醫(yī)療器械無菌試驗檢查標(biāo)準(zhǔn)

1、1 1 / / 7 7醫(yī)療器械無菌試驗檢查要點指南無菌檢驗是無菌醫(yī)療器械產(chǎn)品生產(chǎn)控制過程中的一項重要內(nèi)容。其檢驗方法、檢驗結(jié)果判定及檢驗人員業(yè)務(wù) 能力等因素直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和安全。作為無菌醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)，其無菌檢驗工作應(yīng)由本企業(yè)獨立完成。本指南旨在幫助醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)管人員增強對無菌檢驗相關(guān)知識的認(rèn)識，指導(dǎo)和規(guī)范醫(yī)療器械生產(chǎn)監(jiān)管人員 對醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗過程控制水平的監(jiān)督檢查工作，同時，為醫(yī)療器械生產(chǎn)企業(yè)（以下簡稱生產(chǎn)企業(yè)） 在無菌檢驗的過程管理要求提供參考和依據(jù)。當(dāng)國家相關(guān)法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)、檢查要求發(fā)生變化時，應(yīng)重新修訂本指南。一、適用范圍本指南適用于藥品監(jiān)督管理局組織、實施的醫(yī)療器械生產(chǎn)

2、企業(yè)許可證核發(fā)、變更、換證等現(xiàn)場檢查、醫(yī) 療器械質(zhì)量管理體系考核、醫(yī)療器械生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范檢查、醫(yī)療器械生產(chǎn)日常監(jiān)督等各項涉無菌檢驗的檢查。二、檢查內(nèi)容檢查人員應(yīng)在充分了解生產(chǎn)企業(yè)無菌檢驗活動的情況下，對其無菌檢驗過程的控制水平進行客觀的檢查和評價。一般情況下，檢查人員可按照以下順序開展檢查工作，并適時做好相關(guān)記錄：1 1、了解產(chǎn)品特性及生產(chǎn)企業(yè)選擇的無菌檢驗方法。常見的產(chǎn)品無菌檢查法包括直接接種法和薄膜過濾法。當(dāng)建立產(chǎn)品的無菌檢查方法時，生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)進行方法的驗證，以證明所采用的方法能夠給出正確的結(jié)果。若該產(chǎn) 品的組分或原檢驗條件發(fā)生改變時，檢查方法應(yīng)重新驗證。驗證時，應(yīng)按供試品無菌檢查的規(guī)定

3、及有關(guān)要求進行 操作。對藥典規(guī)定的每一試驗菌應(yīng)逐一進行驗證。驗證試驗也可與供試品的無菌檢查同時進行。2 2、了解檢驗人員的專業(yè)背景、培訓(xùn)情況及工作經(jīng)歷?？赏ㄟ^查看學(xué)歷證書、培訓(xùn)證書或當(dāng)面詢問檢驗人員的 方式，檢查無菌檢驗人員是否具備微生物專業(yè)知識，并經(jīng)過無菌技術(shù)的培訓(xùn)。3 3、 現(xiàn)場察看無菌實驗室。無菌檢查應(yīng)在環(huán)境潔凈度 1000010000 級下的局部潔凈度 100100 級的單向流空氣區(qū)域內(nèi)（如 在萬級潔凈間內(nèi)配置超凈工作臺等）中進行，其全過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染。單向流空氣區(qū)、工作臺面及環(huán)境應(yīng)定期監(jiān)測。4 4、現(xiàn)場察看無菌試驗所需的設(shè)備和器具。其中，主要設(shè)備包括：恒溫培養(yǎng)

4、箱（真菌、細(xì)菌）、恒溫水浴箱、壓力蒸汽滅菌器、電熱干燥箱、電子天平、光學(xué)顯微鏡、集菌儀、過濾裝置（無油真空泵、濾杯、濾頭、濾瓶、微孔濾膜、夾子）等；（從試驗安全性考慮，建議陽性對照試驗使用生物安全柜）主要器具有：試管及試管架、酒精燈、7575%乙醇棉、滅菌刻度吸管（1ml1ml）、滅菌平皿（9cm9cm）、錐形瓶、三角燒瓶、滅菌剪刀、鑷子等。生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)采用可靠方法對與供試液接觸的所有器具滅菌，通常置壓力蒸汽滅菌器內(nèi)121121C3030 分鐘，或置電熱干燥箱內(nèi) 160160C2 2 小時。器具滅菌后必須做好標(biāo)識，標(biāo)明滅菌的時間和使用有效期。器皿在滅菌后，最多1 1 周即用完。檢查時還應(yīng)注意清點

