醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

1、醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案第 1 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 3，5-二硝基水楊酸法（DNS法）測(cè)定還原糖 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的和要求1、了解糖的還原性2、掌握還原糖定量測(cè)定的原理和方法。3、熟悉分光光度計(jì)的使用方法。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn):繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法，分光光度計(jì)的使用原理和使用方法。難點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)材料1.試劑（1）1mg/mL葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取干燥恒重的葡萄糖100mg，加少量蒸餾水溶解后，以蒸餾水定容至100mL，即含葡萄糖為1.0mg/mL。（2）3，5-二硝基水楊酸試劑：稱取6.3 g 3，5-二硝基水楊酸并量取262 mL 2mol/L NaOH加到酒石酸鉀納的熱溶液

2、中（182 g酒石酸鉀納溶于500 mL水中），再加5 g結(jié)晶酚和5 g亞硫酸氫鈉溶于其中，攪拌溶解，冷卻后定容到1000 mL貯于棕色瓶中。（3）未知濃度還原糖。2. 材料 小麥淀粉或玉米淀粉。3. 器材 分光光度計(jì)，天平，水浴鍋，電爐，試管若干等。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理：在NaOH和丙三醇存在下，3，5-二硝基水楊酸（DNS）與還原糖共熱后被還原生成氨基化合物。在過(guò)量的NaOH堿性溶液中此化合物呈桔紅色，在540nm波長(zhǎng)處有最大吸收，在一定的濃度范圍內(nèi)，還原糖的量與光吸收值呈線性關(guān)系，利用比色法可測(cè)定樣品中的含糖量。黃色 桔紅色二、實(shí)驗(yàn)步驟：1.取7支具塞刻度試管編號(hào)，按表1分別加入濃度為1

3、mg/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液、蒸餾水和DNS試劑，配成不同濃度的葡萄糖反應(yīng)液。表1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線制作管 號(hào)1mg/ml葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(mL)蒸餾水(mL)DNS(mL)葡萄糖含量(mg)光密度值(OD-540nm)100.50.5020.10.40.50.130.20.30.50.240.30.20.50.350.40.10.50.460.500.50.57（未知濃度還原糖）0.500.50.5將各管搖勻，在沸水浴中準(zhǔn)確加熱5min取出，冷卻至室溫，用蒸餾水補(bǔ)足至5mL，加塞后顛倒混勻，在分光光度計(jì)上進(jìn)行比色。調(diào)波長(zhǎng)540nm，用1號(hào)管調(diào)零點(diǎn)，分別測(cè)出26號(hào)管的光密度值。2.繪制標(biāo)曲以光密度值為縱

4、坐標(biāo)，葡萄糖含量(mg)為橫坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線（電腦Excel完成最好）。計(jì)算7號(hào)管還原糖的百分含量。三、結(jié)果與計(jì)算：計(jì)算出7號(hào)管光密度值的平均值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上分別查出相應(yīng)的還原糖毫克數(shù)，按下式計(jì)算出樣品中還原糖和總糖的百分含量。 查曲線所得葡萄糖毫克數(shù)×提取液總體積/測(cè)定時(shí)取用體積還原糖(%) =×100% 樣品毫克數(shù)教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 糖的還原性，具有還原性的糖結(jié)構(gòu)有何特點(diǎn)？提綱、板書設(shè)計(jì) 實(shí)驗(yàn)原理及反應(yīng)方程式，實(shí)驗(yàn)步驟中表1及計(jì)算公式作業(yè) 1、 為什么要設(shè)置空白對(duì)照？2、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的定義？主要參考資料1 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，2013

5、2生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析1、 讓學(xué)生理解糖定量測(cè)定的原理及方法；2、 強(qiáng)調(diào)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制要點(diǎn)；3、 需要和學(xué)生一起推導(dǎo)還原糖濃度的公式 醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案第 2次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 糖的呈色反應(yīng)和還原糖檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)性質(zhì)驗(yàn)證性實(shí)驗(yàn)教學(xué)目的和要求1.了解糖類某些顏色反應(yīng)的原理2.學(xué)習(xí)應(yīng)用糖的顏色反應(yīng)鑒別糖類的方法教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：顏色反應(yīng)鑒別糖的方法難點(diǎn)：鑒別糖的反應(yīng)原理實(shí)驗(yàn)材料1、儀器：試管及試管架、滴管、移液管及恒溫水浴鍋2、試劑：莫氏試劑、塞氏試劑、托倫試劑；1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液、1%果糖溶液、1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液實(shí)驗(yàn)內(nèi)

6、容一、實(shí)驗(yàn)原理：萘酚反應(yīng)：糖在濃無(wú)機(jī)鹽作用下，脫水生成糠醛衍生物，后者在濃硫酸的作用下能與萘酚生成紫紅色物質(zhì)，在糖液面與濃硫酸液面間出現(xiàn)紫色環(huán)。但一些非糖物質(zhì)對(duì)此反應(yīng)也呈陽(yáng)性間苯二酚反應(yīng)：在酸作用下，酮糖脫水生成羥甲基醛，后者可與間苯二酚作用生成紅色物質(zhì)。此反應(yīng)是酮糖的特異反應(yīng)。醛糖在同樣條件下呈色反應(yīng)慢。托倫反應(yīng)：戊糖在濃酸作用下脫水生成糠醛，后者可與間苯三酚結(jié)合生成櫻桃紅色物質(zhì)。本反應(yīng)常用來(lái)鑒定戊糖，戊糖此反應(yīng)最快，可以和其他糖類區(qū)分。二、操作步驟： 萘酚反應(yīng)：先取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%淀粉溶液、1%蔗糖溶液，然后向3支試管中各加入2滴莫氏試劑，混勻。另外取1支試管，只加2

