全自動(dòng)生化儀使用中的問題探討(一)

1、全自動(dòng)生化儀使用中的問題探討(一)關(guān)鍵詞全自動(dòng)；生化儀；使用中的問題自動(dòng)生化分析儀是一種把生化分析中的取樣、加試劑、去干擾、混合、恒溫、反應(yīng)、檢測、結(jié)果處理以及清洗等過程中的部分或全部步驟進(jìn)行自動(dòng)化操作的儀器，它完全模仿并代替了手工操作，已成為大中型實(shí)驗(yàn)室不可缺少的儀器1。全自動(dòng)生化儀是科技進(jìn)步的時(shí)代產(chǎn)物， 它以其高精度、 高速度、高質(zhì)量等優(yōu)秀品質(zhì)得到了廣泛運(yùn)用，但在使用過程中由于使用者缺乏正確的認(rèn)識(shí)，往往將其視為百分之百的完美，但任何一臺(tái)自動(dòng)化儀器都是在人們的設(shè)計(jì)和指令下工作的，只有當(dāng)使用者給它提供了正確的指令和條件，并隨時(shí)監(jiān)控其工作狀態(tài)，才有可能圓滿地完成使用者提供的任務(wù)。日立 7020、

2、7080 全自動(dòng)生化分析儀在我院檢驗(yàn)科發(fā)揮著重要作用，它大大提高了工作效率，降低了實(shí)驗(yàn)室的勞動(dòng)強(qiáng)度，其準(zhǔn)確性和重復(fù)性是得到了廣泛認(rèn)可的，但不少人在認(rèn)識(shí)上卻出現(xiàn)了偏差，認(rèn)為既然是全自動(dòng)生化分析儀，我們只要將標(biāo)本和試劑放入儀器，輸入標(biāo)本檢測信息， 點(diǎn)一下 “開始 ”就只等打印報(bào)告， 如果抱有這種觀點(diǎn)的人操作自動(dòng)生化分析儀，也許這臺(tái)全自動(dòng)生化分析儀就可能是一堆廢鐵，更可怕的是它有可能成為誤導(dǎo)臨床醫(yī)生作出錯(cuò)誤診斷和治療的罪魁禍?zhǔn)住槭裁催@樣說，是因?yàn)橐环矫嫒詣?dòng)生化儀的分析報(bào)告在醫(yī)生看來是高度可信的，但事實(shí)上全自動(dòng)生化儀在使用過程中存在著大量的可能影響報(bào)告質(zhì)量的問題，這些問題是要在平時(shí)的工作中不斷觀察

3、、總結(jié)和分析才能解決和克服的。影響質(zhì)量的因素主要在以下幾方面：儀器的參數(shù)設(shè)置、 校準(zhǔn)、質(zhì)控、試劑 (方法學(xué)、穩(wěn)定性、批間差等 )、供水水質(zhì)、儀器的日常維護(hù)和保養(yǎng)樣品的采集、抗凝、離心、報(bào)告前結(jié)果的審核包括樣品異常(黃疸、溶血、脂血、水樣等 )提示。經(jīng)過多年的實(shí)踐、操作和觀察，發(fā)現(xiàn)我院全自動(dòng)生化分析儀在使用中存在許多影響質(zhì)量的問題，現(xiàn)將有關(guān)問題提出來與大家共同交流。1 全自動(dòng)生化儀的參數(shù)設(shè)置問題我院先后購買了2 臺(tái)全自動(dòng)生化分析儀分別為HITACHI7020 和HITACHI7080，使用的試劑是四川邁克的專用包裝，但在多年的使用中發(fā)現(xiàn)該試劑的參數(shù)變更頻繁且常不向使用者們通告，導(dǎo)致發(fā)生許多方面的