5、培養(yǎng)皿的個數(shù)，與試驗記錄中反映的培養(yǎng)基個數(shù)是否一致。5 5、對照生產(chǎn)企業(yè)有關(guān)無菌試驗的管理制度、操作規(guī)程等相關(guān)技術(shù)文件，要求檢驗人員當(dāng)場操作或口述無菌檢 驗的過程。（1 1）培養(yǎng)基制備生產(chǎn)企業(yè)可按藥典中的處方制備培養(yǎng)基， 亦可使用按該處方生產(chǎn)的符合規(guī)定的脫水培養(yǎng)基。 配制后應(yīng)采用驗 證合格的滅菌程序滅菌。制備好的培養(yǎng)基應(yīng)保存在2 2C2525C、避光的環(huán)境，若保存于非密閉容器中，一般在 3 3 周內(nèi)使用；若保存于密閉容器中，一般可在1 1 年內(nèi)使用。無菌檢查用的硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基及改良馬丁培養(yǎng)基等應(yīng)符合培養(yǎng)基的無菌性檢查及靈敏度檢查的要求。檢查可在供試品的無菌檢查前或與供試品的無菌檢查同時進

6、行。（2 2）供試品的無菌檢查2 2 / / 7 7無菌檢查法包括薄膜過濾法和直接接種法。只要供試品性狀允許，應(yīng)采用薄膜過濾法。供試品無菌檢查所采 用的檢查方法和檢驗條件應(yīng)與驗證的方法相同。無菌試驗過程中，若需使用表面活性劑、滅活劑、中和劑等試劑， 應(yīng)證明其有效性，且對微生物無毒性。無菌操作時，對供試品容器表面應(yīng)用適宜的消毒液進行徹底消毒，如果供試品容器內(nèi)有一定的真空度，可用 適宜的無菌器材（如帶有除菌過濾器的針頭）向容器內(nèi)導(dǎo)入無菌空氣，再按無菌操作起開容器取出內(nèi)容物。（3 3）培養(yǎng)及觀察含培養(yǎng)基的容器按規(guī)定的溫度培養(yǎng) 1414 天。培養(yǎng)期間應(yīng)逐日觀察并記錄是否有菌生長。如在加入供試品后、或

7、在培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁，培養(yǎng) 1414 天后，不能從外觀上判斷有無微生物生長，可取該培養(yǎng)液適量轉(zhuǎn)種至同 種新鮮培養(yǎng)基中，細(xì)菌培養(yǎng) 2 2 天、真菌培養(yǎng) 3 3 天，觀察接種的同種新鮮培養(yǎng)基是否再出現(xiàn)渾濁；或取培養(yǎng)液涂片， 染色，鏡檢，判斷是否有菌。在觀察試驗結(jié)果的過程中， 還應(yīng)考慮假陰性的影響。 其中影響假陰性發(fā)生的因素有： 培養(yǎng)條件不能支持微生 物的生長 （促生長試驗） ；在無菌試驗中，產(chǎn)品中釋放出了殺菌或微生物電解的物質(zhì)（消除抑菌物質(zhì)）；從滅菌處理到培養(yǎng)有一定的時間間隔（確定滅菌后產(chǎn)品的儲存條件及儲存時間）。（4 4）結(jié)果判斷生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)按照如下標(biāo)準(zhǔn)進行判斷：若供試品管均澄清，或雖顯渾