7、滴莫氏試劑作為空白對(duì)照，傾斜4支試管，沿各試管壁緩慢加入濃硫酸約1.5 mL，慢慢立起試管 ，切勿搖動(dòng)。試管 中液體分成兩層，濃硫酸在試液下面。在兩液分界處有紫紅色環(huán)出現(xiàn)。觀察、記錄各管顏色。間苯二酚反應(yīng)：取3支試管，分別加入1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液各0.5 mL。再向各管分別加入塞氏試劑2.5 mL，混勻。將3支試管同時(shí)置于沸水浴中，注意觀察顏色的變化及變化時(shí)間。托倫反應(yīng)：取3支試管，分別加入1%阿拉伯糖溶液、1%半乳糖溶液、1%葡萄糖溶液各0.1 mL，再向各管分別加入托倫試劑1 mL，混勻。將3支試管同時(shí)置于沸水浴中，觀察、記錄顏色的變化及顏?zhàn)兓臅r(shí)間。教學(xué)過(guò)程中師生活

8、動(dòng)設(shè)計(jì)觀察和記錄各管顏色及顏色變化的時(shí)間后，說(shuō)出各管顏色變化的原因。提綱、板書設(shè)計(jì)原理及操作步驟作業(yè)1.簡(jiǎn)述萘酚反應(yīng)原理。2.可用何種顏色反應(yīng)鑒別酮糖存在。主要參考資料1 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析1、讓學(xué)生掌握糖顯色反應(yīng)的原理；2、給學(xué)生強(qiáng)調(diào)注意觀察各管顏色變化的時(shí)間醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案第 3次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 蛋白質(zhì)等電點(diǎn)和沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求1.了解蛋白質(zhì)的兩性解離性質(zhì)。2.學(xué)習(xí)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的方法。3.了解蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系及沉淀蛋白質(zhì)的方法以及其實(shí)用意義。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)重

9、點(diǎn)：學(xué)習(xí)測(cè)定蛋白質(zhì)等電點(diǎn)的方法及沉淀蛋白質(zhì)的方法。難點(diǎn)：蛋白質(zhì)變性與沉淀的關(guān)系，沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀。實(shí)驗(yàn)材料（一）材料新鮮雞蛋（二）試劑1、0.4%酪蛋白醋酸鈉溶液200mL2、1.00mol/L醋酸溶液100mL3、0.10mol/L醋酸溶液300mL4、0.01mol/L醋酸溶液50mL5、蛋白質(zhì)溶液500mL 5%卵清蛋白溶液或雞蛋清的水溶液（新鮮雞蛋清:水=1:9）6、pH4.7醋酸醋酸鈉的緩沖溶液100mL7、3%硝酸銀溶液10mL8、5%三氯乙酸溶液50mL9、95%乙醇250mL10、飽和硫酸銨溶液250mL11、硫酸銨結(jié)晶粉末10000m

10、L12、0.1mol/L鹽酸溶液300mL13、0.1mol/L氫氧化鈉溶液300mL14、0.05mol/L碳酸鈉溶液300mL15、甲基紅溶液20mL（三）器具水浴鍋、溫度計(jì)、200mL錐形瓶、100mL容量瓶、吸管、試管及試管架 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1.實(shí)驗(yàn)原理：蛋白質(zhì)是兩性電解質(zhì)。在蛋白質(zhì)溶液中存在下列平衡：最常用的方法是測(cè)其溶解度最低時(shí)的溶液pH值。蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為兩類。（1） 可逆的沉淀反應(yīng) 此時(shí)蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來(lái)溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。如大多數(shù)蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇（或丙酮）短時(shí)間作用于蛋白質(zhì)。提純蛋白

11、質(zhì)時(shí)，常利用此類反應(yīng)。（2） 不可逆沉淀反應(yīng) 此時(shí)蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于原來(lái)溶劑中。加熱引起的蛋白質(zhì)沉淀與凝固。蛋白質(zhì)與重金屬離子或某些有機(jī)酸的反應(yīng)都屬于此類。蛋白質(zhì)變性后，有時(shí)由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性。二、實(shí)驗(yàn)步驟：（一）酪蛋白等電點(diǎn)的測(cè)定（1）取同樣規(guī)格的試管4支，按下表順序分別精確地加入各試劑，然后混勻。試管號(hào)蒸餾水（mL）0.01 mol/L蠟酸（mL）0.1 mol/L蠟酸(mL)1.0 mol/L蠟酸(mL)18.40.6-28.7-0.338.0-1.

12、047.4-1.6 （2）向以上試管中各加酪蛋白的醋酸鈉溶液1mL， 加一管，搖勻一管。此時(shí)1、2、3、4管的pH依次為5.9、5.5、4.7、3.5。觀察其混濁度。靜置10分鐘后，再觀察其混濁度。最混濁的一管pH即為酪蛋白的等電點(diǎn)。（二）蛋白質(zhì)的沉淀及變性1、蛋白質(zhì)的鹽析 無(wú)機(jī)鹽（硫酸銨、硫酸鈉、氯化鈉等）的濃溶液能析出蛋白質(zhì)。鹽的濃度不同，析出的蛋白質(zhì)也不同。 如球蛋白可在半飽和硫酸銨溶液中析出，而清蛋白則在飽和硫酸銨溶液中才能析出。由鹽析獲得的蛋白質(zhì)沉淀，當(dāng)降低其鹽類濃度時(shí)，又能再溶解，故蛋白質(zhì)的鹽析作用是可逆過(guò)程。加蛋白質(zhì)溶液5mL于試管中，再加等量的飽和硫酸銨溶液，混勻后靜置數(shù)分鐘則

13、析出球蛋白的沉淀。倒出少量混濁沉淀，加少量水，觀察是否溶解，為什么？將管內(nèi)容物過(guò)濾，向?yàn)V液中添加硫酸銨粉末到不再溶解為止。此時(shí)析出沉淀為清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸餾水，觀察沉淀的再溶解。2、重金屬離子沉淀蛋白質(zhì)：重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加3%硝酸銀溶液12滴，振蕩試管，有沉淀產(chǎn)生。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？3、 某些有機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì) 取1支試管，加入蛋白質(zhì)溶液2mL，再加入1mL5%三氯乙酸溶液，振蕩試管，觀察沉淀的生成。放置片刻傾出清液，向沉淀中加入少量水，觀察沉淀是否溶解。4、有機(jī)溶劑沉淀蛋