4、質(zhì)量問題。仔細(xì)查閱邁克的項(xiàng)目參數(shù)手冊(cè)發(fā)現(xiàn)，其中不少參數(shù)與儀器上使用的參數(shù)不一致， 與每一盒試劑盒內(nèi)說明書的參數(shù)也不一致。1.1ALT、AST、AKP、GGT等項(xiàng)目的測光點(diǎn)，試劑商提供的專用參數(shù)手冊(cè)上的內(nèi)容與儀器上實(shí)際設(shè)置的內(nèi)容多處不同，讓人對(duì)試劑生產(chǎn)廠家的嚴(yán)謹(jǐn)性和該產(chǎn)品的成熟性產(chǎn)生懷疑，建議廠家注意參數(shù)手冊(cè)和試劑盒內(nèi)說明書參數(shù)的一致性。1.2ALB 的測定波長操作手冊(cè)和儀器上設(shè)置為600nm，但試劑盒說明書為 628nm，全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程第二版為 630nm 2；Mg 的測定波長操作手冊(cè)為 570nm，試劑盒為 582nm，儀器上設(shè)置為 600nm，這種企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的自身不統(tǒng)一和與國家標(biāo)準(zhǔn)的不

5、統(tǒng)一讓使用者不能理解。1.3TBIL、DBIL的說明書中樣品 / 試劑為 1/35，即當(dāng)樣品為 6l時(shí)，R1 試劑應(yīng)為 168l，R2 試劑應(yīng)為 42l，但儀器上卻設(shè)為 1/31(R1 為 148l，R2 為 42，l)樣品 / 試劑的比值改變將直接影響到某項(xiàng)目的線性范圍，且常有部分試劑嚴(yán)重過剩。提醒大家不要忘了審查儀器安裝時(shí)商家提供的參數(shù)。1.4DBIL的操作手冊(cè)上的主波長為450nm，副波長為 546nm；儀器上卻設(shè)為主波長 405nm，副波長 546nm。1.5ASO、RF 試劑方法學(xué)由原來的兩點(diǎn)速率法改為兩點(diǎn)終點(diǎn)法后，未給用戶任何提示，用戶在使用中發(fā)現(xiàn)ASO和 RF兩個(gè)項(xiàng)目經(jīng)常出現(xiàn)分析

6、失敗提示，經(jīng)仔細(xì)核查其說明書參數(shù)和儀器的工作參數(shù)才發(fā)現(xiàn)。1.6Ca、Mg 的分析方法操作手冊(cè)為一點(diǎn)終點(diǎn)法，儀器的工作參數(shù)為兩點(diǎn)終點(diǎn)法。1.7 樣品 / 試劑比值的變更直接關(guān)系到該項(xiàng)目的檢測線性范圍，在工作中發(fā)現(xiàn) CK、AMY 經(jīng)常超出線性范圍， 如果將樣品 / 試劑的比值分別由原來的 1/25 和 1/50 改為 1/50 和 1/75 ，經(jīng)復(fù)合校準(zhǔn)品校準(zhǔn)后，在日常的工作中能得到更寬的線性范圍，實(shí)踐證明是可行的。在日常工作中發(fā)現(xiàn)正常人的DBIL 往往出現(xiàn)負(fù)值或偏低，經(jīng)查發(fā)現(xiàn)一個(gè)DBIL 為4.24 mmol/L的樣品在測量過程中用于計(jì)算其值的單位時(shí)間吸光度變化值僅為 0.0004，任何一點(diǎn)干擾

7、均可以影響該結(jié)果，建議將DBIL的樣品/ 試劑由原來的 1/35 改為 1/25 ，雖然該方法的線性范圍變小，但直膽大于 500mmol/L樣品可以通過稀釋后再測定得到解決。2 全自動(dòng)生化儀的校準(zhǔn)問題2.1 任何一臺(tái)全自動(dòng)生化分析儀的工作中測定的每一個(gè)項(xiàng)目都離不開一個(gè)或多個(gè)已知其含量的參照物(我院除外 )，這一參照物就是我們?nèi)粘９ぷ髦惺褂玫男?zhǔn)品。我科使用的是羅氏復(fù)合校準(zhǔn)品，干粉狀態(tài) 2 8可保存至有效期，稀釋后立即分裝成200l300l存放在-20環(huán)境下，可使用至有效期，但在使用中發(fā)現(xiàn)了幾次因?yàn)槿藶橐蛩貙?dǎo)致用其校準(zhǔn)的系數(shù)測得的樣品嚴(yán)重偏離了正常人均值，將該校準(zhǔn)品當(dāng)樣品測量后發(fā)現(xiàn)多項(xiàng)目偏離了其

