfectionDisinfection）、）、低程度消毒低程度消毒（Low-Low-level Disinfectionlevel Disinfection）三種方式。）三種方式。2.2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別 消毒

23、消毒1 1、煮沸消毒法煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min2 2、巴氏消毒法巴氏消毒法：70-75 70-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min 15min 如牛奶的消毒如牛奶的消毒3 3、化學(xué)藥劑消毒法化學(xué)藥劑消毒法: :用用75%75%酒精、新潔酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒爾滅等進(jìn)行皮膚消毒; ;氯氣消毒水源氯氣消毒水源4 4、紫外線消毒紫外線消毒(2)消毒的方法：消毒的方法：滅菌滅菌概念：使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的概念：使用強烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。微生物，包括芽孢和孢子。方法：方法：a 灼燒滅菌

24、灼燒滅菌 b 干熱滅菌干熱滅菌 c 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 灼燒滅菌灼燒滅菌微生物的接種工具微生物的接種工具 (接接種環(huán)、接種針種環(huán)、接種針)或其或其他金屬用具直接在火他金屬用具直接在火焰的充分燃燒層灼燒焰的充分燃燒層灼燒注意適用范圍注意適用范圍 干熱滅菌干熱滅菌 160170 ；12h能耐高溫的需要保持干能耐高溫的需要保持干燥的物品燥的物品( 玻璃器皿玻璃器皿) 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌 100kPa 121 15-30min通常用于培養(yǎng)基的滅菌通常用于培養(yǎng)基的滅菌 最常用的滅菌方法是最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌，它可以，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休殺滅所

25、有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被眠體，同時可以基本保持培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分不被破壞。破壞。 有些玻璃器皿也可采用有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌高溫干熱滅菌。為了。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過可讓空氣通過，而空氣中的其他微生物不能通過。 而培養(yǎng)皿是由正反兩平面板互扣而成，這種而培養(yǎng)皿是由

26、正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計的。 大腸桿菌的培養(yǎng)和分離菌種保存菌種保存培養(yǎng)基的培養(yǎng)基的配制配制滅菌滅菌超凈工件臺超凈工件臺倒平板倒平板接種液體接種液體培養(yǎng)培養(yǎng)劃線分離劃線分離培養(yǎng)培養(yǎng)1 1、器具的滅菌、器具的滅菌2 2、培養(yǎng)基的配制、培養(yǎng)基的配制3 3、培養(yǎng)基的滅菌、培養(yǎng)基的滅菌4 4、倒平板、倒平板5 5、微生物接種、微生物接種6 6、恒溫箱中培養(yǎng)、恒溫箱中培養(yǎng)7 7、菌種的保存、菌種的保存1.1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？被其他外來微

27、生物污染外，還有什么目的？2.2.請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅請你判斷以下材料或用具是否需要消毒或滅菌。如果需要，請選擇合適的方法。菌。如果需要，請選擇合適的方法。（1 1） 培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿培養(yǎng)細(xì)菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿（2 2） 玻棒、試管、燒瓶和吸管玻棒、試管、燒瓶和吸管（3 3） 實驗操作者的雙手實驗操作者的雙手 答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。身被微生物感染。答：（答：（1）、（）、（2）需要滅菌；（）需要滅菌；（3）需要消毒）需要消毒。二、實驗操作n1制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基n2純化大腸桿菌

28、純化大腸桿菌n3將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培將接種后的培養(yǎng)基和一個未接種的培養(yǎng)基放入養(yǎng)基放入37恒溫箱中培養(yǎng)恒溫箱中培養(yǎng)12h和和24h后，觀察并記錄后，觀察并記錄二、實驗操作二、實驗操作 1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細(xì)菌）1 1計算、稱量計算、稱量2 2溶化溶化3 3調(diào)調(diào)pHpH：pH7pH76 64 4過濾過濾：這一步可以省去。：這一步可以省去。5 5分裝分裝：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)：分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分裝三角燒瓶的量以不超過引起污染。分裝三角燒瓶的量以不