14、白質(zhì) 取1支試管，加入2mL蛋白質(zhì)溶液，再加入2mL95%乙醇。觀察沉淀的生成（如果沉淀不明顯，加點(diǎn)NaCl，混勻。5、 乙醇引起的變性與沉淀 取3支試管，編號(hào)。依下表順序加入試劑： 試劑（mL）管號(hào)蛋白質(zhì)溶液0.1mol/L氫氧化鈉溶液0.1mol/L鹽酸溶液95%乙醇pH4.7緩沖溶液123111111111 振搖混勻后，觀察各管有何變化。放置片刻向各管內(nèi)加入水8mL，然后在第2，3號(hào)管中各加一滴甲基紅，再分別用0.1mol/L醋酸溶液及0.05mol/L碳酸鈉溶液中和之。觀察各管顏色的變化和沉淀的生成。每管再加0.1mol/L鹽酸溶液數(shù)滴，觀察沉淀的再溶解。解釋各管發(fā)生的全部現(xiàn)象。教學(xué)過(guò)

15、程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 蛋白質(zhì)沉淀原理，什么是蛋白質(zhì)變性？根據(jù)性質(zhì)推測(cè)其應(yīng)用提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 1.什么是等電點(diǎn)？2.臨床上為什么可以用蛋清或牛乳解救誤服金屬鹽的病人？主要參考資料1 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析1、 通過(guò)原理分析，幫助學(xué)生理解“沉淀的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為變性；變性的蛋白質(zhì)不一定表現(xiàn)為沉淀”；2、 重點(diǎn)區(qū)別：“可逆沉淀”與“不可逆沉淀”醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案 第 4 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 蛋白質(zhì)和氨基酸顯色反應(yīng) 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求1.學(xué)習(xí)和了解常用的幾種鑒定

16、蛋白質(zhì)與氨基酸的方法。2.了解蛋白質(zhì)與氨基酸的顯色反應(yīng)原理。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：蛋白質(zhì)與氨基酸的顯色反應(yīng)原理。難點(diǎn)：鑒定蛋白質(zhì)與氨基酸的方法。實(shí)驗(yàn)材料試劑：0.5%醋酸鉛1mL、10%NaOH、1%CuSO4器具：水浴鍋、溫度計(jì)、200mL錐形瓶、100mL容量瓶、吸管、試管及試管架 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理：1.雙縮脲反應(yīng)(biuret reaction) 蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸銅共熱，呈現(xiàn)紫色或紅色，此反應(yīng)稱為雙縮脲反應(yīng)，雙縮脲反應(yīng)可用來(lái)檢測(cè)蛋白質(zhì)水解程度。2.苯環(huán)的黃色反應(yīng) Tyr（Trp）+濃硝酸黃色 Phe+少量濃硫酸+濃硝酸黃色 3.醋酸鉛反應(yīng)（半胱氨酸和胱氨酸）

17、R-SH+2NaOHR-OH+Na2S+H2ONa2S +Pb2+PbS+2Na+PbS+2HCl PbCl2+H2S二、實(shí)驗(yàn)步驟：1.雙縮脲反應(yīng)(biuret reaction) 取1支試管，加乳蛋白溶液（蛋清:水=1:9）約1mL和10%NaOH約2mL，搖勻，再加1%CuSO4溶液2滴，隨加隨搖。觀察現(xiàn)象，記錄。2.苯環(huán)的黃色反應(yīng) 向6個(gè)試管中按下表加試劑，觀察現(xiàn)象并記錄。雞蛋清溶液（蛋清:水=1:9）管號(hào)123456材料雞蛋清液指甲頭發(fā)0.5%苯酚0.3%色氨酸0.3%酪氨酸（滴）4少許少許444濃硝酸（滴）22020444現(xiàn)象逐滴加10% NaOH后現(xiàn)象變化3.醋酸鉛反應(yīng)0.5%醋酸

18、鉛1mL、10%NaOH1mL、卵清蛋白1mL三樣試劑混勻加熱，觀察現(xiàn)象。然后冷卻至2030，加10滴濃HCL，再將濕潤(rùn)的醋酸鉛試紙放于管口，加熱，嗅其氣味同時(shí)觀察試紙顏色變化。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 含苯環(huán)的氨基酸有哪些？雙縮脲反應(yīng)顏色與什么相關(guān)？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 1.在實(shí)驗(yàn)室如何區(qū)分核酸和蛋白質(zhì)？2.黃色反應(yīng)中為何會(huì)出現(xiàn)深淺不一的黃色？主要參考資料1生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析1、 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中讓學(xué)生重點(diǎn)觀察顏色變化的過(guò)程；2、 醋酸鉛反應(yīng)的每一步都要記錄現(xiàn)象醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)

19、教案 第 5次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 糖的薄層層析 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求1.了解薄層層析的基本原理。2.熟悉薄層層析的操作過(guò)程。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：掌握薄層層析的吸附原理。難點(diǎn)：掌握分配系數(shù)，Rf值。實(shí)驗(yàn)材料四種糖樣品、染色液、擴(kuò)展劑、層析缸、層析板等實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理：薄層層析(簡(jiǎn)稱TLC)是在吸附層析基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種微量而快速的層析法，它是在吸附劑或支持劑均勻涂布的薄層上進(jìn)行的，故稱薄層層析。為了使所要分析的樣品各組分得到分離，必須選擇合適的吸附劑。硅膠、氧化鋁和聚酰胺是廣泛采用的吸附劑，在吸附劑或支持劑中添加合適的粘合劑后再涂布，可使薄層緊貼在玻璃板上。糖是多羥基化合物