8、靶值的 20%以上，經(jīng)查明原來該校準(zhǔn)品的保存中存在問題 (多次反復(fù)凍融，并在室溫下多次開蓋檢測，TBIL和 DBIL下降顯著，部分項(xiàng)目因多次暴露，水分蒸發(fā)導(dǎo)致結(jié)果增高 )，但另一次Mg 的校準(zhǔn)值偏離太大應(yīng)引起操作人員的重視，羅氏校準(zhǔn)品(批號(hào) 169826)復(fù)溶后即時(shí)分裝， 1 周后，用其中一份當(dāng)樣品測定校準(zhǔn)的所有項(xiàng)目后發(fā)現(xiàn)其他項(xiàng)目正常而Mg 為 0.21mmol/L(靶值：1.12mmol/L)，后用 5 份測定發(fā)現(xiàn) Mg 的批內(nèi)變異率均值 >25%。經(jīng)多次校準(zhǔn)后再反測發(fā)現(xiàn) Mg 的重復(fù)性存在嚴(yán)重問題， 經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)： 試劑的穩(wěn)定性存在嚴(yán)重問題，質(zhì)控的實(shí)測值逐漸下降，每天校準(zhǔn)都不能讓校

9、準(zhǔn)品的回測值接近靶值的95%，開瓶30d 的試劑空白吸光度值就大于或接近了0.850。我院 HITACHI7080自動(dòng)生化分析儀使用的四川邁克液體雙試劑(MTB 法)批號(hào) 0905051，有效期至 2006 年 10 月 20 日，其方法為終點(diǎn)法，樣品 / 試劑為 1/60，主波長 582nm，反應(yīng)溫度 37，反應(yīng)時(shí)間 10min，用靶值為 1.12mmol/L 的羅氏校準(zhǔn)品剛校準(zhǔn)后即用該同一管校準(zhǔn)品作為樣品檢測，測得5 次均值為 1.41mmol/L(偏高 25.89%)，經(jīng)查閱儀器上Mg 校準(zhǔn)后的 K 系數(shù)為 8421，1.12/8421 得 Mg 的單位時(shí)間內(nèi)計(jì)算吸光度變化值僅為 0.0

10、00133，是 7080 生化項(xiàng)目中最小的。作者認(rèn)為太小的吸光度變化是導(dǎo)致該項(xiàng)目重復(fù)性太差的根本原因，通過增大樣品 / 試劑的比值來提高吸光度變化值，提高樣品吸光度變化值與儀器本身吸光度變化值的比值，減小因儀器系統(tǒng)誤差導(dǎo)致的吸光度改變對(duì)樣品測量的重復(fù)性的影響，但事實(shí)上因?yàn)樵噭┳陨淼牟环€(wěn)定導(dǎo)致的吸光度變化值下降到接近儀器因系統(tǒng)誤差所產(chǎn)生的吸光度變化值時(shí)，通過增大樣品/ 試劑的比值來提高某項(xiàng)目的重復(fù)性是不能解決問題的。 Mg 更換新試劑后，再校準(zhǔn)，再將該校準(zhǔn)品當(dāng)樣品測定， 當(dāng)天其 CV值能控制在 5% 以內(nèi)，與試劑供應(yīng)商聯(lián)系得知 Mg 試劑的穩(wěn)定性存在嚴(yán)重問題， 是其方法學(xué)存在缺陷，建議我院在 M

