【課件】1.2微生物的培養(yǎng)技術及應用（第2課時）（課件）（人教版2019選擇性必修3）

1、復習鞏固1.21.2.2.2微生物的培養(yǎng)技術及應用微生物的培養(yǎng)技術及應用微生物的選擇培養(yǎng)和計數微生物的選擇培養(yǎng)和計數壹、選擇培養(yǎng)基貳、稀釋涂布平板叁、分解尿素的細菌的分離與計數肆、分解纖維素的細菌的分離選擇培養(yǎng)基在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他微生物生長的培養(yǎng)基，稱為選擇培養(yǎng)基。內容選擇培養(yǎng)基依據原理：不同的微生物有不同的營養(yǎng)需求或對某種化學物質有不同的敏感性。a.分離耐高溫菌，在高溫高溫條件培養(yǎng)。b.分離對抗生素具有抗性的菌種，加該抗生素該抗生素(如鏈霉素或青霉素)進行分離。c.在培養(yǎng)基中加入質量分數為10%的酚，可以抑制細菌和霉菌細菌和霉菌的生長。d.纖維素作為

2、唯一碳源和能源的培養(yǎng)基，分離能分解纖維素的細菌。e.無氮無氮培養(yǎng)基(培養(yǎng)基完全不含氮元素)，能分離固氮的細菌。f.只含尿素而不含其他氮元素的培養(yǎng)基，選擇分解尿素以獲取氮分解尿素以獲取氮的微生物(能合成脲酶的微生物可以分解尿素)。選擇培養(yǎng)基篩選微生物的方法選擇培養(yǎng)基篩選微生物的方法在培養(yǎng)基中加入某種化學物質改變培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分改變微生物的培養(yǎng)條件小任務閱讀書本17-19頁，以小組進行討論，回答以下問題：a.稀釋涂布平板法的操作要點（操作過程中要特別注意什么？）b.實驗的原理；c.實驗過程用箭頭畫流程圖；d.實驗注意事項有哪些？涂布器稀釋涂布平板法將菌液進行一系列的梯度稀釋梯度稀釋，然后將不同稀

3、釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進行培養(yǎng)。稀釋涂布平板法培養(yǎng)基菌落涂布平板法平板劃線法采用唯一氮源為尿素尿素的選擇培養(yǎng)基來培養(yǎng)。分離出能在此培養(yǎng)基中生長、繁殖的微生物。實驗原理分解尿素的細菌的分離和計數（NH2）2C=O + H2O2NH3 + CO2脲酶分解尿素的細菌的分離和計數采集土壤采集土壤制備懸液制備懸液制備系列稀釋液選擇選擇培養(yǎng)培養(yǎng)采用選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)接種接種涂布平板涂布平板培養(yǎng)培養(yǎng)與與觀察觀察計數計數菌落菌落選取菌落數為30-300的一組為樣本進行統(tǒng)計分解尿素的細菌的分離和計數思考2.此選擇培養(yǎng)基的成分如何調整？1.從哪里取樣？4.如何鑒定該選擇培養(yǎng)基上生長的是能分解尿素的

4、微生物？3.尿素如何除菌？從有哺乳動物排泄物的地方取得土樣尿素為唯一氮源把瓊脂換成瓊脂糖G6玻璃砂漏斗過濾培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，周圍出現紅色環(huán)帶的菌落是能分解尿素的。復習鞏固分離、計數微生物稀釋涂布平板法無法計數 159 17 2 0無法計數 141 13 1 0無法計數 150 11 3 1 9ml無菌水加入0.1ml稀釋液例：將1g土樣加到盛有99ml無菌水的三角瓶中，如圖進行稀釋，每個稀釋度涂布三個平板，根據結果計算1g土樣中菌的數量？注意：1.分離得到單菌落一般以培養(yǎng)皿中有20個以內菌落為宜。2.計算微生物數量一般以培養(yǎng)皿中有30300個菌落為宜。每次稀釋都要換一支吸管（159+14

5、1+150）310105=1.5108個/g注意事項用稀釋涂布平板法計數微生物時，要求選擇菌落數在30300的平板進行計數。解題時易出現以下誤解:(1)只得到1個菌落數在30300的平板是錯誤的。錯誤的原因是不符合實驗的重復原則，易受到偶發(fā)因素的影響。(2)得到3個或3個以上菌落數在30300的平板，也不一定正確，這可能有兩種情況：不同平板間差異較大，如得到3個平板，菌落數分別為230、34、240，雖然菌落數均在“30300”之間，這也是不正確的，因為“34”與“230”“240”差異太大，應重新實驗找出原因。不同平板之間差異不大，是符合要求的，用其平均值作為估算的最終結果?？梢?，并不是只要