8、濁但經(jīng)確證無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁 并確證有菌生長，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗結(jié)果無效，即生長的微生物非供試品所含。陽性對 照管應(yīng)生長良好，陰性對照管不得有菌生長，否則試驗無效。當(dāng)符合下列至少一個條件時， 方可判試驗結(jié)果無效： 無菌檢查試驗所用的設(shè)備及環(huán)境的微生物監(jiān)控結(jié)果不 符合無菌檢查法的要求；回顧無菌試驗過程，發(fā)現(xiàn)有可能引起微生物污染的因素；供試品管中生長的微生物 經(jīng)鑒定后，確證是因無菌試驗中所使用的物品和（或）無菌操作技術(shù)不當(dāng)引起的。試驗若經(jīng)確認(rèn)無效，應(yīng)重試。重試時，重新取同量供試品，依法重試，若無菌生長，判供試品符合規(guī)定；若 有菌生長，判供試品

9、不符合規(guī)定。6 6、查閱試驗記錄。完整的試驗記錄應(yīng)明確包含下列幾類信息：（1 1）樣品記錄，至少應(yīng)包括：取樣日期、樣品名稱、樣品規(guī)格、樣品批號、取樣地點、取樣方式、取樣人、 原始試驗記錄序號。（2 2）滅菌物品制作記錄1培養(yǎng)基：培養(yǎng)基名稱、培養(yǎng)基批號、培養(yǎng)基用量（g g）、蒸餾水用量（mlml）、培養(yǎng)基分裝數(shù)量、火菌日期、火菌的實際溫度和壓力、滅菌時間、制作人、培養(yǎng)基存放地點和有效期等。2器具：器具名稱、器具數(shù)量、滅菌日期、滅菌的實際溫度和壓力、滅菌時間、制作人、器具存放地點、有 效期等。（3 3） 原始試驗記錄，至少應(yīng)包括：記錄名稱、記錄序號、樣品名稱、樣品唯一性標(biāo)識（例如：樣品號）、樣 品

10、規(guī)格、樣品批號、滅菌批號、樣品數(shù)量、取樣日期、檢驗日期、檢驗依據(jù)、主要試驗設(shè)備及器具、試驗方法、試驗環(huán)境條件、試驗結(jié)果（每日觀察的結(jié)果）、試驗結(jié)論、檢測人、復(fù)核人等。（4 4） 廢棄物處理記錄，至少應(yīng)包括：廢棄物形態(tài)（固體、液體）、廢棄物數(shù)量、滅菌時間和壓力、經(jīng)辦人、 處理日期等。三、其它應(yīng)注意的問題1 1、生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)確保樣品具有代表性：試驗樣品應(yīng)從常規(guī)產(chǎn)品中能夠代表加工過程和條件的批中選擇。選擇樣 品是隨機的。試驗樣品的選擇和處理技術(shù)應(yīng)明確，以免對樣品上所含的微生物的數(shù)量和種類造成污染和改變。試 驗樣品可以選擇制造過程中的不合格產(chǎn)品，它們應(yīng)該代表這個生產(chǎn)批的加工程序和條件。用于試驗的不合格產(chǎn)

11、品 應(yīng)不會影響無菌測試的有效性。2 2、生產(chǎn)企業(yè)對于供試品的選取、轉(zhuǎn)移過程要采取防止污染措施，確保試驗結(jié)果的可靠性。選取制作供試品的 試驗樣品時，樣品包裝須完好無損，尤其是只有一層包裝的樣品。進入無菌檢驗室的樣品若有兩層（或兩層以上） 包裝的，需將外包裝在傳遞窗（或緩沖間）拆除后，傳入實驗室。3 3、 無菌檢驗中接觸供試品的試驗用具溫度不能過高以防可能存在的菌被燙死。對不同種類和不同批次的產(chǎn)品，在拆包裝及夾取樣品時，應(yīng)更換試驗用具（如：剪刀、鑷子）。4 4、進入無菌操作室的所有培養(yǎng)基、供試品等的外表都應(yīng)采用適用的方法進行消毒處理（如：紫外燈照射不少于 3030 分鐘），以避免將外包裝污染的微生