11、g 試劑不用時(shí)即時(shí)將其密閉并閉光保存在2 8環(huán)境下，并經(jīng)常校準(zhǔn)可得到克服。實(shí)踐證明，以上建議讓 Mg 試劑的穩(wěn)定性能得到較短時(shí)間內(nèi)的穩(wěn)定， 但給工作帶來了不少的麻煩。 2.2 校準(zhǔn)不要輕易進(jìn)行當(dāng)質(zhì)控出現(xiàn)失控時(shí)， 不要草率決定立即進(jìn)行校準(zhǔn)，因?yàn)閷?dǎo)致質(zhì)控失控的原因是多方面的，包括質(zhì)控品批號(hào)出錯(cuò)，質(zhì)控品過夜吸水稀釋 (HITACHI7080在夏天時(shí)，其質(zhì)控樣品室內(nèi)常有較多的冷凝水滴入質(zhì)控樣品杯中，導(dǎo)致質(zhì)控項(xiàng)目測定值全部下降)、水分蒸發(fā)濃縮(HITACHI7020的質(zhì)控品位于樣品盤中， 溫度是室溫，質(zhì)控品放置過夜 )、見光分解 (TBIL、DBIL)和試劑更換出錯(cuò)或添加試劑出錯(cuò)。作者常將校準(zhǔn)品當(dāng)樣品測

12、定，如果其值基本上與靶值一致，可以排除試劑、供水水質(zhì)和儀器的問題，只有在質(zhì)控上找原因，反之，我們可以重新開一瓶新的校準(zhǔn)品，用其作為樣品來測量，一方面可以了解校準(zhǔn)品的穩(wěn)定性和使用者稀釋操作是否很精確，實(shí)踐證明羅氏校準(zhǔn)品在其有效期內(nèi)，用電阻值大于5 兆歐的純凈水復(fù)溶后立即分裝并密閉存放在環(huán)境下是十分穩(wěn)定的。如果出現(xiàn)了個(gè)別項(xiàng)目偏差太大，建議更換新試劑后再測定校準(zhǔn)品；如果結(jié)果不理想，請(qǐng)查儀器分析參數(shù)是否被改動(dòng)；如果分析參數(shù)正常，可能是試劑的批間差太大，建儀即時(shí)校準(zhǔn)。2.3 校準(zhǔn)品不得反復(fù)凍融因?yàn)樵诜磸?fù)的凍融過程中難免影響其值的穩(wěn)定， TBIL、DBIL可能因見光而下降，部分項(xiàng)目可能因水分蒸發(fā)而升高。2

13、.4 校準(zhǔn)品復(fù)溶時(shí)水質(zhì)問題不容忽視我院曾因水的電阻值接近1 兆歐時(shí)出現(xiàn)多項(xiàng)目不穩(wěn)定，每天校準(zhǔn)均不能解決重復(fù)性問題。因此水質(zhì)對(duì)檢測結(jié)果的影響一定要引起大家的重視，一些單位領(lǐng)導(dǎo)不知道水電阻值對(duì)生化檢驗(yàn)的重要性，一味地強(qiáng)調(diào)節(jié)約，結(jié)果導(dǎo)致大量試劑因水質(zhì)太差而被污染，損失遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于水機(jī)消耗品更換的開支，由于水質(zhì)問題產(chǎn)生了大量的報(bào)告質(zhì)量問題，是值得我們反思的。2.5 光源光度計(jì)檢測當(dāng)每天開機(jī)時(shí)的光度計(jì)檢測值大于規(guī)定值或光度計(jì)檢測值出現(xiàn)明顯的負(fù)增長時(shí)，請(qǐng)立即更換新的光源燈，否則測定結(jié)果將出現(xiàn)非常嚴(yán)重的質(zhì)量問題，這一點(diǎn)也是我們?cè)?jīng)親身體驗(yàn)過的失敗，如果想通過校準(zhǔn)來克服光源不穩(wěn)定帶來的影響，將會(huì)使您的工作質(zhì)量變得

14、一塌糊涂。3 自動(dòng)生化儀的質(zhì)控問題質(zhì)控分為室內(nèi)質(zhì)控和室間質(zhì)控。室間質(zhì)控主要目的是了解不同實(shí)驗(yàn)室在對(duì)同一樣品的測量是否產(chǎn)生一致的結(jié)果，來了解不同室驗(yàn)室在儀器的參數(shù)設(shè)置、校準(zhǔn)、保養(yǎng)、操作、試劑的保存、試劑的質(zhì)量等方面是否存在問題。 室內(nèi)質(zhì)量控制是各實(shí)驗(yàn)室為了監(jiān)測和評(píng)價(jià)本室工作質(zhì)量，以決定常規(guī)檢驗(yàn)報(bào)告能否發(fā)出所采取的一系列檢查、控制手段，旨在檢測和控制本室常規(guī)工作的精密度，并檢測其準(zhǔn)確度的改變，提高本室常規(guī)工作中批間和日間標(biāo)本檢測的一致性3。我院檢驗(yàn)科在質(zhì)控方面也發(fā)現(xiàn)了不少問題。3.1 質(zhì)控品靶值偏離的問題我院檢驗(yàn)科一直使用四川邁克公司生產(chǎn)的復(fù)合液體生化質(zhì)控品， 在使用過程中多次發(fā)現(xiàn)其靶值存在一定的