29、超過三角燒瓶容積的一半為宜。三角燒瓶容積的一半為宜。6 6加塞加塞7 7包扎包扎操作步驟操作步驟 8 8滅菌滅菌: : 將將5050mlml培養(yǎng)基培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為鍋，在壓力為100100kPakPa、溫度為溫度為121121，滅菌，滅菌15153030minmin。將將培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在熱滅菌箱內(nèi)，在160160170 170 下滅菌下滅菌2 2h h。 9 9倒平板倒平板: : 待培養(yǎng)基冷卻到待培養(yǎng)基冷卻到50

30、50 左右時，在酒精燈附左右時，在酒精燈附近倒平板。近倒平板。2 2d d后觀察平板，無雜菌污染才可用后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種來接種. . 10 10無菌檢查無菌檢查： 將滅菌的培養(yǎng)基放入將滅菌的培養(yǎng)基放入3737的溫室中培的溫室中培養(yǎng)養(yǎng)24482448小時，以檢查滅菌是否徹底。小時，以檢查滅菌是否徹底。 1. 1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50 50 左右左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？基的溫度？ 答：答：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙

31、手瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。時，就可以進(jìn)行倒平板了。2.2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？ 答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。生物污染培養(yǎng)基。3.3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？平板冷凝后，為什么要將平板倒置？4.4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？培養(yǎng)微生物嗎？為什么？ 答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固答：平板冷凝后，皿蓋上會

32、凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。 答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。培養(yǎng)微生物。2 2、純化大腸桿菌、純化大腸桿菌接種方法有：接種方法有：劃線分離法和涂布分離法劃線分離法和涂布分離法劃線分離法劃線分離法: :通過接種環(huán)在瓊脂固體培通過接種環(huán)在瓊

33、脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作養(yǎng)基表面連續(xù)畫線的操作, ,將聚集的菌將聚集的菌鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面鐘逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面. . 在數(shù)次畫線后在數(shù)次畫線后, ,可以分離到由一個細(xì)可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體, ,這就是菌落這就是菌落. . 1.1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？ 答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可

34、能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。感染

35、操作者。 2.2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。 3.3.在作第二次以及其后的劃線操作時，在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？ 答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來逐步減少，

36、最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。的菌落。涂布分離法涂布分離法 純種的菌種稀釋一般采取最簡單常規(guī)的稀純種的菌種稀釋一般采取最簡單常規(guī)的稀釋涂布平板法。釋涂布平板法。 將菌種用接種環(huán)蘸取，放入培養(yǎng)液內(nèi)進(jìn)行將菌種用接種環(huán)蘸取，放入培養(yǎng)液內(nèi)進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)即可。培養(yǎng)即可。 涂布分離法涂布分離法n(1)系列稀釋操作:四、課題成果評價四、課題成果評價 （一）培養(yǎng)基的制作是否合格（一）培養(yǎng)基的制作是否合格 如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫

37、箱中保溫1 12 d2 d后無后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。制備。 （二）接種操作是否符合無菌要求（二）接種操作是否符合無菌要求 如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基如果培養(yǎng)基上生長的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點，則說明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說明接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，接種過程中，無菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。再次練習(xí)。

38、（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄（三）是否進(jìn)行了及時細(xì)致的觀察與記錄 培養(yǎng)培養(yǎng)12 h12 h與與24 h24 h后的大腸桿菌菌落的大小會有明后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察顯不同，及時觀察記錄的同學(xué)會發(fā)現(xiàn)這一點，并能觀察到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生到其他一些細(xì)微的變化。這一步的要求主要是培養(yǎng)學(xué)生良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。良好的科學(xué)態(tài)度與習(xí)慣。【典例解析典例解析】 例例1 1關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是關(guān)微生物營養(yǎng)物質(zhì)的敘述中，正確的是A.A.是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源是碳源的物質(zhì)不可能同時是氮源 B.B.凡碳源都提供能量凡碳源都提供能量C.C.除水以外的無機物只提供無機鹽除水以外的無機物只提供無機鹽 D.D.無機氮源也能提供能量無機氮源也能提供能量 解析：解析：不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有較大差別，要不同的微生物，所需營養(yǎng)物質(zhì)有