20、在硅膠G薄層上展層時(shí)，被吸附的強(qiáng)弱有差異，同時(shí)在展開(kāi)劑中溶解性質(zhì)也有差異。吸附力主要與糖的相對(duì)分子質(zhì)量和羥基數(shù)有關(guān)，一般為三糖二糖單糖，醛糖酮糖脫氧糖。經(jīng)過(guò)適當(dāng)?shù)娜軇┱归_(kāi)后，糖在薄板上的移動(dòng)速度是戊糖己糖雙糖三糖。薄層層析與其他方法比有明顯的優(yōu)點(diǎn)：層析時(shí)間短、樣品用量范圍大(1g-0.5g)、觀察結(jié)果方便、可以分離多種化合物等，其靈敏度比紙層析高10-100倍，顯色方法甚至可以用腐蝕性顯色劑。而且薄層層析法操作方便，設(shè)備簡(jiǎn)單，所以薄層層析法目前應(yīng)用范圍相當(dāng)廣泛。二、實(shí)驗(yàn)步驟：1點(diǎn)樣 選取制備好的薄板一塊，在距底邊1.5cm 的直線上均勻選4個(gè)點(diǎn)。用毛細(xì)管分別點(diǎn)上不同的糖樣品于4個(gè)點(diǎn)，樣品量控制

21、在5-10g，斑點(diǎn)直徑不超過(guò)3mm。點(diǎn)樣完畢，立即用電熱吹風(fēng)機(jī)吹干樣點(diǎn)。2展層 將薄板置于盛有層析溶劑的層折缸中，自下向上展層，當(dāng)展層溶劑到達(dá)離薄板頂端約1cm 處時(shí)取出薄板，在溶劑前沿處作一記號(hào)，于80下烘干5min。3顯色 除盡溶劑后，向薄層板上噴霧糖顯色劑，于80下烘干10min，則各種糖分別顯出不同的顏色。三、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：（1）記下各斑點(diǎn)的位置、顏色，計(jì)算Rf值。（2）鑒定混合糖中糖的種類，并繪出層析圖譜。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 還有哪些層板方法？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 何謂Rf值？Rf值與什么因素有關(guān)？主要參考資料1生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，20102生

22、物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析1、 點(diǎn)樣是本實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵，教師在指導(dǎo)學(xué)生操作時(shí)，強(qiáng)調(diào)點(diǎn)樣要輕、快，穩(wěn)、小并且點(diǎn)樣點(diǎn)要集中；2、 放展板時(shí)，點(diǎn)樣點(diǎn)不要浸如展層溶液中醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案 第 6次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 酶的特性 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求掌握酶促反應(yīng)速度的幾個(gè)主要影響因素了解淀粉水解程度的鑒定。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：唾液淀粉酶催化的酶促反應(yīng)；淀粉水解程度的判斷。難點(diǎn)：酶活性的影響因素。實(shí)驗(yàn)材料儀器：水浴鍋、電爐、白瓷板、試管、量筒、漏斗、脫脂棉。試劑：0.2%、0.5%淀粉液、0.3%NaCl、0.85%NaCl溶液、1%CuSO4溶液、

23、1%Na2SO4、pH=5.0、pH=8.0、pH=6.8緩沖溶液。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理：溫度與酶促反應(yīng)速度關(guān)系密切。溫度降低時(shí)，酶促反應(yīng)速度降低以至完全停止；隨著溫度升高，反應(yīng)速度逐漸加快。在某一溫度時(shí)反應(yīng)速度達(dá)到最大值，此溫度稱酶作用的最適溫度。溫度繼續(xù)升高，反應(yīng)速度反而下降。人體內(nèi)大多數(shù)酶的最適溫度在37左右。 pH值也會(huì)影響酶促反應(yīng)速度。因?yàn)槊副旧硎堑鞍踪|(zhì)，pH不僅影響酶蛋白分子某些基團(tuán)的解離，也影響底物的解離程度，從而影響酶與底物的結(jié)合。當(dāng)酶促反應(yīng)速度達(dá)到最大值時(shí)的溶液pH值，稱為該酶的最適pH。不同的酶最適pH值不盡相同，人體多數(shù)酶的最適pH值在7.0左右。例如唾液淀粉酶的最適pH

24、值為6.8。 凡是能夠提高酶活性，加快酶促反應(yīng)速度的物質(zhì)都稱為酶的激活劑。例如Cl-是唾液淀粉酶的激活劑。 凡是能夠降低酶的活性，使酶促反應(yīng)速度減慢，又不使酶變性的物質(zhì)稱為酶的抑制劑。例如Cu2+是唾液淀粉酶的抑制劑。 在不同溫度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度不同，可由水解混合物遇碘顯現(xiàn)的顏色不同來(lái)判斷：淀粉(藍(lán)色)紅色糊精(紅色)無(wú)色糊精(不顯色)麥芽糖(不顯色)葡萄糖(不顯色) 二、實(shí)驗(yàn)步驟：1.制備稀釋50倍的唾液淀粉酶：用蒸餾水漱口清除食物殘?jiān)?，再含一口蒸餾水一分鐘后使其流入量筒并稀釋50倍，混勻備用。2.溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn) （1）取試管3支，編號(hào)，各管按下表依次加入各種試劑。

25、 溫度對(duì)酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號(hào) 1 2 3 0.1淀粉溶液（mL） 1.5 1.5 1.5稀釋唾液 （ml） 1 1 1煮沸唾液 1搖勻水浴溫度 37 0 37（2）水浴8min后，向各管中各滴加1滴KI-I2溶液，混勻，觀察各管顏色并解釋結(jié)果3.pH對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響實(shí)驗(yàn)（1）取試管3支，編號(hào)，按下表依次加入各種試劑。 pH對(duì)酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號(hào) 1 2 30.2淀粉液（mL） 2 2 2PH 5.0緩沖液（mL） 3 PH 6.8緩沖液（mL） 3 PH 8.0緩沖液（mL） 3稀釋唾液酶（mL） 2 2 2（2）混勻后，將各管置于37水浴5分鐘后，取2號(hào)管中混合液1滴