12、物帶入無菌檢驗室。出具試驗結(jié)果后，所有培養(yǎng)物須經(jīng)121121C高壓滅菌3030 分鐘的處理。5 5、由于無菌檢驗時間跨度較長，因此過程的記錄應(yīng)能夠完整體現(xiàn)試驗的全過程，對于在試驗過程中出現(xiàn)的各 種情況，均應(yīng)在記錄中客觀反映。參考資料一：常見的名詞解釋3 3 / / 7 71 1、 滅菌：殺滅或除去特定環(huán)境或物品中一切微生物的過程。目前國際上規(guī)定，滅菌過程必須使滅菌物品污染 的微生物存活率減少到 1010-6及以下。2 2、 微生物：在顯微鏡下才能看到的微小實體，包括細(xì)菌、真菌、原生動物和病毒。3 3、 無菌技術(shù)：是指在微生物試驗工作中，控制或防止各類微生物的污染及其干擾的一系列操作方法和有關(guān)措

13、 施，其中包括無菌環(huán)境設(shè)施、無菌試驗器材以及無菌操作。4 4、 無菌操作：是指在無菌環(huán)境條件下，在對無菌制品或無菌器械進行檢驗的過程中，能防止微生物污染與干 擾的一種常規(guī)操作方法。5 5、 培養(yǎng)條件：用于促進微生物發(fā)育、生長和繁殖的生長培養(yǎng)基和培養(yǎng)方式的組合。6 6、 需氧菌：在代謝中，有氧條件下才能生存的微生物。7 7、 厭氧菌：在代謝中，沒有氧的條件下才能生存的微生物。&抑細(xì)菌/ /抑霉菌試驗：用選定的微生物來演示某些物質(zhì)的存在能夠抑制這些微生物的繁殖。9 9、 促生長試驗：用于證明生長培養(yǎng)基能夠支持微生物生長的技術(shù)操作。1010、 假陰性：實際陽性的無菌試驗結(jié)果被變成了陰性。11

14、11、 假陽性：實際陰性的無菌試驗結(jié)果被變成了陽性。1212、 生物指示物：對特定滅菌工藝有確定的抗力，可供使用的微生物檢驗器材。1313、 化學(xué)指示物：根據(jù)暴露于某種滅菌工藝所產(chǎn)生的化學(xué)或物理變化，在一個或多個預(yù)定工藝參數(shù)上顯示變 化的指示器材。1414、 無菌保證水平（SALSAL : :滅菌后產(chǎn)品上存在單個活微生物的概率。 參考資料二：無菌室空氣中菌落數(shù)的檢查無菌室在消毒處理完畢后，應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)。方法如下：取直徑約90mm90mm 培養(yǎng)皿，無菌操作注入融化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約 20mL20mL 在 3030C3535C培養(yǎng) 4848 小時證明無菌后，取 3 3 只培養(yǎng)皿在無菌室操作

15、臺或超凈工作臺平 均位置打開上蓋，暴露 3 30 0分鐘后蓋好，置 3030C3535C培養(yǎng) 4848 小時后取出檢查，3 3 只雙碟上生長的菌落數(shù)平均不 得超過 1 1 個。無菌試驗過程中應(yīng)檢查空氣中的菌落數(shù)，方法同上。在試驗開始進行時打開平皿蓋，至試驗結(jié)束蓋 好照上法培養(yǎng)，應(yīng)符合上述要求。參考資料三：供試品數(shù)量的選擇檢驗數(shù)量是指一次試驗所用供試品最小包裝容器的數(shù)量。除另有規(guī)定外，出廠產(chǎn)品按藥典附錄XMB B 中表 1 1規(guī)定；上市產(chǎn)品監(jiān)督檢驗按表 2 2、表 3 3 規(guī)定。表 1 1、表 2 2、表 3 3 中最少檢驗數(shù)量不包括陽性對照試驗的供試品用量。一 般情況下，供試品無菌檢查若采用薄膜過濾法，應(yīng)增加1/21/2 的最小檢驗數(shù)量作陽性對照用；若采用直接接種法，應(yīng)增加供試品 1 1 支（或瓶）作陽性對照用。執(zhí)行 GB/T14233.2GB/T14233.2 的供試品數(shù)量應(yīng)滿足同一批號 3 31111 個單位供試品。檢驗量是指一次試驗所用的供試品總量（g g 或 mlml）。除另有規(guī)定外，每份培養(yǎng)基接種的供試品量按表2