基因組DNA的提取與電泳鑒定(共3頁)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上基因組DNA的提取與電泳鑒定一. 【實驗?zāi)康摹?掌握基因組DNA的提取原理和方法二. 【實驗儀器與試劑】實驗儀器：瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)、紫外反射透射分析儀、離心機、恒溫水浴鍋實驗試劑：氯仿、巰基乙醇、植物基因組DNA提取試劑盒（離心柱型）三. 【實驗原理】實驗中有兩種提取DNA的方法，即試劑盒提取法和普通手提法，本次試驗采用試劑盒提取法。試劑盒方法：試劑盒中有特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨特的緩沖液系統(tǒng)，離心吸附柱是一種硅基質(zhì)材料，可以高效、專一吸附DNA，最大限度去除植物細胞中雜質(zhì)蛋白及其他有機化合物。普通手提方法：用機械的方法使組織和細胞破碎，加入SDS等離子型活

2、性劑，溶解細胞膜和核膜蛋白。加入酚氯仿等表面活性劑使蛋白變性。離心，除去組織和變性蛋白，上清液中加入冰凍的無水乙醇使DNA沉淀，離心，棄上清，用70%乙醇漂洗DNA，倒掉上清，風(fēng)干，溶于滅菌的雙蒸水中。四. 【實驗內(nèi)容與步驟】1.取出處理過的新鮮藻體0.1g，用液氮研磨至粉狀。2.將研磨好的粉末迅速轉(zhuǎn)移到預(yù)先裝有700l 65預(yù)熱緩沖液GP1的離心管中（實驗前在預(yù)熱的GP1中加入-巰基乙醇，使其終濃度為0.1%），迅速顛倒混勻后，將離心管放在65水浴中加熱20分鐘，水浴過程中顛倒離心管以混合樣品數(shù)次。3、加入700l氯仿，充分混勻，12000rpm 離心5min。4、小心將上一步所得上層水相轉(zhuǎn)

3、入一個新的離心管中，加入700l緩沖液GP2，充分混勻。5、將混勻的液體轉(zhuǎn)入吸附柱CB3中，12000rpm離心30s，棄掉廢液（吸附柱容積為700ml左右，可以分次加入離心）。6、向吸附柱CB3中加入500l去蛋白液GD（使用前確認是否加入無水乙醇），12000rpm 離心30s，棄掉廢液。7、向吸附柱CB3中加入700l漂洗液PW（使用前確認是否加入無水乙醇），12000rpm 離心30s，棄掉廢液。8、向吸附柱CB3中加入500l漂洗液PW，12000rpm 離心30s，棄掉廢液。9、將吸附柱CB3放入廢液回收管中，12000rpm 離心2min，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除。10、

4、將吸附柱CB3置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。11、將吸附柱CB3轉(zhuǎn)入一個干凈的離心管中，向吸附膜的中間部位懸空滴加50l洗脫緩沖液TE，室溫放置2min，12，000rpm 離心2min；離心得到的溶液再加入吸附柱C3中，室溫放置2min，12，000rpm 離心2min；取出1/10體積提取物進行電泳檢測，其余 -20保存?zhèn)溆?。? 【實驗結(jié)果與討論】現(xiàn)象描述及分析1. 根據(jù)電泳結(jié)果可以看出DNA條帶亮度較高，說明提取出的DNA含量較高。且拖尾現(xiàn)象較輕，說明可能有部分DNA降解，但是降解程度較小，DNA的完整性保存較好。2. 由電泳結(jié)果看出條帶位于marker2000bp條帶上方，說明提取出的DNA質(zhì)量大于2000bp，但具體大小不能確定。附圖C2 六. 【思考題】 1.簡述DNA提取過程中需要注意哪些問題。使用液氮進行研磨時要戴手套，防止凍傷，并保持室內(nèi)通風(fēng)。研磨時要保證材料始終處于液氮環(huán)境中，不可使液氮完全揮發(fā)。研磨要充分，盡量不要外濺，因為收集細胞的多少是實驗成功與否的關(guān)鍵。每人所取材料量不能太多,氯仿的加入量不能太少,且要充分搖勻,否則蛋白質(zhì)變性不完全。2.查閱資料簡單介紹通過紫外分光光度計給核酸定量的原理。分光光度計計采用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源，通過系列分光裝置