26、于點(diǎn)滴板上，加1滴KI-I2溶液顯色，以檢驗(yàn)淀粉的水解程度。若不是棕黃色，則繼續(xù)保溫，然后每隔1min繼續(xù)取2號(hào)管的混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KI-I2溶液顯色，直至變成棕黃色時(shí)，向所有試管內(nèi)依次滴加2滴KI-I2溶液顯色。觀察各管顏色并解釋結(jié)果。4.激活劑和抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響（1）取試管4支，編號(hào)，按下表依次加入各種試劑。激活劑和抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度影響實(shí)驗(yàn)加樣表管號(hào) 1 2 3 40.1淀粉液（mL） 1.5 1.5 1.5 1.51NaCl溶液（mL） 2 1Na2SO4溶液（mL） 2 1CUSO4溶液（mL） 2 蒸餾水（mL） 2稀釋唾液酶（mL） 0.5 0.5 0.5

27、 0.5（2）混勻后，將各管置于37水浴8分鐘后，取1號(hào)管中混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KI-I2溶液顯色，以檢驗(yàn)淀粉的水解程度。若不是棕黃色，則繼續(xù)保溫，然后每隔1min繼續(xù)取1號(hào)管的混合液1滴于點(diǎn)滴板上，加1滴KI-I2溶液顯色，直至變成棕黃色時(shí)，向所有試管依次滴加1滴KI-I2溶液顯色。觀察各管顏色并解釋結(jié)果。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 隨著淀粉水解，為什么與碘有顏色反應(yīng)變化？提綱、板書設(shè)計(jì) 原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 1在作離子對(duì)酶活的影響時(shí)3、4號(hào)管有何作用？2.在激活劑和抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響實(shí)驗(yàn)中如何證明Cl-是唾液淀粉酶的激活劑？3.酶的抑制劑與變性劑有何區(qū)別？主要參考資料1生物化

28、學(xué)實(shí)驗(yàn)，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，20102生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析1、對(duì)照實(shí)驗(yàn)要注意同步性；2、不同人的唾液淀粉酶活性不盡相同，讓學(xué)生注意到樣本差異；3、重點(diǎn)分析激活劑和抑制劑對(duì)酶促反應(yīng)速度的影響醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案 第 7次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 Folin-酚試劑法測(cè)蛋白質(zhì)濃度 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)綜合性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求1. 學(xué)習(xí)會(huì)用Folin-酚試劑法測(cè)蛋白質(zhì)濃度的方法。2. 鞏固分光光度計(jì)的使用。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)1、 重點(diǎn)：分光光度計(jì)的使用2、 難點(diǎn)：標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制實(shí)驗(yàn)材料試劑：標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液，F(xiàn)olin-酚試劑，樣品液蛋白質(zhì)器材：分光光度計(jì)、恒溫水

29、浴鍋、試管、移液管實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理Folin-酚試劑法測(cè)蛋白質(zhì)濃度的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin-酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測(cè)蛋白質(zhì)的靈敏度。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是：在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物。Folin-酚試劑中的磷鉬酸鹽-磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。二、實(shí)驗(yàn)步驟1.曲線的測(cè)定：取16支大試管，1支作空白，3支留作未知樣品，其余試管分成兩組，分別加入0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0毫升標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)溶液（濃度

30、為250mg/ml）。用水補(bǔ)足到1.0毫升，然后每支試管加入5毫升試劑甲，在旋渦混合器上迅速混合，于室溫（2025）放置 10分鐘。再逐管加入0.5毫升試劑乙（Folin-酚試劑），同樣立即混勻。這一步混合速度要快，否則會(huì)使顯色程度減弱。然后在室溫下放置30分鐘，以未加蛋白質(zhì)溶液的第一支試管作為空白對(duì)照，于700nm處測(cè)定各管中溶液的吸光度值。以蛋白質(zhì)的量為橫座標(biāo)，吸光度值為縱座標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線。2.樣品的測(cè)定：取1毫升樣品溶液（其中約含蛋白質(zhì)20250微克），按上述方法進(jìn)行操作，取1毫升蒸餾水代替樣品作為空白對(duì)照。通常樣品的測(cè)定也可與標(biāo)準(zhǔn)曲線的測(cè)定放在一起，同時(shí)進(jìn)行。即在標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定的各試

31、管后面，再增加3個(gè)試管。如上表中的8、9、10試管。根據(jù)所測(cè)樣品的吸光度值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的蛋白質(zhì)量，從而計(jì)算出樣品溶液的蛋白質(zhì)濃度。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 測(cè)定蛋白質(zhì)濃度其他方法有哪些？提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 簡(jiǎn)述Folin-酚試劑法比較其他蛋白質(zhì)測(cè)定方法的優(yōu)點(diǎn)。主要參考資料1 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析1、 強(qiáng)調(diào)Folin-酚試劑法測(cè)蛋白質(zhì)濃度的顯色原理；2、 鞏固分光光度計(jì)的使用醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案 第 8 次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的

32、和要求1.了解電泳技術(shù)的一般原理。2.掌握醋酸纖維薄膜電泳的操作。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：掌握醋酸纖維薄膜電泳的操作方法。難點(diǎn)：電泳技術(shù)的原理。實(shí)驗(yàn)材料器材：DYY-6型常壓電泳儀、醋酸纖維薄膜（2 cm×8cm）、.培養(yǎng)皿、蓋玻片、濾紙、鑷子。試劑：1 巴比妥緩沖液（pH8.6，離子強(qiáng)度0.07）：巴比妥2.76g，巴比妥鈉15.45g，用蒸餾水定容至1000mL。2 染色液：氨基黑10B 0.25g，用甲醇50mL、冰醋酸10mL、水40mL溶解（可重復(fù)使用）。3漂洗液：甲醇或乙醇45mL，冰醋酸5mL，水50mL，混勻。4透明液（僅在定量分析時(shí)使用）：無(wú)水乙醇7份，冰醋酸3份，混

