HIV測定ELISA法珠海麗珠第二人民醫(yī)院

1、HIV 測定 ELISA 法珠海麗珠）1、檢驗(yàn)?zāi)康膽?yīng)用雙抗原夾心酶聯(lián)免疫法原理（ELISA）定性檢測人血清、血漿標(biāo)本中的HIV（1+2）型抗體的測定，用于HIV 感染的輔助診斷，抗HIV 藥物治療的效果的監(jiān)測。2、原理采用夾心 ELISA 方法檢測血清或血漿標(biāo)本中人類免疫缺陷病毒HIV（1+2）型抗體，預(yù)包被高純度基因重組 HIV（1+2）型抗原，可與標(biāo)本中的抗 -HIV 抗體反應(yīng)，加入 HRP標(biāo)記 HIV（1+2）型抗體抗原結(jié)合，形成抗原抗體酶標(biāo)抗原復(fù)合物，然后加入 TMB底物產(chǎn)生顯色反應(yīng)。通過酶標(biāo)儀檢測吸光度（OD值），根據(jù) OD值判斷 HIV 抗體的存在與否。3、性能參數(shù)靈敏度高（ 0.

2、5ng/ml ）4、標(biāo)本要求（1）標(biāo)本類型：血清，血漿。（2）標(biāo)本采集：見標(biāo)本采集手冊(cè)（3）標(biāo)本儲(chǔ)存和運(yùn)輸：室溫放置不超過 8 小時(shí)，2- 8不超過 72 小時(shí)，- 20 可長期保存，應(yīng)避免反復(fù)凍融（4）標(biāo)本拒收狀態(tài)：細(xì)菌污染，嚴(yán)重溶血或脂血標(biāo)本不能作測定。5、容器和添加劑類型6、試劑（1）試劑名稱：人類免疫缺陷病毒HIV(1+2) 型抗體診斷試劑盒。（2）試劑生產(chǎn)廠家：上?？迫A生物工程股份有限公司（3）包裝規(guī)格： 96T/Kit（4）試劑盒組成：、 HIV 酶標(biāo)板；、 HIV 酶標(biāo)試劑；、 HIV（ 1+2）型陽性及陰性對(duì)照血清； 、顯色劑 A液和 B 液；、此外還有濃縮洗滌液、 終止液、自

3、封袋、封板膜、說明書等。7、操作步驟、配液：將 50ml 濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水25 倍稀釋至 1000ml 備用。、編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板設(shè)陰性對(duì)照2 孔、陽性對(duì)照3孔，空白對(duì)照 2 孔。、加樣：分別在相應(yīng)孔加入待檢標(biāo)本、陰性、陽性對(duì)照100 l ，用封板膜封板后置 37溫育 60min。、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機(jī)選擇5 次程序，洗板后在干凈紗布上拍干。、加酶：每孔加酶結(jié)合物100l （空白對(duì)照孔除外），充分混勻，用封板膜封板后置 37溫育 30min。、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機(jī)選擇5 次程序，洗板后在干凈紗布上拍干。、顯色：每孔加入底物緩沖液50 l ，

4、TMB 50l ，輕輕振蕩混勻，封板后置 37避光顯色 10min。、測定：每孔加終止液50l ，輕輕振蕩混勻。設(shè)定酶標(biāo)儀波長為450nm（建議使用雙波長的酶標(biāo)儀比色，參考波長630 nm），空白調(diào)零，讀取各孔OD值。、判斷結(jié)果：計(jì)算臨界值（cut-off）值。臨界值 =陽性對(duì)照值 10%。（若陽性對(duì)照 OD值 2.5 按 2.5 計(jì)算）正常情況下，陰性對(duì)照孔的 OD值 0.08 。樣品 OD值臨界值者為 HIV 抗體陰性。若 1 孔陰性對(duì)照的 OD值 0.08 應(yīng)舍棄，若有 2 孔或 2 孔以上陰性對(duì)照的OD值 0.08 ，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。正常情況下，陽性對(duì)照孔的 OD值 0.80 。樣品 OD

5、值臨界值者為 HIV 抗體陽性。若 1 孔陽性對(duì)照的 OD值 0.8 應(yīng)舍棄，若有 2 孔或 2 孔以上陽性對(duì)照的OD值 0.8 ，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。注意：對(duì)于篩查陽性標(biāo)本，應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試，復(fù)試陽性者應(yīng)按照全國 HIV 檢測管理規(guī)范送 HIV 確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)。10、質(zhì)量控制：每塊板設(shè)陰陽性及空白對(duì)照， 并于每次試驗(yàn)用自制質(zhì)控血清作質(zhì)控，將質(zhì)控血清孔 OD值采用“即刻法”計(jì)算或標(biāo)在質(zhì)控圖上，如質(zhì)控有效，表明試驗(yàn)可靠；如失控，則要檢查試劑效期、 儲(chǔ)藏溫度、試驗(yàn)溫度是否正常、 操作步驟是否正確，直至重新試驗(yàn)使其在控。11、干擾和交叉反應(yīng)12、生物參考區(qū)間正常人陰性。13、患者檢驗(yàn)結(jié)果的可報(bào)告區(qū)間陽性表示 HIV 病毒感染。14、