6、得到3個“菌落數在30300的平板”即可，而應該是涂布的同一稀釋度的平板均符合“菌落數在30300的平板”且無較大差異，說明實驗操作合格，才能按照計算公式進行計算。分解纖維素的細菌的分離1.原理原理(1)土壤中能分解纖維素的微生物，都能分泌 ，將纖維素分解成小分子糖類物質以滿足自身生命活動的需要。(2)培養(yǎng)基：以 為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。2.纖維素分解菌的鑒定：纖維素分解菌的鑒定：剛果紅染色法，即通過是否產生 來篩選纖維素分解菌。其原理是：纖維素分解菌剛果紅纖維素 紅色消失，出現_紅色復合物透明圈纖維素酶纖維素透明圈實驗流程兩種微生物篩選方法的比較項目項目土壤中分解尿素的細菌的分離土壤中分解尿

7、素的細菌的分離分解纖維素的微生物的分離分解纖維素的微生物的分離方法使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基進行培養(yǎng)利用富含纖維素的選擇培養(yǎng)基進行培養(yǎng)原理土壤中不能分解尿素的微生物因缺乏脲酶而不能正常生長，能夠分解尿素的微生物能利用尿素為氮源正常生長，從而起到選擇作用因為培養(yǎng)基中含有豐富的纖維素，因此能夠分解纖維素的微生物具有更多的生存機會而大量繁殖1.若要通過稀釋涂布平板法分離純化土壤中的微生物，其正確操作步驟是（ ）土壤取樣稱取1g土壤加入盛有99mL無菌水的錐形瓶中，制備102土壤稀釋液吸取0.1mL土壤稀釋液進行平板涂布依次將土壤稀釋液稀釋至濃度為103、10-4、10-5、10-6、107的溶

8、液A.B.C.D. 2.下列是關于“檢測土壤中細菌總數”實驗操作的敘述，其中錯誤的是( ) A. 用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經高溫、高壓滅菌后倒平板 B. 取104、105、106倍的土壤稀釋液和無菌水各0.1mL，分別涂布于各組平板上 C.將實驗組和對照組平板倒置，37恒溫培養(yǎng)2448小時D.確定對照組無菌后，選擇菌落數在300以上的實驗組平板進行計數解析：A、首先要進行培養(yǎng)基的制備、用蒸餾水配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，經高溫、高壓滅菌后倒平板，A正確;B、然后進行對土壤稀釋液進行涂布于各組平板上，B正確;C、將實驗組和對照組平板倒置，37C恒溫培養(yǎng)2448小時，C正確;D、確定對照組無菌

9、后，選擇菌落數在30300的進行記數，求起平均值，再通過計算得出土壤中細菌總數，D錯誤.3.現有一升水樣，梯度稀釋至103倍。各取0.1mL已稀釋103倍的水樣分別接種到三個培養(yǎng)基上培養(yǎng)，記錄的菌落數分別為55、56、57個，則每升原水樣中大腸桿菌數為( )個。A. 560 B.5.6x105 C.5.6x107 D.5.6x108解析：題中梯度稀釋的倍數是103，三個菌落的平均數=55+56+57/3=56，則每毫升樣品中菌株數56/0.1x103=5.6x105個，所以每升土壤浸出液中的菌株數=5.6x105x103=5.6x108個。故選:D。4.有機農藥苯磺隆是一種除草劑，長期使用會污染環(huán)境，研究發(fā)現，苯磺隆能被土壤中某些微生物降解，分離能降解苯磺隆菌株的實驗過程如下圖所示。請回答問題:要檢測土樣中的細菌含量，應采用 法。在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板培養(yǎng)基先行培養(yǎng)了一段時間，這樣做的目的是 。然后，將1mL土壤溶液稀釋100倍，在3個平板上分別接入0.1mL稀釋液，經適當培養(yǎng)后，3個平板上的菌落數分別為39、38和37。據此可得出每升土壤溶液中的活菌數為 個。 涂布分離涂布分離檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格3.8107解析：涂布分離