33、勻。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理：電泳是帶電顆粒在電場(chǎng)作用下，向著與其電性相反的電極移動(dòng)的現(xiàn)象。醋酸纖維薄膜電泳(CAME)是一種區(qū)帶電泳技術(shù)，將血清樣品點(diǎn)樣于醋纖膜上，在pH86的緩沖液中電泳時(shí)，血清蛋白質(zhì)均帶負(fù)電荷移向正極。由于血清中各蛋白組分等電點(diǎn)不同而致表面凈電荷量不等，加之分子大小和形狀各異，因而電泳遷移率不同，彼此得以分離。 影響電泳遷移率的外界因素：電場(chǎng)強(qiáng)度、溶液的pH值、溶液的離子強(qiáng)度和電滲現(xiàn)象。影響電泳遷移率的內(nèi)在因素：質(zhì)點(diǎn)所帶凈電荷的量、質(zhì)點(diǎn)的大小和形狀。本實(shí)驗(yàn)以醋酸纖維素為電泳支持物，它是纖維素的羥基乙?；纬傻睦w維素醋酸酯，將它溶于有機(jī)溶劑（如：丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等

34、）后，涂抹成均勻的薄膜則成為醋酸纖維素薄膜。該膜具有均一的泡沫狀的結(jié)構(gòu)，厚度約為120 m，有很強(qiáng)的通透性，對(duì)分子移動(dòng)阻力很小。醋酸纖維素薄膜電泳具有微量、快速、簡(jiǎn)便、分辨力高，對(duì)樣品無(wú)拖尾和吸附現(xiàn)象等優(yōu)點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)中用于電泳分離各種血清蛋白。血清中含有清蛋白、-球蛋白、-球蛋白、-球蛋白和各種脂蛋白等，各種蛋白質(zhì)在電場(chǎng)中的遷移速度不同。正常人血清在pH8.6的緩沖體系中電泳，染色后可顯示5條區(qū)帶。其中清蛋白的泳動(dòng)速度最快，其余依次為1-、2-、-及-球蛋白。二、實(shí)驗(yàn)步驟：1）預(yù)處理；2）點(diǎn)樣：3）電泳；4）染色；5）漂洗，吸干。1.預(yù)處理：用鑷子取醋酸纖維薄膜2張，識(shí)別出光澤面與粗糙面，將粗糙

35、面朝上放在電泳槽中的緩沖液中浸泡20min。 2.點(diǎn)樣：事先用點(diǎn)樣器在濾紙上點(diǎn)幾個(gè)樣，熟悉一下點(diǎn)樣器的用法。然后把膜條從緩沖液中取出，夾在兩層濾紙內(nèi)用手指快速捋一下，以吸干表面多余的液體，隨即將粗糙面朝上平鋪在玻璃板上。注意，切勿將膜條長(zhǎng)時(shí)間放在濾紙上，以免膜條中的緩沖液過(guò)度吸出。用蓋玻片蘸一點(diǎn)血清，使血清均勻地分布在蓋玻片切面。將蓋玻片在膜條一端23cm處輕輕地垂直落下并隨即提起，這樣即在膜條上點(diǎn)上了細(xì)條狀的血清樣品，每張膜點(diǎn)一個(gè)樣。（要求：輕、勻、直、細(xì)）3電泳：預(yù)先要在電泳槽內(nèi)加入緩沖液，使兩個(gè)電極槽內(nèi)的液面等高，做好濾紙橋。用鑷子將膜條平懸于電泳槽支架的濾紙橋上，要平直。膜條光面朝上，

36、點(diǎn)樣端靠近負(fù)極、且懸空（可用鑷子再將膜條兩端壓服帖一些）。蓋嚴(yán)電泳室，檢查一下電泳槽和穩(wěn)壓電源是否已經(jīng)連接好。通電，調(diào)節(jié)電壓至110V，電泳時(shí)間約為30min。4染色：電泳完畢后，關(guān)上電源開(kāi)關(guān)，用鑷子將薄膜條取下并放在裝有染色液的培養(yǎng)皿中浸泡34min（注意蓋好培養(yǎng)皿的蓋子，以免溶劑揮發(fā)）。5漂洗：將膜條從染色液中取出，在培養(yǎng)皿的邊緣上瀝去表面多余的染色液，依次放入裝有漂洗液的培養(yǎng)皿（共有2套）中漂洗2次（未漂洗時(shí)注意蓋好培養(yǎng)皿的蓋子，以免溶劑揮發(fā)），至色帶清晰的電泳圖譜。三、分析結(jié)果：實(shí)驗(yàn)采用小牛血清故出現(xiàn)三條色帶：清蛋白；1球蛋白；2球蛋白，且清蛋白顏色最深。（本實(shí)驗(yàn)由于時(shí)間有限，授課時(shí)間

37、安排首先由教師簡(jiǎn)單講解實(shí)驗(yàn)步驟并向?qū)W生演示操作方法后指導(dǎo)學(xué)生操作，在電泳的30min里教師給學(xué)生詳盡講解實(shí)驗(yàn)原理，操作步驟及其注意事項(xiàng)。）教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 蛋白質(zhì)顆粒為什么能電泳？依據(jù)什么性質(zhì)？提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè)1.電泳時(shí)，醋酸纖維薄膜點(diǎn)樣的一端應(yīng)靠近哪一極？為什么？2.血清醋酸纖維薄膜電泳可將血清蛋白依次分為哪幾條區(qū)帶？主要參考資料1 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析1、需要強(qiáng)調(diào)點(diǎn)樣方法，避免點(diǎn)樣過(guò)多，重復(fù)點(diǎn)樣等；2、重點(diǎn)講解遷移速率的因素；3、結(jié)合血清電泳在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用，便于學(xué)生更好