15、問題，主要表現(xiàn)在一盒新的質(zhì)控品剛開始使用就發(fā)現(xiàn)部分項(xiàng)目值與商家提供的靶值和范圍值嚴(yán)重偏離，這一問題的原因也許是由于質(zhì)控品出廠前定值、保存條件、運(yùn)輸條件、測定條件等原因造成的。作者在校準(zhǔn)和試劑質(zhì)量得到保證的前提下將出現(xiàn)以上情況的質(zhì)控品每一支作多次檢測，一是觀察每一支之間值的差異是否可以接受，如果每一支之間值的差異可以接受，就注意測定每一個(gè)項(xiàng)目多次測定的均值是否接近其質(zhì)控品的靶值，如果明顯偏離了其靶值，作者認(rèn)為以本室測定的均值作為質(zhì)控的靶值更為客觀。3.2 質(zhì)控品不穩(wěn)定的問題質(zhì)控品不穩(wěn)定的問題部分是可以克服的，但如果是由于質(zhì)控品本身的問題就很難克服。作者在前面已經(jīng)談到，質(zhì)控品過夜吸水稀釋 (HIT

16、ACHI7080在夏天時(shí)，其質(zhì)控樣品室內(nèi)常有較多的冷凝水滴入質(zhì)控樣品杯中，導(dǎo)致質(zhì)控項(xiàng)目測定值全部下降)、水分蒸發(fā)濃縮(HITACHI7020的質(zhì)控品位于樣品盤中， 溫度是室溫，質(zhì)控品放置過夜 )、見光分解 (TBIL、DBIL)是可以得到克服的：做到保存溫度為；每天開機(jī)前先將質(zhì)控品混勻取樣，每天必須更換；取樣后即時(shí)將質(zhì)控品放回低溫閉光環(huán)境中。如果是由于質(zhì)控品個(gè)別批號(hào)的質(zhì)量存在問題，我們可以通過更換新批號(hào)的質(zhì)控品來克服；如果多批號(hào)質(zhì)量存在問題，建議更換更優(yōu)質(zhì)的質(zhì)控產(chǎn)品。3.3 由于試劑的質(zhì)量問題導(dǎo)致質(zhì)控結(jié)果的不穩(wěn)定，作者主張更換其他廠家的試劑或干脆取消該項(xiàng)目的檢測和質(zhì)控，以免影響其他項(xiàng)目的質(zhì)控工

17、作。例如我院 Mg 的生化測定長期存在質(zhì)量問題，被迫停止了該項(xiàng)目的檢測。4 全自動(dòng)生化儀的試劑問題我院多年來主要使用四川邁克生產(chǎn)的HITACHI7020、7080 專用包裝的液體雙試劑和少量單試劑，經(jīng)與日本一化、德國豪邁部分生化試劑作對(duì)比后發(fā)現(xiàn)國產(chǎn)試劑在方法學(xué)、 穩(wěn)定性、去干擾、批間差存很大的差距，經(jīng)常變更試劑的多種參數(shù)而不向用戶提示由此而產(chǎn)生的質(zhì)量問題不容忽視。4.1ASO、RF 的方法學(xué)由原來的速率法改為終點(diǎn)法，未得到試劑廠家的任何提示，直到多次儀器分析出現(xiàn)報(bào)警后才發(fā)現(xiàn)這一內(nèi)容的變更。4.2 四川邁克試劑AMY的底物為，而德國豪邁試劑AMY的底物為，在使用過程發(fā)現(xiàn)后者在穩(wěn)定性和線性范圍方面明顯優(yōu)于前者， 前面提及的 Mg 試