38、的理解醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案 第 9次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 血清ALT活性測(cè)定 實(shí)驗(yàn)性質(zhì)綜合性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求掌握血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的基本原理、具體操作方法了解其臨床意義。教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的原理。難點(diǎn)：血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性測(cè)定的方法。實(shí)驗(yàn)材料試劑：0.1mol/L磷酸鹽緩沖溶液、0.4mol/L氫氧化鈉溶液、1mol/L氫氧化鈉溶液、ALT底物液、2，4-二硝基苯肼溶液、丙酮酸標(biāo)準(zhǔn)液。材料：分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、試管、移液管、容量瓶、量筒。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理：丙酮酸可與2，4-二硝基苯肼在酸性溶液中反應(yīng)形成相應(yīng)的2，4-二硝基苯腙，呈黃色，后者在堿性條件下呈紅

39、棕色。通過(guò)測(cè)定其在520nm波長(zhǎng)處的光吸收來(lái)了解丙酮酸的生成量，借此測(cè)定血清ALT的活力，故該類方法又稱比色測(cè)定法。該法雖然也有缺點(diǎn)，但操作簡(jiǎn)便，不需要特殊儀器和試劑，故在臨床上被廣泛應(yīng)用。該法的單位定義是：每lmL血清在pH7.4，37保溫條件下與底物作用30分鐘，每生成2.5g丙酮酸為一個(gè)單位。人血清的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶正常值為240U。二、實(shí)驗(yàn)步驟：1.酶活反應(yīng)體系的配制試劑測(cè)定管（1）測(cè)定對(duì)照管（2）標(biāo)準(zhǔn)管（3）標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照管（4）ALT底物（mL）0.50.50.537度保溫5min（預(yù)熱，可略）血清（mL）0.20.2-丙酮酸標(biāo)液（200ug/ml)-0.2-磷酸buffer（mL）-0

40、.2混勻，37度保溫30min2,4-二硝基苯肼（mL）0.50.50.50.5混勻，37度保溫20minALT底物（mL）-0.50.50.50.4mol/NaOH（mL）5.05.05.05.02.反應(yīng)后吸光值的讀取以dH2O為空白對(duì)照測(cè)四管的A值3.酶活性的計(jì)算公式：教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 什么是酶的比活力？提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 混浴各管后，為何要在10min后，30min內(nèi)測(cè)其吸光值？主要參考資料1 生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，何幼鸞、湯文浩，華師出版社，20132生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，2010總結(jié)分析1、 原理講解要結(jié)合血清ALT活性測(cè)定在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)領(lǐng)域的應(yīng)用；2

41、、 整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中加樣和操作過(guò)程需規(guī)范，否則數(shù)據(jù)差距較大；3、 幫助學(xué)生推導(dǎo)酶活性的計(jì)算公式醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案 第 10次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 維生素C含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求學(xué)習(xí)測(cè)定VC含量的原理和方法掌握微量滴定管使用方法教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：滴定操作難點(diǎn)：計(jì)算方法實(shí)驗(yàn)材料試劑：辣椒勻漿（樣品VC）、標(biāo)準(zhǔn)VC，2，6-二氯酚靛酚溶液。器材：容量瓶，微量滴定管、小三角瓶、1草酸、2草酸、移液管。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理：氧化型2，6-二氯酚靛酚在酸性溶液中呈粉紅色，在中性或堿性溶液中呈藍(lán)色，還原型2，6-二氯酚靛酚無(wú)色。當(dāng)用此染料滴定含有Vc的酸性溶液時(shí)，在Vc未全部氧化前，滴

42、下的染料立即被還原成無(wú)色；一旦溶淀中的Vc全部被氧化時(shí)，則滴下的染料立即使溶液顯示粉紅色，此時(shí)即為滴定終點(diǎn)，表示溶液中的Vc剛剛被氧化完全。因此，從滴定時(shí)2，6一二氯酚靛酚標(biāo)準(zhǔn)液的消耗量，可以計(jì)算出被檢物質(zhì)中Vc的含量。二、實(shí)驗(yàn)步驟：1辣椒勻漿的稀釋取辣椒勻漿7mL（計(jì)為5.0g），裝入小容量瓶，用2草酸稀釋定容至50mL刻度線。2標(biāo)準(zhǔn)VC的滴定 吸取標(biāo)準(zhǔn)VC（0.1mg/mL）1.0ml置于錐形瓶中，加9mL 1草酸混勻，用裝有2，6-二氯酚靛酚的微量滴定管滴定至淡紅色（保持5s不褪去）為終點(diǎn)，記下所用體積V標(biāo)3樣品VC的滴定 從1中取10mL，放入錐形瓶，用2，6-二氯酚靛酚滴定，方法同上

43、，作兩次平行實(shí)驗(yàn)。取消耗體積的平均值，記下體積V樣三、樣品VC濃度的計(jì)算：經(jīng)草酸稀釋后的辣椒勻漿中VC濃度為：每100g純辣椒中含VC的mg數(shù)為：注意：整個(gè)實(shí)驗(yàn)要迅速，以防VC氧化。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) VC作用及缺乏癥提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 本實(shí)驗(yàn)中為何用草酸稀釋VC，而不用純水？主要參考資料1生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，20102生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析1、滴定前要提醒檢查滴定管的氣密性，裝溶液后還要排氣泡，微量滴定管需正確使用；2、結(jié)果計(jì)算較復(fù)雜，幫助推導(dǎo)和理解醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案 第 11次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目

44、 血清膽固醇的測(cè)定實(shí)驗(yàn)性質(zhì)設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求1.學(xué)習(xí)測(cè)定膽固醇的原理2.掌握化學(xué)比色法測(cè)定膽固醇的方法教學(xué)重 點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：血清中膽固醇測(cè)定的原理難點(diǎn)：膽固醇測(cè)定方法實(shí)驗(yàn)材料儀器：離心機(jī)、離心管、試管、刻度吸量管、722型分光光度計(jì)。試劑：10%三氯化鐵溶液、磷硫鐵試劑、膽固醇標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)存液、膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理： 本實(shí)驗(yàn)采用化學(xué)比色法測(cè)定總膽固醇（包括游離型膽固醇和膽固醇酯）。血清經(jīng)無(wú)水乙醇處理后，蛋白質(zhì)沉淀出來(lái)，膽固醇則溶于其中。在乙醇提取液中加磷硫鐵試劑、膽固醇試劑產(chǎn)生紫紅色化合物，顏色深淺與膽固醇總量成正比，可用分光光度計(jì)法測(cè)定。二、實(shí)驗(yàn)步驟：（1）吸取0.1mL血清

45、置于干燥的離心管內(nèi)，先加無(wú)水乙醇0.4mL，搖勻后再加無(wú)水乙醇2.0 mL，搖勻，10 min后離心（3000r/min 5 min），取上清備用。（2）取3支干燥試管，編號(hào)，分別加入無(wú)水乙醇1.0 mL（空白管）、膽固醇標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL（標(biāo)準(zhǔn)管）、上述乙醇提取液1.0 mL(樣品管)，各管皆加入磷硫鐵試劑1.0 mL，搖勻，10 min后分別轉(zhuǎn)移至0.5 cm比色皿愉，用722型分光光度計(jì)在560 nm波長(zhǎng)下比色。三、結(jié)果計(jì)算： 血清膽固醇含量（mg/mL）=A2/A1*0.08/0.04=A2/A1*2式中： A1為標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度；A2為樣品液的吸光度人血清膽固醇的正常含量為2.8-

46、5.7 mmol/L教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì)思考人體內(nèi)膽固醇的生理作用及正常含量提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè) 計(jì)算公式中0.08和0.04各代表什么意義主要參考資料1生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，20102生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010總結(jié)分析1、重點(diǎn)講解血清膽固醇的測(cè)定原理；2、再次復(fù)習(xí)分光光度計(jì)使用要熟練醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案 第 12次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 牛奶中提取酪蛋白實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求1.學(xué)習(xí)從牛乳中制備酪蛋白的方法。2.了解從牛奶中制取酪蛋白的原理。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：從牛奶中制取酪蛋白的原理難點(diǎn)：加乙醇和水的目的實(shí)

47、驗(yàn)材料鮮牛奶、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、抽濾裝置。試劑：95%乙醇；無(wú)水乙醚；0.2mol/L的醋酸-醋酸鈉緩沖液實(shí)驗(yàn)內(nèi)容一、實(shí)驗(yàn)原理：牛乳中的主要蛋白質(zhì)是酪蛋白，含量約為3.5g/100mL。酪蛋白是含磷蛋白質(zhì)的混合物，相對(duì)密度1.251.31，不溶于水、醇、有機(jī)溶劑，等電點(diǎn)為4.7。利用等電點(diǎn)時(shí)溶解度最低的原理，將牛乳的pH值調(diào)至4.7時(shí)，酪蛋白就沉淀出來(lái)。用乙醇洗滌沉淀物，除去脂質(zhì)雜質(zhì)后便可得到純的酪蛋白。二、實(shí)驗(yàn)步驟：1.將5mL牛奶置試管或小燒杯中，在水浴中加熱至40，在攪拌下漫漫加入預(yù)熱至40（應(yīng)注意兩種液體都應(yīng)先預(yù)熱至40再用），pH4.7的醋酸-醋酸鈉緩沖液5ml，用精密pH試紙

48、或酸度計(jì)調(diào)pH至4.7(用1%NaOH或10%醋酸溶液進(jìn)行調(diào)整)。觀察牛奶開(kāi)始有絮狀沉淀出現(xiàn)后，保溫一定時(shí)間使沉淀完全。將上述懸浮液冷卻至室溫。離心分離8min（8000r/min）或15min（2000r/min），棄去上清液，得到酪蛋白粗制品；2.用蒸餾水洗滌沉淀3次（洗滌時(shí)將沉淀顆粒用干凈吸管吹開(kāi)或用毛細(xì)管的封閉一端攪開(kāi)，充分洗滌），離心5min（12000r/min）或10min（3000r/min），棄去上清液；3.在沉淀中加入3mL95%的乙醇，攪拌片刻；4.將沉淀攤開(kāi)在表面皿上，烘干，得酪蛋白精制品；5.稱取所獲酪蛋白的質(zhì)量（g）。4、 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與計(jì)算：計(jì)算含量和得率：酪蛋白含量

49、（g/mL）=酪蛋白（g）/50mL×100%；得率=測(cè)得含量/理論含量×100%。教學(xué)過(guò)程中師生活動(dòng)設(shè)計(jì) 牛奶中蛋白質(zhì)成份，牛奶的營(yíng)養(yǎng)提綱、板書設(shè)計(jì)原理及簡(jiǎn)要操作步驟作業(yè)設(shè)計(jì)另一種方法提取蛋白的方法。主要參考資料1生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)，董曉燕主編，化學(xué)工業(yè)出版社，20102生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教程，王金亭，方俊主編，華中科技大學(xué)出版社，2010課后自我總結(jié)分析1、 學(xué)習(xí)離心機(jī)的使用；2、 等電點(diǎn)的調(diào)節(jié)直接影響得率，PH要調(diào)節(jié)準(zhǔn)確醫(yī)學(xué)生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)教案 第 13次課 2學(xué)時(shí)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目 卵磷脂的提取與鑒定實(shí)驗(yàn)性質(zhì)基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 教學(xué)目的和要求1.掌握卵磷脂的提取鑒定的原理和方法。2.驗(yàn)證卵磷脂水解后的產(chǎn)物，鞏固對(duì)卵磷脂組成結(jié)構(gòu)的認(rèn)識(shí)。教學(xué)重點(diǎn)與難點(diǎn)重點(diǎn)：掌握卵磷脂的提取和鑒定的原理難點(diǎn)：如何去除